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1、毕业论文开题报告生物技术三疣梭子蟹的蜕皮分期方法一、选题的背景与意义三疣梭子蟹，俗称梭子蟹、白蟹，属于甲壳纲、十足目、梭子蟹科，是中国沿海的重要经济蟹类。其生长迅速，养殖利润丰厚，已经成为中国沿海地区重要的养殖品种。梭子蟹一般在3-5米深海底生活及繁殖，冬天移居到10-30米的深海，喜在泥沙底部穴居。其适应盐度为16-35，水温在4-34，PH值在7-9之间，最适盐度为26-32之间，最适温度在22-28。水质要求清新、高溶氧，当环境不适应或脱壳不遂时有自切步足现象，步足切断后能再生。三疣梭子蟹蜕皮的过程即生长发育的过程，刚蜕完壳的软壳蟹的体积比蜕壳前增加了30%-40%,其壳通过环境中的钙盐
2、等不断硬化而恢复正常硬度，三疣梭子蟹的个体增长在外表上并不连续，而是呈阶梯形，每蜕一次皮，上一个台阶。由此可见，三疣梭子蟹的生长发育与蜕皮息息相关，促进蜕皮的发生，可促进其发育成熟，提高产量。三疣梭子蟹养殖过程中出现的蜕皮过频，蜕皮未遂等问题导致产量大幅度下降的重要原因是缺乏对其蜕皮周期的了解。了解蜕皮发生的时间，周期的长短对促进沿海三疣梭子蟹养殖业的发展非常重要。目前，一些经典十足目甲壳动物的蜕皮周期的建立是根据外部形态特征的变化，如身体不同部位壳的硬化程度、颜色变化、饮食情况等方法而建立的。但是这些鉴定方法比较主观，而且只适用于蜕皮后期并不适用于蜕皮前期的判断。用对其外骨骼进行显微结构观察
3、的方法可以得到蜕皮前期精确的判断标准，如Khadra等对雪蟹（Chionoecetes opilio）第四对步足掌节的外表皮进行了组织学观察，并对其蜕皮前期作了细分。但是当样品数量很大的时候，这种方法比价繁琐不够快捷方便。Drach（1939）和Drach和Tchernigovtzeff（1967）建立一种在蜕皮周期中以附肢尖端刚毛的形态学变化为基础的判断标准。此方法因快速准确等优点被众多学者广泛用于不同种类甲壳动物蜕皮分期的判断，如James对墨尔吉虾（Penaeus merguiensis）的腹肢表皮和刚毛锥生长变化作了研究，并对其整个蜕皮周期进行了详细的划分。Moriyasu（1986）
4、利用雪蟹小颚内肢尖端表皮及刚毛的变化而对其蜕皮前期进行了细分。但是，这些方法都停留在定性的层面上划分虾蟹类的蜕皮周期。本课题是提供一种快速、方便、活体观察的方法对三疣梭子蟹的蜕皮周期进行细分。主要利用三疣梭子蟹游泳足址节（末节）新旧表皮的厚度变化（新旧表皮的间距与旧表皮的厚度的比值R来对其蜕皮周期进行划分，首次用到了量化的方法来反映新旧表皮的厚度关系，客观形象地描述了蜕壳周期中新旧表皮的更替过程。在蜕皮后期的判断中，也用到了梭子蟹身体各部位壳的硬度变化。头胸甲腹部和螯足长节背面蜕壳缝的裂开是判断临近蜕壳的标志。三疣梭子蟹蜕皮周期的细分为后期工作如生理生化功能研究，激素的变化规律，软壳蟹的大规模
5、生产提供一定的理论基础。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题：研究的基本内容：本实验主要是获得未经过生殖蜕皮的三疣梭子蟹样品，切取其游泳足趾节的最末端并进行显微观察。拟解决的问题：提供一种快速、方便、活体观察的量化方法对三疣梭子蟹的蜕皮周期进行细分。三、研究的方法与技术路线：（一）研究方法1. 实验材料购自宁波宁海长街得水育苗场（自海中捕捞后在养殖池中暂养）的三疣梭子蟹，体宽（CW）在8-12cm之间，体重（CH）在45-80之间，数量为500只，其中300继续在池中暂养，用于蜕皮后期、蜕皮间期判断的样品。200只养在底面铺有沙子的塑料筐内置于池中，并投以蛏子饵料进行饲养，主要用于蜕皮前期，蜕
6、皮中判断的样品，采的实验样本均为未经过生殖蜕皮的三疣梭子蟹，蜕皮周期一般为15-20天左右。2.实验方法与步骤（1）对样品进行标号，量体宽，称体重。（2）用解剖剪剪去游泳足趾节的最末端置于干净载玻片上（滴一滴海水）放在显微镜（OLYMPUS CX21FS，放大倍数为10-10）下观察，事先用OPLENIC5818观测目 镜将显微镜与电脑相连。选择游泳足趾节观察的好处有两点，第一它呈扁平半透明状态，易于观察，第二解剖容易，也可活体观察，对实验梭子蟹的伤害降到最小。游泳足趾节尖端纵向有一条缝将之平分成两半，为了确保实验的精确性，观察点需保持一致，即为弧度较大的那一侧，离尖端距离为3mm左右的位置进
7、行观察拍照。（3）观察照片并测量，对三疣梭子蟹蜕皮周期的各个阶段进行定性描述和定量分析。（二）技术路线样品蟹的游泳足趾节的最末端的切取显微镜下观察不同时期的样品切片对观察结果进行拍照观察照片，对三疣梭子蟹蜕皮周期的各个阶段进行定性描述测量数据，对三疣梭子蟹蜕皮周期的各个阶段进行定量分析数据整理，论文撰写三疣梭子蟹样品的获取与培养四、研究的总体安排与进度2010.9-2010.10 毕业论文选题2010.10-2010.11 进行文献查阅和资料收集，.完成开题报告及任务书，制定具体研究计划和试验方案。2010.11-2011.1 获得未经过生殖蜕皮的三疣梭子蟹样品，切取其游泳足趾节的最末端进行显
8、微观察。2011.1-2011.2 数据和材料整理、分析。2011.2-2011.3 开题答辩与综述。2011.3-2011.5 完成2篇外文翻译，论文撰写、提交并答辩。五、参考文献1 赵红霞. 甲壳动物蜕皮调控研究及蜕壳素的使用C. 广州: 广东省农科院研究所, 20062 宋宗岩, 王世党, 王华东. 如何促进三疣梭子蟹正常蜕壳生长J. 科学养鱼, 2002(7): 50-513 朱冬发, 沈建明, 杨济芬. 三疣梭子蟹蜕皮抑制激素cDNA的克隆与序列分析J.动物学报, 2008, 54(6): 1112-11184 姜仁良, 宋大白.虾蟹类的蜕壳与生长J. 水产科技情报, 1993, 2
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