白细胞疾病检验的应用参考课件

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1、详解白细胞疾病检验的应用,医学百事通,2,第一节 白血病概述,第十二章 第一节 白血病概述,白血病(leukemia)是造血干细胞克隆性疾病，是具有高度异质性的恶性血液病，其特点为白血病细胞异常增生、分化成熟障碍，并伴有凋亡减少,编辑制作 莫武宁,3,我国白血病的发病率为2.67/10万人，急性白血病多于慢性白血病，在全国各年龄恶性肿瘤死亡率中白血病占第6位（男性）和第8位（女性），在儿童和35岁以下的人群中占第1位。 白血病的病因尚不完全清楚，许多因素与其发病有关。,发病情况,第十二章 第一节 白血病概述,4,细胞成熟障碍阻滞阶段,阻滞发生在较早阶段 急性白血病，6月,阻滞发生在较晚阶段 慢

2、性白血病，12个月,第十二章 第一节 白血病概述,白血病分类,5,6,临床表现,RBC生成减少 正常造血功能受抑制 PLT生成减少 WBC细胞功能异常 胸骨压痛及肝、脾、淋巴结肿大,第十二章 第一节 白血病概述,贫血,出血,感染,浸润,7,白血病细胞在骨髓中大量 积聚、骨髓腔内压力增高 窦样隙屏障被破坏，白血病 细胞继续保持分裂的能力,临床表现,胸骨压痛,肝、脾、淋巴结肿大,第十二章 第一节 白血病概述,外周血可见幼稚细胞 浸润,8,细胞学诊断要点,第十二章 第一节 白血病概述,6.白血病细胞浸润,5.骨髓中其他系细胞受抑,4.细胞分裂异常,3.细胞形态畸形,2.细胞成熟障碍,1.某系细胞异常

3、增生,细胞学诊断要点,9,1976年法（F）、美（A）、英（B）三国协作组提出一个急性白血病FAB的形态学分型方案及诊断标准，将急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病两大类及其亚型，1985年进行修改。此分型方案得到了广泛的应用。,急性白血病分型,第十二章 第一节 白血病概述,FAB分型,FAB分型,10,近年来，在FAB形态学分型的基础上开展免疫学及染色体的研究工作，组成了一个白血病的MIC研究协作组（Morphological Immunological Cytogenetical Study Group），并分别于1985年、1986年、1987年提出了急性淋巴细胞白血病

4、、急性髓细胞白血病的MIC分型。,急性白血病分型,第十二章 第一节 白血病概述,11,随着分子生物学技术的崛起和发展，尤其对染色体易位形成融合基因的检出更反映急性白血病的生物学本质，提出了白血病的MICM（Morphological，Immunological，Cytogenetics，Molecular biology）分型方案。,急性白血病分型,第十二章 第一节 白血病概述,医学百事通，私人医生,12,MICM分型，使白血病的诊断从细胞水平上升到分子水平，这不仅对识别白血病的本质、研究白血病发病机制和生物学特性有重要意义，而且对指导临床治疗和判断预后亦具有实用价值。基于免疫表型、细胞遗传学

5、特征及特殊基因表达的分型方法，已越来越多地被用于制定最佳治疗方案，始于治疗前的全面诊断及评估。,急性白血病分型,第十二章 第一节 白血病概述,13,2001年3月里昂会议上，国际血液学及血液病理学专家推出一个造血和淋巴组织肿瘤WHO新分型方案的建议。该分型应用了MICM分型技术，结合临床综合进行分型，力求反映疾病的本质，成为国际上一种新的分型诊断标准。,急性白血病分型,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,WHO分型,14,第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病的正确分型对白血病的诊断、治疗方案的制订、疗效与预后的判断十分重要。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,15,骨髓细胞形态学

6、诊断迄今仍是急性白血病诊断、分型的最主要依据，特别是原始细胞的数量和形态，FAB分型提出以原始细胞30为急性白血病的诊断标准。以原始细胞形态学特征，将急性白血病分为急性淋巴细胞白血病（ALL）、急性髓细胞白血病（AML）或称急性非淋巴细胞白血病（ANLL）两大类及其亚型，以后进行了多次修改补充，由于分型标准明确，目前已被广泛采用。,急性白血病分型-FAB分型,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,16,急性白血病分型-FAB分型,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,17,急性白血病分型-FAB分型,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,18,急性白血病分型-FAB分型,第十二章 第二节

7、 急性白血病分型及诊断,医学百事通，私人医生,19,急性白血病分型-FAB分型,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,20,原始细胞：指不包括原始红细胞及小巨核细胞。原始细胞包括型和型，型为典型原始细胞，型胞质可出现少许细小嗜天青颗粒。核质比例稍低，其他同型原始细胞。NEC：非红系细胞计数，是指不包括浆细胞、淋巴细胞、组织嗜碱细胞、巨噬细胞及所有有核红细胞的骨髓有核细胞计数。ANC：指所有有核细胞中的比例。,急性白血病分型-FAB分型,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,21,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-FAB分型,22,我国分型 1980年，以FAB分型标准

8、为模板，结合我国的特点制定了我国急性白血病的分型标准。1986年天津会议上又进行修改，并将我国首次提出的亚急性粒细胞白血病列为原粒细胞部分成熟型(M2b），已为国外一些学者认可并应用。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-FAB分型,23,FAB分型标准明确，国内外分型基本统一，对急性白血病的诊断、治疗、预后及生物学特性的研究起到重要作用，是目前应用最多和最广的分型及诊断方法，也是今后诊断白血病不可缺少的基本方法之一。但形态学诊断存在主观性，加上白血病细胞的异质性和多态性，判断符合率低（6477）。细胞化学染色补充了单凭形态学对细胞辨认的不足，对ALL和AML的鉴别、尤其对

9、AML亚型之间的鉴别诊断较形态学更为可靠。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-FAB分型,24,免疫学分型是利用了造血细胞分化为成熟细胞过程中会出现一系列的免疫表型的变化。白血病是造血细胞的某一克隆被阻滞在某一分化阶段上并异常增殖的结果，故白血病细胞往往停滞在细胞分化的某一抗原表达阶段，因此可以利用单克隆抗体检测相应白细胞表面抗原或胞质内的分化抗原进行白血病类型的鉴别、细胞发育阶段的鉴别，从而指导治疗，判断预后。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-免疫学分型,25,近年来采用急性白血病的一线单抗来筛选急性髓系白血病及T、B淋巴系白血病，用二线单抗进一

10、步确定系内亚型。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-免疫学分型,26,注：*胞质表达 *胞核表达,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-免疫学分型,27,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-免疫学分型,28,AML的免疫学分型 髓系相关抗原的表达反映了细胞的起源。目前，已初步建立了FAB（M0-M7）与免疫学的联系，并在以下方面达成共识，即，CD34抗原表达与低分化形式的AML相关，在CD34为造血干细胞标志M0、M1和M5a型中往往有较高表达率，而白血病细胞较成熟的亚型M2b、M3及M5b则极少表达或不表达。,第十二章 第二节 急性

11、白血病分型及诊断,急性白血病分型-免疫学分型,29,CD13、CD15和CD33与分化程度相对较高 的AML相关，50%M3可阳性。 CD14与单核细胞白血病相关(M4、M5） 抗髓过氧化物酶（MPO）单抗为AML所特有，比CD33、CD13更敏感。 新发现单抗 CD117对髓系的特异性比CD13和 CD33更好，且有较高的敏感性。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-免疫学分型,30,抗血型糖蛋白 A或H单抗被认为是鉴定M6 的敏感而特异的单抗。 抗血小板GPba（CD41a）、（CD41b)、a（CD61）、b（CD42b） 的单抗被认为是鉴定M7的敏感而特异的 单抗。

12、,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-免疫学分型,31,急性髓细胞白血病FAB分型与免疫标志,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,32,免疫学分型与FAB分型相比，不仅更客观、准确、重复性好，还可鉴别白血病细胞的起源、分化阶段及基因克隆的特点，提高了白血病的诊断，可将99的AML与ALL鉴别开；可明确对ALL进行免疫分型；可确定形态学不能或很难区分的白血病类型及亚型，如 M0、M7、混合细胞白血病。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,免疫学分型与FAB分型,33,免疫表型补充了形态学的不足，提高了分型的正确性，已成为白血病诊断、治疗及基础研究的重要手段，但尚不能取

13、代形态学分型。由于白血病细胞具有“异质性”和“非同步性”，且常伴有抗原表达紊乱现象，有时免疫分型的分化抗原在单抗表达上会出现一些差异，故免疫标记诊断需要综合分析。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,免疫学分型与FAB分型,34,特异性染色体的异常是恶性血液病发生过程中的重要环节，更代表疾病的本质，细胞染色体分析已成为研究和诊断白血病的重要方法之一。近年来，细胞培养和染色体分带技术的研究，特别是采用FISH技术、多元FISH和多色频谱核型（SKY）检测技术，克隆性染色体异常的检出率明显增高，染色体异常表现与某些急性白血病之间的关系愈来愈清楚。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白

14、血病分型-细胞遗传学分型,35,AML核型异常检出率达93，AML核型异常可分为两类，一类是平衡型畸变，是和FAB亚型相关的特异性染色体结构重排，主要是相互易位或倒位，其结果产生融合基因，约占60；另一类是和FAB亚型不相关的异常，多数为数目异常的不平衡畸变，表现为染色体整条或部分增加或丢失，最多见是+8，其次为-5/del（5q），-7/del（7q）和+21。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-细胞遗传学分型,36,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性髓细胞白血病的MIC分型,37,大约90以上ALL可检出克隆性核型异常，其中66为特异性染色体重排，并和其免疫

15、学亚型相关。数目异常以超二倍体、亚二倍体及假二倍体常见。有22及14号染色体异常的男性可有XXY，少数可出现单倍体。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-细胞遗传学分型,38,细胞遗传学的改变往往与预后有关： 预后较好的有 t(8;21)、inv(6)、t(15;17)。 特征性的染色体5q、7q缺失或单倍体，3号染色体的易位或倒位，t(6;9)，t(9;22)及染色体11q23异常，均提示AML病人化疗后的预后特别差。 儿童AML，t(1;22)预后很差。 白血病细胞对化疗的反应与细胞核型有关，特异性染色体异常可作为监察病情缓解和复发的重要指标。,第十二章 第二节 急性白

16、血病分型及诊断,急性白血病分型-细胞遗传学分型,39,白血病的这些特异性染色体易位在分子水平的改变，表现为与白血病发病机制有关的基因重排及各种融合基因的形成，在病程中比较稳定，是可靠的分子标志。ALL为单克隆淋巴细胞的恶性增殖，产生大量单一和特定的DNA重排片段，故可显示与胚系带位置不同的独特的重排带型，成为该恶性克隆的分子基因标志。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-分子生物学分型,40,特异性IgH及轻链基因重排可作为B系ALL的特异性克隆标志，并可对B系ALL进行分型，如早B前体-ALL型的婴幼儿白血病中，染色体11q23上存在一个与白血病发生相关的重要基因HRX又称MLL基因，故11q23染色体易位引起MLL基因重排；前B-ALL有IgH蛋白表达，并有t（1;19）所致的PBX-E2A融合基因；而B-ALL则有IgH和轻链在细胞膜表面的表达。,第十二章 第二节 急性白血病分型及诊断,急性白血病分型-分子生物学分型,41,T细胞受体（TCR）和基因重排见于所有T系ALL及半数B系ALL。TC