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1、聊城大学,第27章 双股DNA病毒,第一节 痘病毒科 (Poxviridae) 第二节 非洲猪瘟病毒科与虹彩病毒科 第三节 疱疹病毒科 (Herpesviridae) 第四节 腺病毒科(Adenoviridae),2,第一节 痘病毒科 (Poxviridae),本科若干成员在病毒学上有重要意义。Jenner(1798)描述的用牛痘病毒预防人类天花,是病毒免疫的里程碑。目前痘苗病毒及其他痘病毒被作为基因工程疫苗的载体广泛应用,鸡痘、羊痘及羊口疮危害较严重,牛痘病毒具有公共卫生意义,黏液瘤及皮肤疙瘩病病毒等是检疫对象。,3,分 类,本科分两个亚科:脊椎动物痘病毒亚科及昆虫痘病毒亚科。前者又分8个属
2、 ,除疣病毒属外,均对动物有致病性。此外,从蜥蜴、蛙、鹿、袋鼠等新分离的痘病毒尚末鉴定。随着研究的不断深入,对痘病毒的致病性有新的认识,例如昆虫痘病毒原先只知道对昆虫致病,近年来又发现它对鱼类有致病作用。,4,5,形态,(1)多为砖形(250nm250nm200nm);少数为卵圆形(260nm160nm) 副痘; (2)衣壳中含类脂与管状或球管状的蛋白质结构,称为DNA芯髓,芯髓之旁为两个侧体,具有囊膜。,6,主要特征,(1)基因组单分子的线状双股DNA,约 200kb; (2)细胞浆内复制; (3)通过胞吞方式出芽,而非细胞裂解释放出病毒粒子。 (4)能在上皮细胞浆中形成胞浆包涵体 。,7,
3、8,9,副痘病毒,10,某些末分类的爬行动物的痘病毒外形为砖状,但表面结构类似副痘病毒。病毒颗粒的外层结构之内是哑铃样的芯髓,以及两个功能不明的侧体 (later body)。芯髓内含病毒DNA及若干 蛋白质。其囊膜含有宿 主细胞的类脂成分及某 些病毒特殊蛋白。,11,抵抗力,(1)怕热:55,20min或37,24h丧失感染力; (2)怕日光和紫外线: 可迅速灭活; (3)抗冷,抗干燥; (4)病灶干痘痂,毒力可保存几个月。,12,传 播,痘病毒在动物间的传播途径如下:皮肤的伤口感染,或由污染环境的直接或间接传染。例如口疮病毒还可通过呼吸道感染,绵羊痘、猪痘、鸡痘及黏液瘤也可通过昆虫叮咬感染
4、。 痘病毒感染宿主谱一般较窄,对环境抵抗力较强,在干燥的痂皮中可存活数年之久。,13,培 养,痘病毒可在发育的鸡胚绒毛尿囊膜上生长,多数可在膜上形成痘斑,如山羊痘、禽痘、牛痘等。痘斑的形态、颜色、大小以及形成的时间因痘病毒的种类而异。黏液瘤病毒引起的痘斑比较小,独立而分散分布,呈灰白色。而牛痘、痘苗病毒常侵害血管,常为出血坏死性的痘斑。可根据痘斑特征,对病毒作出初步鉴定。,14,致病性,痘病毒可引起各种动物的急性和热性传染病,特征是皮肤和粘膜发生特殊的丘疹和疱疹。兔痘病毒所致的疾病为传染性皮肤纤维瘤和粘液瘤。禽痘病毒所引起的疾病特点是在上皮组织产生增生性和肿瘤性病。,15,诊断,(1)病毒分离
5、:采取无菌的清朗庖液或取痘斑研磨后,加双抗处理后,鸡胚绒毛尿囊膜接种,在37 孵育57d,可见绒尿膜上形成增生性、坏死性痘疱。 (2)病理切片:将绒尿膜固定制作切片,用苏木素和伊红染色,在上皮细胞的胞浆内可以见到嗜酸性包涵体。,16,1、鸡痘病毒,(1)禽痘病毒属成员。 (2)某些毒株具有血凝素:鸡、其它禽类、绵羊等的红细胞。 (3)致病性:可分为三种病型,即皮肤型、白喉型和混合型。 皮肤型:在鸡冠、肉髯和眼皮等处,产生一种特殊的痘子。 白喉型:主要在口腔和咽喉部分,先在粘膜上生成一种黄白色小结节,后逐渐融合形成一层黄白色干酪样的假膜。,17,轻度感染多无全身变化 严重者精神沉郁,禽 痘,18
6、,食欲减退,贫血、消瘦,禽 痘,19,头面部痘痂,禽 痘,20,眼部痘痂,禽 痘,21,喙部痘痂,禽 痘,22,喙部痘疹,禽 痘,23,鸽翅部和头面部痘痂,禽 痘,24,有时痘疹和痘痂同时存在,禽 痘,25,鸽腿部和爪部病变,禽 痘,26,爪部痘痂,禽 痘,27,爪部严重痘痂,严重时跛行,禽 痘,28,蛋鸡头面部痘疹和痘痂同时存在,禽 痘,29,病鸡常有结膜炎,禽 痘,30,眼睑粘连,眼睑粘连,禽 痘,31,皮肤无痘疹,只表现呼吸困难、流鼻,禽 痘,32,皮肤有痘痂,呼吸困难,禽 痘,33,皮肤型 在病变发展的不同时期可见痘疹、痘痂和痘痂脱落后形成的白色斑痕或溃疡,禽 痘,34,黏膜型可见口腔
7、黏膜有痘样痂皮,禽 痘,35,黏膜型鸡痘口腔病变,禽 痘,36,气管黏膜白色痘疹,禽 痘,37,气管黏膜密布白色痘疹,禽 痘,38,防制,目前主要采用鸡痘疫苗进行预防。 鸡痘活疫苗:用于35日龄以上的幼鸡,对雏鸡有一定的毒力。 鸽痘活疫苗:毒力比鸡痘疫苗弱,用于1日龄雏鸡和产蛋母鸡,一般采用毛囊接种法。 鸡痘鹌鹑化活疫苗:毒力很低,雏鸡使用安全,效果良好。 注意发病季节,驱除传播本病的蚊、蠓、蜱等吸血昆虫,加强卫生消毒。,39,2、绵羊痘病毒,(1)致病性:自然条件下只感染绵羊,致全身性疱疹,肺常出现特征性干酪性结节,各种绵羊对绵羊痘病毒的易感性不同,死亡率550%不等。人由于直接接触病羊污染
8、的物质也可感染。 (2)培养:可在鸡胚绒毛尿囊膜上、绵羊、山羊、犊牛睾丸细胞培养中生长,并产生明显的CPE。 (3)预防:定期接种疫苗,常用羊痘氢氧化铝苗或鸡胚化羊痘弱毒疫苗。,40,41,3、山羊痘病毒,(1)该病毒与绵羊痘病毒之间存在共同抗原 。 (2)在自然条件下仅感染山羊,表现为发热、有粘液性、脓性鼻漏及全身性皮肤丘疹。,42,4、粘液瘤病毒,(1)致病性:野兔、家兔都非常易感。兔感染48h后出现临床症状,首先眼结膜炎,接着头部广泛肿胀,呈特征性的“狮子头”,严重者体温升高到42,多在48h死亡。澳大利亚曾引入此病毒,以图消灭过剩的野生家兔。 (2)培养:鸡胚绒毛尿囊膜,3d后产生直径
9、0.51.0mm的圆形痘疱。,43,5.口疮病毒 (Orf virus),本病毒为副痘病毒属的代表种,引致羊的口疮,又名绵羊接触传染性脓疱皮炎。 病毒感染绵羊及山羊,主要是羔羊,黄羊羔也可感染,羚羊感染后发生乳头状瘤,人类与羊接触也可感染。羊口疮广泛分布于包括我国在内的世界养羊地区。,44,主要特性,病毒比较耐热,5560经30min才能灭活,在-75时十分稳定,在-10时稳定性较差。干燥痂皮在野外可保持毒力达数月之久,于普通冰箱内至少可保存32个月,可被氯仿灭活。对乙醚低度敏感。对pH3.0无耐受力。,45,诊 断,根据临床症状及流行情况不难作出诊断。必要时可取病羊的水泡、脓疱或痂皮等,作电
10、镜检查可确诊。或接种绵羊睾丸细胞分离病毒。,46,预防与控制,用含毒的悬液或细胞培养的弱毒,在母羊产羔前数周在腿内侧刺种,可使羔羊获得有效的被动免疫。,47,第二节 非洲猪瘟病毒科与虹彩病毒科(Asfarviridae and Iridoviridae),虹彩病毒科:分为4个属,其中2个属与鱼类和两栖类疾病相关。 非洲猪瘟病毒科:仅有一个成员,即非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)。 这两科的病毒均为:线状双股DNA,20面体对称,有囊膜。,48,1.非洲猪瘟病毒,为非洲猪瘟的病原体:仅家猪易感;以急性高热为特征,全身出血,病程短,死亡率高; 由呼吸道入
11、侵扁桃体和鼻粘膜附近淋巴结增殖血流(病毒血症,红细胞及白细胞中含毒)。,49,50,病毒的特点 (1)双股DNA,190kb; (2)是唯一已知的核酸为DNA的虫媒病毒。 本病毒各个毒株之间免疫原性很低,对同株的免疫力也是短暂的,目前尚无有效疫苗可用。 注意:我国目前没有非洲猪瘟,必须严加防范!,51,第三节疱疹病毒科 (Herpesviridae),疱疹病毒在哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类、昆虫及软体动物均有发现,除绵羊外的家畜家禽,均可引致重要的传染病,例如牛鼻气管炎病毒、伪狂犬病毒及马立克病病毒等。迄今至少已鉴定100种疱疹病毒,其中至少19种已完成全基因组测序,包括马疱疹病毒1、2及4型
12、、牛鼻气管炎病毒1型、牛恶性卡它热病毒及斑点叉尾鲍疱疹病毒。,52,53,54,主要特性,1、基因组为单分子线状双股DNA,约125235kb。 2、直径150nm,162个壳粒组成的20面体对称,有囊膜,囊膜上有糖蛋白的纤突。 3、病毒衣壳在细胞核内复制和装配,可形成巨大的包涵体,后经核膜以芽生方式获得囊膜;目前尚不明确如何通过细胞质。,55,56,57,58,与兽医相关的几个疱疹病毒,伪狂犬病毒(Pseudorrabies virus)禽传染性喉气管炎病毒(Avian infectious laryngotracheitis virus) 马立克病病毒(Mareks disease vir
13、us,MDV) 鸭瘟病毒(Duck plague virus),59,1、伪狂犬病毒,(1)分类地位:为疱疹病毒甲亚科成员,又名猪疱疹病毒1型。 (2)致病性 猪为原始宿主,也可感染马、牛、绵羊、山羊及多种野生动物。,60, 主要症状 成年猪多为隐性感染,少数出现轻微发热和神经症状; 幼猪感染后呈发热、麻痹、昏迷等症状,死亡率很高; 怀孕母猪流产、死胎或木乃伊胎;其它动物感染后死亡率很高,特征症状为体躯某部奇痒。,61,62,63,(3) 病毒分布与动物排毒情况 病毒分布:最初位于扁桃体,感染24hr内可从头部神经节、脊髓及桥脑中分离到病毒 排毒:康复猪可通过鼻腔分泌物及唾液持续排毒,但粪、尿
14、不带毒。,64,(4) 病毒培养 易在鸡胚绒毛尿囊膜上生长,接种后3-4d能形成大小不一的隆起的白色痘斑 可在细胞培养中生长: 兔、猪和仓鼠的肾细胞(可产生CPE和空斑,形成包涵体);兔和豚鼠睾丸细胞;鸡胚成纤维细胞。,65,微生物学诊断, 动物试验:12mL适当稀释的病脑组织悬液皮下接种兔;25d后于接种部位出现奇痒症状,最后麻痹致死。 病毒分离:常用猪肾细胞系(PK-15),病毒接种后2472h,出现CPE(细胞层折光性,最后脱落,形成合胞体)。 病毒鉴定: 可用特异性抗血清做中和试验、免疫荧光试验鉴定病毒; ELISA(国际贸易指定试验):能迅速检测大量样品; PCR技术:鉴定伪狂犬病毒
15、,多用于隐性感染。,66,67,预防 灭活苗弱毒苗基因缺失苗,在计划根除伪狂犬病的国家,可选用此类疫苗。,68,2.禽传染性喉气管炎病毒,属双股DNA病毒,疱疹病毒科,又名禽疱疹病毒1型,仅1个血清型 。20面体对称,球形。绒尿膜接种,在绒毛尿囊膜增生,坏死,形成大小不等的灰白色痘斑 。 各种年龄鸡均可被感染,仅以成年鸡的症状最典型 :病鸡呈现呼吸困难和咳出血性渗出物;产蛋下降,蛋壳褪色,产软壳蛋。,69,70,病鸡呼吸困难,表现为头颈伸直,张口呼吸,常发出罗音,传染性喉气管炎,71,病鸡剧烈甩头或呈痉挛性咳嗽,常 咳出血性分泌物,多因窒息死亡,传染性喉气管炎,72,病毒分离,病料采集:发病早
16、期的气管渗出物、气管粘膜及肺组织。 鸡胚接种:绒尿膜接种,第3d开始形成痘斑, 56d死亡。 雏鸡接种:易感雏鸡接种后34d出现明显的症状和病变。,73,74,3.马立克病病毒,双股DNA 病毒,疱疹病毒科,又名禽疱疹病毒2型 。 裸露的MDV:直径85100nm,常见于感染细胞的核内,胞浆中偶尔也可看到。 有囊膜的MDV:直径150160nm,主要见于核膜和核泡,有时见于胞浆。 羽囊上皮内的病毒子:完全病毒,不与细胞结合,能在体外存活较长时间,有传染性。,75,76,主要感染鸡和火鸡,鹌鹑、稚鸡、鹧鸪也能感染。以淋巴细胞增生和肿瘤形成为特征,潜伏期较长。一般以23月龄的鸡发病最为严重。 感染鸡群的垫料和羽毛具有传染性:含有从羽囊上皮细胞来的病毒,传染性在室温可保持48个月,在4至少保持10年,但常用化学消毒剂作用10min就能使之灭活。,77,皮肤型病鸡可见全身毛囊肿瘤性增生,马立克氏病,78,马立克氏病,神经型病鸡常见一侧腰荐神经增粗,79,肝脏弥漫性肿瘤结节,马立克氏病,80,肺脏切面完全瘤化,马立克氏病,81,82,83,微生物学诊断, 采集病料与病毒分离:用病