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1、乳制品质量安全监督抽查检验细则时间：2007-08-31前 言为保障人民群众身体健康，全面推进无公害农产品行动计划”,保证乳制品质量安全，指导有关检验机构进行乳制品质量安全监督抽查检验工作，特制定本检验细则，作为组织监督抽查的依据。本标准所列的检验项目与法律、法规、规章有不一致时，应以法律、法规、规章的规定为准。初准的附录A为规范性附录。本标准由浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。本标准起草单为：浙江方圆食品与农副产品质量安全检测中心。好准主要起草人：何乔桑 陈自力 赵淑娟 陈小珍 盛华栋乳制品质量安全监督抽查检验细则1范围本标准规定了乳制品的分类、检验项目、检验方法、抽样方法及判
2、定原则。本标准适用于浙江省境内生产或销售的乳制品的质量监督抽查。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB 4789.3食品卫生微生物学检验大肠菌群测定GB 4789.4食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.5食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验GB 4789.10食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验GB 4
3、789.11食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验GB 4789.18食品卫生微生物学检验乳与乳制品检验GB/T 5009.11食品中总神的测定方法GB/T 5009.12食品中铅的测定方法GB/T 5009.17 食品中总汞的测定方法GB/T 5009.24 食品中黄曲霉素阳和B】的测定方法GB/T 5009.29 食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法GB/T 5409 牛乳检验方法GB/T 5413.32 乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定3产品分类乳制品分以下三类：巴氏杀菌乳、灭菌乳、酸牛奶。4检验项目检验项目见表1、表2、表3。表1巴氏杀菌乳检测项目序号检验项目|要求铅（以Pb计）,mg/kgl 0.
4、052|神（以As计），mg/kg卜0.23汞（以Hg计）mg/kgl 0.01表1（续）表2灭菌乳检测项目序号检验项目要求1铅（以 Pb计），mg/kg 0.052碑（以 As 计），mg/kg 0.23汞（以 Hg 计），mg/kg 0.014硝酸盐（以NaNO3计），mg/kg 8.05亚硝酸盐（以NaNO2计），mg/kg 0.26黄曲霉毒素Mi, ug/kg 0.27青霉素不得检出8链霉素不得检出9商业无菌商业无菌5 检验方法5.1神的测定按 GB/T 5009.11 执行。5.2铅的测定按 GB/T 5009.12 执行。5.3汞的测定按 GB/T 5009.17 执行。5.4硝酸
5、盐及亚硝酸盐的测定按 GB/T 5413.32 执行。5.5山梨酸、苯甲酸的测定按 GB/T 5009.29执行。5.6黄曲霉素M1的测定按 GB/T 5009.24 执行。5.7青霉素的测定按GB/T 5409执行。5.8链霉素的测定按附录A执行5.9菌落总数的测定按 GB 4789.2 和 GB 4789.18 执行。5.10大肠菌群的测定按 GB 4789.3 和 GB 4789.18 执行。5.11致病菌的测定按 GB 4789.4、GB 4789.5、GB 4789.10、GB 4789.11 和 GB 4789.18 执行。6 抽样方法6.1抽样方法采取随机抽样的方法进行抽样。6.
6、2样品数量规格250mU勺样品，抽取样品数量为5瓶（盒），其中3瓶（盒）用作检验，2瓶（盒）作为备样封存留企业，规格 250mL的样品，抽取样品数量加倍。6.3注意事项 6.3.1抽样人员抽样时应填写好浙江省农产品质量监督检查抽样单，样品用塑料袋包装，贴好样品标志，并经受检单位或个人对其有效性进行确认。 样品标志的格式统一，包括以下内容：产品名称、种类、抽样地点、抽样时间、抽样人姓名及签字、见证人姓名及签字。6.3.2抽样后应尽快将样品送至检验机构进行检验。6.3.3抽样单位或人员应采取必要的措施，保证送检样品满足检验需要。7 判定原则抽检全部项目符合标准要求，判定该批产品为合格；有一项或一项
7、以上项目不符合标准要求时，判定该批产品为不合格。8 复检受检方对检验结果异议时，可申请复检。复检指对备样进行检验。复检申请向原检验机构提出，原检验机构应在3个工作日内作出受理或不受理决定。若受检方对不受理决定仍有异议，可向浙江省农产品质量安全监督检测协调会议办公室提出。不合格结果以检验结果通知书的形式送达受检方，受检方应在收到不合格通知书之日起 3日内提出复检申请，逾期不予受理。附录A（规范性附录）乳制品中链霉素残留的测定A.1测定原理测定的基础是抗原抗体反应。微孔板包被有结合到蛋白上的链霉素（固相），链霉素抗体、链霉素酶标记物、标准或样品溶液或样本加入后，游离链霉素与链霉素酶标记物竞争链霉素
8、抗体。没有被结合的酶标记物在洗涤时被除去，将酶基质（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到微孔中并孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的物质，加入反应停止液后，使微孔中的颜色由蓝转变为黄色。在450nm处进行吸光度测量，吸收度与样品中的链霉素浓度成反比，通过计算比例可以获得样本中链霉素的浓度值。A.2试剂和材料A.2.1酶标免疫分析定量测定链霉素残留试剂盒。德国R-Biopharm公司制造。A.2.2正己烷。A.2.3 Carrez I: 0.36mol/L 铁氧化钾（II） ? H2O。A.2.4 CarrezII: 1.04 mol/L 硫酸锌7 H2O。A.2.5 PBS缓冲
9、液：（0.55g NaHzPOTkO; 2.85g NazHPO, NH2O+9gNaCl + 0.1%吐温 20,加入蒸僧水至 1000mL）。A.3仪器和设备A.3.1微孔板酶标仪（450nm）。A.3.2离心机。A.3.3振荡器。A.3.4混合器。A.3.5磁搅拌器。A.3.6 251 50口 L, 100（1 L, 1000 微量加样器。A.4样品处理A.4.1脱脂牛奶用PBS-Tween缓冲液以1:40（25 口件奶+975皿缓冲液）稀释，取50皿进行测定。A.4.2脂肪牛奶150C离心10分钟（3000转/分钟），去除脂肪（如无冷冻离心机请予冷却样品）。去除上层脂肪，用PBS-Tw
10、een缓冲液以1:40稀释脱脂牛奶，取50（1L进行测定。A.5工作液的准备制备标准应用液：50uLuL标准浓缩液用450口暖冲液稀释并混合均匀，不要用塑料瓶而用玻璃瓶。标准液1: 50 H标准浓缩液1用450皿缓冲液稀释 0口 g/kg标准液2: 50 口 L标准浓缩液2用450 缓冲液稀释 0.5 口 g/kg标准液3: 50 H标准浓缩液3用450 口 L缓冲液稀释2g/kg标准液4: 50 口 L标准浓缩液4用450 口 L缓冲液稀释 8 口 g/kg标准液5: 50 H标准浓缩液5用450 口 L缓冲液稀释 32 口 g/kg标准液6: 50 口 L标准浓缩液6用450 口 L缓冲液
11、稀释128 口 g/kg每一批实验所用的标准液应当按上述要求重新制备。A.6实验步骤A.6.1使用之前将所有的试剂回升至室温20C-24C。A.6.2将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，标准和样品做两个平行实验，记录下标准和样品的位置。A.6.3加入50H稀释了的酶标记物到微孔底部，再加入50皿的标准或处理好的样品到各自的微孔中。标准和样品做两个平行实验。A.6.4加入50皿稀释了的抗体溶液到每一个微孔底部充分混合，在室温孵育2小时，覆盖上薄膜（防止蒸发）。A.6.5倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每行拍打3次）以保证完全除去孔中的液体.用250皿蒸僧水充入孔中，再次倒掉微孔
12、中液体 再重复操作两次。A.6.6加入50皿基质和50L发色试剂到微孔中，充分混合并在室温暗处孵育30分钟。A.6.7加入100H反应停止液到微孔中.，混合好在450nm处测量吸光度值，以空气为空白。必须在加入停止液后60分钟内读取吸光度值。A.7结果计算所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准（0标准）的吸光度值再乘以100。因此0标准等于100%并且以百分比给出吸光度值。标准的吸光度值（或样品）。计算的标准值绘成一个对应链霉素浓度（ng/kg的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在2ug/kg-32ug/kg范围内应当成为线性.。相对应每一个样品的浓度 （1 g /kg）T以从校正曲线上读出。本方法牛奶中链霉素的检测限是20 口 g/kgA.8注意事项A.8.1保存试剂盒于20C -80C，不要冷冻。A.8.2在使用中不要让微孔干燥。A.8.3在EIA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照推荐的洗板顺序操作是 EIA测定程序中的要点。A.8.4在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖子盖住微孔板。A.8.5无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。A.8.6为提高回收率，将进样及洗脱速度定为10滴/分钟，并将甲醇洗脱液的数量定为 2mL。回收率大于90%
