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1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案文件编码：项 目姓 名签 名日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份 硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案目录1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划2、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组名单3、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案4、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证培训记录5、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证附属记录6、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告7、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证合格证书硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划根据我公司认证领导小组的要求及验证委员会的安排，对硫乙醇酸
2、盐流体培养基配制和灭菌方法进行验证，具体安排如下：一、年月日年月日，制定验证方案，由硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组组长负责起草。二、年月日年月日，验证方案讨论、修改、审批和培训。三、年月日年月日，验证工作实施。 四、年月日年月日，根据验证情况与记录，书写验证报告。五、年月日年月日，验证报告审核批准，合格证发放。硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组名单组 长： 成 员： 1、 目的通过验证验证所采用的硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法，适合于我公司硫乙醇酸盐流体培养基的制备，为质量控制试验提供优质培养基。并培养基配制和灭菌的操作方法，为培养基配制和灭菌人员提供正确的操作方法，使
3、培养基配制和灭菌标准化、程序化。2、 适用范围本方案适用于本公司硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌方法的验证。3、 内容1. 概述 培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照培养基厂商提供的使用说明配制，如质量/体积、PH、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、PH的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应通过适用性检查试验进行验证。此外，对高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证
4、在一定的装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基的过热，过度灭菌可能会破坏绝大多数的细菌和真菌培养基促生长的质量。灭菌器中的培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。根据培养基的特性，按制定的方法进行配制和灭菌，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行培养基的配制和灭菌，若不符合，重新制定方案，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。2. 验证项目及认可标准验证内容验证项目验证标准配制灭菌前的pH7.2-7.4灭菌灭菌温度121灭菌时间15分钟灭菌效果（F0值）12灭菌后pH值6.9-7.3
5、灭菌后外观性状符合规定适用性检查灵敏度检查符合规定无菌性检查符合规定有效期验证保存三周外观性状符合规定灵敏度检查符合规定无菌性检查符合规定连续验证3次配制的硫乙醇酸盐流体培养基。3. 验证依据3.1. SN/T1538.1-2005培养基制定指南3.2. 药品生产验证指南（2003版）（国家食品药品监督管理局）3.3. 药品生产质量管理指南（2010版）3.4. 中华人民共和国药典（2010年版二部）3.5. 中国药品检验标准操作规程（2010年版）4. 验证方法与内容4.1. 实验准备4.1.1. 器具：电磁炉（最大功率2000W）、大烧杯（2000ml）、不锈钢锅、玻璃棒、25250ml试
6、管、硅胶塞、细绳、牛皮纸、分析天平、药匙、量筒（100ml、1000ml）等。名称生产厂家型号校验情况生化培养箱电热恒温培养箱自动台式灭菌器电子天平数字酸度计生物安全柜超净工作台4.1.2. 设备4.1.3. 培养基及试剂名称生产厂家批号纯化水硫乙醇酸盐流体培养基营养肉汤培养基营养琼脂培养基氢氧化钠稀盐酸嗜热脂肪芽胞菌（F012）4.1.4. 验证用菌株 来源于贵州省药品检验所验证菌株菌株代数培养基培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌4.2. 验证内容4.2.1. 执行标准a. 配制容器及配套器具的清洗严格按照玻璃器皿清洗操作规程执行。b. 培养基的配
7、制严格按照培养基管理规程执行。c. 自动台式灭菌器严格按照TMQ.R-3870型台式灭菌器使用维护保养操作规程执行.d. 取同一批硫乙醇酸盐流体干粉培养基配制三批进行以下验证。4.2.2. 配制灭菌过程a. 称量 取硫乙醇酸盐流体干粉培养基29.25克,加纯化水1000ml,加热煮沸使其完全溶解。每次按照此处方量配制8547ml。b. 灭菌前的pH值测定 取已配制好的硫乙醇酸盐流体培养基100ml，放冷至25调节PH值至7.2-7.4范围内。以此比例来调节剩下的培养基的pH值。c. 分装 将已调节好PH值的硫乙醇酸盐流体培养基分装至25250ml试管中，分装的管数为190200管范围，用牛皮纸
8、按40管/捆的方式包扎结实。其中一管只装约20ml，以备灭菌后最终pH值测定。d. 灭菌器中的培养基的数量及装载方式（满载） l 将分装好的5捆（40管/捆）培养基试管置于灭菌器中，按下图A、B、C、D、E 5点放置。 A B C 灭菌器柜门 D E l 指示菌的放置：将指示剂嗜热脂肪芽孢菌（菌浓度：1.69106cfu/支）5支各放入5捆培养基中间的其中一支试管，同时将已编号的5支校正好的留点温度计插入6支待灭菌培养基试管内，开始灭菌。l 将已装载好的硫乙醇酸盐流体培养基在121条件下灭菌15分钟。灭菌结束后记录各留点温度计点温度。同时取出5支已灭菌嗜热脂肪芽孢菌，直接置5660培养2448
9、小时，另取一支未经灭菌的嗜热脂肪芽孢菌指示剂一起培养，作为阳性对照。l 根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为黄色为不合格。对照管应由紫色变为黄色为该指示剂有效。e. 灭菌后的pH值的测定 取20ml管已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基，放冷至25测定pH值，应在6.9-7.3范围内。f. 外观性状 l 灭菌后培养基应对其外观性状仔细检查，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。l 贮存中培养基发生颜色变化、浑浊；固体培养基表面产生裂缝或涟漪等异常现象，不符合使用规定时，应停止使用，重新进行配制和灭菌程序验证。4.2.3. 硫乙醇酸盐流体培养基的适用
10、性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。a. 无菌性检查 每批培养基随机取5支（瓶），培养14天，应无菌生长。b. 灵敏度检查l 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，3035培养1824 小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100cfu（菌落形成单位） 的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用，若保存在28，可在24 小时内使用。l
11、 培养基接种 取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养三天，逐日观察结果。l 结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。5. 组织实施5.1. 验证机构的组成5.2. 公司验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织、审批验证方案和验证报告、发放验证证书。5.3. 硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调实施，负责验证样品检测，完成各项记录，根据检验和验证结果进行评定、完成
12、验证报告。部门部门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写报告操作实施质量部取样、检验、出报告操作实施验证委员会方案审定、批准、实施、发放验证合格证方案审核方案批准4、 附件及相关表格文件硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告文件编码：项 目姓 名签 名日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份1、 验证概述 培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。 中华人民共和国药典2010年版二部规定：在实验室中，若采用已验证的配置和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可只进行一次。本公司
13、采用的培养基均是北京三药科技开发公司生产的市售脱水培养基。为规范生测实验人员在配制培养基时标准化、程序化并符合中华人民共和国药典2010年版二部规定，特对培养基的配制程序进行验证。1. 验证组织与实施1.1. 验证小组成员及职责分工部门部门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写报告操作实施质量部取样、检验、出报告操作实施验证委员会方案审定、批准、实施、发放验证合格证方案审核方案批准1.2. 本验证由质量部负责并由相关人员根据硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案所规定的方法与步骤实施。2. 实施时间为：年月日年月日。2、 各项目验证结论1. 灭菌前后pH值 日期： 年 月 日配制批号灭菌前pH值灭菌后pH值结果判定
