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1、TTC 溶液的配制：取 3g TTC 溶于 1L 蒸馏水或冷开水中，配制成 01的 TTC 溶液。药液 PH 应在 6575 ，以 PH 试纸试之( 如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)。【方法】1将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水(30)浸泡 26H ，使种子充分吸胀。2随机取种子 2 份，每份 50 粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。3把切好的种子分别放在培养皿中，加 TTC 溶液，以浸没种子为度。4放入 3035的恒温箱内保温 30Min。也可在 20左右的室温下放置 4060Min。5保温后，倾出药液，用自来水冲洗 23 次，立即观察种胚着色情况，
2、判断种子有无生活力植物根系活力的测定 （TTC 法）一、原理氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 （TTF） ，如下式：生成的三苯甲 （TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的 TTC 还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。（二）试剂1. 乙酸乙酯（分析纯） 。2.
3、次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯） ，粉末。3. 1TTC 溶液：准确称取 TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到 100 mL。用时稀释至需要的浓度。4. 磷酸缓冲液（1/15 mol/L， pH7.0） 。5. 1 mol/L 硫酸：用量筒取比重 1.84 的浓硫酸 55 mL，边搅拌边加入盛有 500 mL 蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至 1000 mL。6. 0.4 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸 4.72 g，溶于水中，定容至 100 mL 即成。（三）仪器设备小烧杯 3 个，研钵 1 个，移液管：0.5 mL 1 支、10 mL 1 支、5 mL 3 支，刻度试管 6 支，分光光度
4、计，分析天平（感量 0.1 mg） ，电子顶载天平（感量 0.1 g） ，温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。三、实验步骤 1. 定性测定（1）配制反应液 把 1 TTC 溶液、0.4 molL 的琥珀酸和磷酸缓冲液按 1:5:4 比例混合。（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置 37左右暗处放 13 h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。2. 定量测定（1）TTC 标准曲线的制作 取 0.4 TTC 溶液 0.2 mL 放入大试管中，加 9.8 mL 乙酸乙酯，再加少许 Na2S2O4 粉末摇
5、匀，则立即产生红色的 TTF。此溶液浓度为每毫升含有 TTF 80 g。分别取此溶液 0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL 置 10 mL 刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含 TTF 20 g、40 g、80 g、120 g、160 g 的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在 485 nm 波长下测定吸光度，绘制标准曲线。（2）称取根尖样品 0.5 g，放入小烧杯中，加入 0.4 TTC 溶液和磷酸缓冲液（pH7.0 ）各 5 mL，使根充分浸没在溶液内，在 37下暗保温 1 2 h，此后立即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL，以停止反应。 （与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上） 。（3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯 34 mL，充分研磨，以提出 TTF。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤 23 次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL，用分光光度计在波长 485 nm 下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出 TTC 还原量。四、结果计算根系活力= C/(1000*W*h) mg TTF/（gh）式中：C四氮唑还原量， g。W根重，g。h时间，h。
