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1、LSM 880 Basic Operation MultiChannel ; b b、预热结束后“、预热结束后“statusstatus”显示”显示 “ReadyReady”后选择“”后选择“OnOn”；”； 9 9、随后可以开始共聚焦成像、随后可以开始共聚焦成像 Startup and Shutdown of the System 2016-05-157 Startup of the System Startup and Shutdown of the System 2016-05-158 Shutdown of the System 关机过程基本类似开机的倒序过程：关机过程基本类似开机的倒
2、序过程： 1 1、关闭金属卤化物灯；、关闭金属卤化物灯； 2 2、关闭激光器，在“、关闭激光器，在“powerpower”中选择”中选择 “offoff”，关闭已打开的激光器：”，关闭已打开的激光器： 3 3、关闭、关闭ZENZEN软件；软件； 4 4、关闭电脑；、关闭电脑； 5 5、关闭电脑后等待激光器冷却约、关闭电脑后等待激光器冷却约5min,5min, 此时此时ArgonArgon激光器的风扇停转；激光器的风扇停转； 6 6、按顺序关闭“、按顺序关闭“COMPONENTSCOMPONENTS” “SYSTEM/PCSYSTEM/PC” “MAIN SWITCHMAIN SWITCH” 7
3、 7、关闭稳压电源。、关闭稳压电源。 Agen da 2016-05-159 1 2 3 4 5 6 Startup and Shutdown of the System Acquiring Multi-Channel images Z-stack image Time Series image Tile Scan Airyscan Imaging Acquiring Multi-Channel images 2016-05-1510 1 1、在“、在“LocateLocate”界面下选择快捷键，”界面下选择快捷键， 在镜下观察需要拍摄的样品区域，在镜下观察需要拍摄的样品区域， 把需要拍摄的区
4、域放在视野中央。把需要拍摄的区域放在视野中央。 Acquiring Multi-Channel images 2016-05-1511 2 2、进入“、进入“AcquisitionAcquisition”界面；”界面； 3 3、选择之前保存好的光路设置、选择之前保存好的光路设置“channelchannel”和“”和“Acquisition modeAcquisition mode”设置”设置 4 4、或者新建光路设置、或者新建光路设置“Smart SetupSmart Setup” 2 2 3 3 4 4 ZEISS, Lu Xi, MIC 5 5、“、“smart setupsmart s
5、etup”中选择染料名称，并选择拍”中选择染料名称，并选择拍 摄方式后，“摄方式后，“ApplyApply” 三种拍摄方式：三种拍摄方式： A A、FastestFastest 拍摄速度最快，拍摄速度最快， 发射波长接近的荧光染料间存在发射波长接近的荧光染料间存在 串色现象；串色现象； B B、Best signalBest signal 拍摄速度最慢；拍摄速度最慢； 基本避免了发射荧光的串色；基本避免了发射荧光的串色； C C、SmartestSmartest（LineLine） 结合上述两者优势，减少串色结合上述两者优势，减少串色 的同时拍摄速度的同时拍摄速度 较快，但是光路较快，但是光路
6、 中硬件设置不能改变。中硬件设置不能改变。 固定样本推荐使用固定样本推荐使用Best signalBest signal、变、变 化较快的样化较快的样 本推荐使用本推荐使用SmartestSmartest或或 者者FasterFaster 2016-05-1512 Smart SetupApply之后如左图所示，若需要拍摄明场或DIC图像，则需要点击Channels中相应Track使其处 于高亮。如中图，勾选T-PMT。如右图，T-PMT出现在A488之下，并在下方可调节T-PMT采集的参数。 ZEISS, Lu Xi, MIC Channe ls 2016-05-1514 6 6、在在“li
7、velive”状态状态下设置下设置ChannelsChannels中的激光强度中的激光强度 “LaserLaser”，针孔大小针孔大小“PinholePinhole”，检测器检测器“GainGain” 值值，以及以及“D Digitaligital gaingain”或或“D Digitaligital offsetoffset” （主要设置主要设置GainGain MasterMaster，不建议调节不建议调节“Digital“Digital gain”gain”和和“Digital“Digital offset”offset” ）；每个；每个tracktrack单独设单独设 置置，所以每次
8、只勾选一个所以每次只勾选一个tracktrack，并选中该并选中该track(track(选选 中中tracktrack高亮高亮) )； A A、“PinholePinhole”一般设置为一般设置为1 1AUAU，增大增大PinholePinhole可以提可以提 高图像亮度高图像亮度，但会增加非焦面信息；减少但会增加非焦面信息；减少PinholePinhole可可 以增加景深以增加景深，但是会减少图像亮度；但是会减少图像亮度； B B、“GainGain”和和“DigitalDigital GainGain”增加可以增加图像增加可以增加图像 亮度亮度，但是也会提高背景噪音但是也会提高背景噪音。
9、（ digitaldigital offsetoffset 建议为建议为0 0；DigitalDigital GainGain 建议为建议为 1 1） 设置原则保证图像不要过曝，尽量设置原则保证图像不要过曝，尽量 减少背景噪音：减少背景噪音： 在在livelive下选择“下选择“range indicatorrange indicator” 可以显示出曝光程度可以显示出曝光程度：红色为过曝：红色为过曝 2016-05-1515 Acquisition Mode 2016-05-1516 7 7、在、在Acquisition ModeAcquisition Mode下主要设置如下参数下主要设置如
10、下参数: : A A、通过、通过scan areascan area选择扫描区域或通过图像窗选择扫描区域或通过图像窗 口下的“口下的“cropcrop”选择扫描区域；”选择扫描区域； Acquisition Mode B B、设置、设置speedspeed：扫描速度越慢，：扫描速度越慢， 信噪比越好，信噪比越好，但光漂白越多；但光漂白越多； C C、AveragingAveraging：增加：增加 averagingaveraging次数可以减少次数可以减少 噪音，噪音， 但会增加扫描时间；但会增加扫描时间； D D、DirectionDirection：双向扫描可以：双向扫描可以 减少扫描时
11、间；减少扫描时间； E E、Frame SizeFrame Size：一般选择：一般选择 512512512512或或 1024102410241024，图，图 像越大，扫描时间越长像越大，扫描时间越长 2016-05-1517 8 8、选择需要成像的、选择需要成像的tracktrack，单击“，单击“SnapSnap”；”； 获得一张多通道图像。获得一张多通道图像。 Acquiring Multi-Channel images 2016-05-1518 Experiment Manager and Reuse 2016-05-1519 可以通过可以通过Experiment ManagerEx
12、periment Manager来保存拍摄来保存拍摄 的参数，或打开已经保存的图片（的参数，或打开已经保存的图片（cziczi格格 式），通过“式），通过“ReuseReuse”来调用上次拍摄的”来调用上次拍摄的 参数设置参数设置 Agen da 2016-05-1520 1 2 3 4 5 6 Startup and Shutdown of the System Acquiring Multi-Channel images Z-stack image Time Series image Tile Scan Airyscan Imaging ZEISS,LuXi,MIC2016-05-15 2
13、0 Z-stack image First/Last 1 1、选择、选择Z Z- -stackstack； 2 2、在、在livelive下调节焦距选择层扫图像的上下范围：“下调节焦距选择层扫图像的上下范围：“set firstset first”和“”和“set lastset last”；”； 3 3、单击“、单击“optimaloptimal”让间距在最适合范围；”让间距在最适合范围； 4 4、单击“、单击“Start ExperimentStart Experiment” Z-stack image 2016-05-1522 Center 1 1、centercenter模式下，模式下
14、，livelive下选择成下选择成 像的中间位置，单击“像的中间位置，单击“centercenter” ，然后设置需要层扫的层数，然后设置需要层扫的层数 SlicesSlices，并单击“，并单击“optimaloptimal”；”； 2 2、单击“、单击“Start ExperimentStart Experiment” Z-stack image 2016-05-1523 Match Pinhole 多通道荧光拍摄多通道荧光拍摄Z Z- -stackstack需需 要考虑光切厚度不一要考虑光切厚度不一 致的致的 问题：问题： 1 1、可以通过点击“、可以通过点击“Match Pinhole
15、Match Pinhole”自动调节不”自动调节不 同同 tracktrack的针孔使光切厚度相的针孔使光切厚度相 似；似； * *这种方法的缺点在于可能这种方法的缺点在于可能 会使长波长的针孔过会使长波长的针孔过 于小于小 ，不利于弱荧光成像。，不利于弱荧光成像。 Z-stack image 2016-05-1524 Match Pinhole 2 2、通过手动调节针孔、通过手动调节针孔 到一致，可以保证荧到一致，可以保证荧 光强度的同时，保证光强度的同时，保证 光切厚度一致。光切厚度一致。 Agen da 2016-05-1525 1 2 3 4 5 6 Startup and Shutd
16、own of the System Acquiring Multi-Channel images Z-stack image Time Series image Tile Scan Airyscan Imaging Time Series image 2016-05-1526 1 1、选择“、选择“Time SeriesTime Series”；”； 2 2、拍摄要进行的循环数、拍摄要进行的循环数cyclescycles； 3 3、循环之间的间隔、循环之间的间隔IntervalInterval； intervalinterval：两次循环开始时间的间隔，因此：两次循环开始时间的间隔，因此intervalinterval包含了上一个循环包含了上一个循环 的拍摄时间；的拍摄时间； 4 4、“、“Start ExperimentStart Experiment” Agen da 2016-05-1527 1 2 3 4 5
