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1、临床微生物检验标本的采集及微生物检验报告的解读5.血液培养标本采集和处理：5.采血指征：对入院危重感染患者应在未进行抗菌药物治疗之前，及时做血培养。一般患者出现以下一种体征时可作为行血培养的重要指征：发热（38）或低温（36）；寒战；白细胞增多（计数10.0109/L，特别有“核左移”时）；皮肤黏膜出血、昏迷、多器官衰竭，血压降低；C反应蛋白升高及呼吸加快；血液病患者出现粒细胞减少，血小板减少等，或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症应采集血液培养。新生儿可疑菌血症，应同时做尿液和脑脊液培养。52皮肤消毒程序：严格执行以下三步法。5.2.1 70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30s以上。5.2.2
2、 1%2%碘酊作用30s或10%碘伏60s，从穿刺点向外划拳消毒，至消毒区域直径达3cm以上。5.2.3 70%酒精脱碘：对碘过敏的患者，用70%酒精消毒60s，待酒精挥发干燥后采血。5.3培养瓶消毒程序：70%酒精擦拭血培养瓶橡皮塞，作用60s；用无菌纱布或无菌棉签清除橡皮塞子表面残余酒精。5.4静脉穿刺和培养瓶接种程序：5.4.1在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手套固定静脉，不可接触穿刺点；5.4.2用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头（如果行第二次穿刺，应换针头）直接注入血培养瓶，轻轻颠倒混匀防止血液凝固。立即送检，切勿冷藏。5.5采血量：成人采血量是810ml，儿童15ml。血
3、液和肉汤之比为1:51:10。5.6血培养次数和采血时间：根据研究，仅抽血培养1次分离率约占80%，培养2次的分离率约占90%，而培养3次的分离率约占99%。仅抽血培养1次，除了分离率低（其原因是菌血症常会暂时消失）外，且将很难评估病原菌是污染还是与感染有关。如果抽血培养2次或3次，则能够得到肯定。采血培养应该尽量在使用抗菌药之前进行，24h内应采集23次做血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养）。入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采集2份。对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.51h采集血液，或于寒战或发热后1h进行。5.7特殊的全身性和局部感染患者
4、采血培养的建议：可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎，应在不同部位采集23份血标本。不明原因发热，如隐性脓肿，伤寒热和波浪热，先采集23份标本，2436h后估计体温升高之前（通常在下午）再采集2份以上。可疑细菌性心内膜炎，在12h内采集3份血标本，如果24h后阴性，再采集3份以上的血标本。5.8标本运送：采血后应该立即送检，如不能立即送检，需室温保存或置3537孵箱中，切勿冷藏。 6尿液标本采集和处理：61采样原则：标本需在应用抗菌药物之前或停用抗菌药物5天之后留取尿液标本；尿液在膀胱内应停留68 小时以上，使细菌有足够的时间繁殖。一般以清晨第一次的中段尿为宜。6.2
5、采集方法：6.2.1中段尿采集法：成年男性和女性分别用肥皂水或1：1000 高锰酸钾水溶液清洗尿道口和外阴部，再用无菌生理盐水冲洗尿道口，然后排尿弃去前段尿液，收集中段尿510ml 盛于带盖的无菌容器内送检。6.2.2导尿法：用导尿管导取1015ml尿液，置灭菌容器中送检；长期留置导尿管者应更换新导尿管留尿；留置导尿时，用无菌消毒法消毒导尿管外部及导尿管口，用无菌注射器通过导尿管抽取尿液送检(不可采集尿液收集袋中的尿液送检)；6.3送检：尿液收集后，盖上容器盖子立即送检，若无法及时送检，置于4冰箱中保存不可超过2小时。6.4注意事项：收集尿液过程中，请勿将手伸入容器内，且尿液勿满出容器外，以免
6、污染。而以无菌导管技术收集尿液（特别是女性患者）的方法，已被认为不适合，因易引发尿道感染。如果同份标本中检出3种以上不同种微生物，可能由于采样本时受到污染所致。7.痰及下呼吸道标本采集和处理：7.1采集要点：所采集的痰标本，必须真正能代表肺部之分泌物者，通常清晨时痰液最多，且可能含较多病原菌。7.2采集步骤如下：7.2.1以清水或牙刷清洁口腔及牙齿，不可用牙膏。7.2.2指导病患从呼吸道深部咳出痰（不可含有唾液），装于无菌容器内。咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。幼儿可用手指轻扣胸骨柄上方以诱发咳痰。7.2.3气管下采集法：通常用于在给患者行纤维支气管镜时顺便抽取。7.2.4气管穿刺法
7、：仅用于昏迷患者，由临床医师进行。7.2.5痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本，痰量应为35ml。7.2.6无法及时送检的痰标本应置于4冰箱中保存待送。7.2.7呼吸道标本采集方法：鼻咽拭子法，先用清水漱口，对光坐，头向上仰，口张大，用压舌板轻压舌根，用棉拭子在病人咽后壁，悬雍垂后侧涂抹数次立即放入无菌试管中。7.3痰TB菌涂片采集：痰涂片检查TB菌的初诊病人应送3份痰标本（夜间痰、清晨痰和即时痰）；如无夜间痰在留清晨痰后23小时再留一份痰标本，或送两份即时痰；治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰（清晨痰和夜间痰）。7.4痰标本采集说明：即时痰为病人就诊时咳出的痰液；清晨
8、痰为清晨深咳出的痰液；夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液。痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本，痰量为35毫升。8.泌尿生殖道样本：8.1阴道、子宫及前列腺等分泌物：由医生采集，收集于无菌试管内送检。淋病奈瑟菌检查时，不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免阴道分泌物污染拭子。8.2未成年人：若怀疑年幼女童有淋病性阴道炎时，则标本由阴道外围部位取得。8.3男性：男性怀疑有急性淋病时，则由尿道取分泌物样本作抹片及培养，若怀疑有慢性淋病，样本可由医生采自前列腺或精囊。8.4注意：从冰箱取出之携送培养基，须先放至室温约半小时，使其恢复室温，因淋病双球菌
9、对温度相当敏感。9.脑脊液样本：9.1采集时间：怀疑脑膜炎时应立即采集脑脊液，最好是在应用抗生素之前采集脑脊液。9.2采集方法：腰穿法收取脑脊液35ml，盛于无菌试管中，应立即送检，同时注意保温，不可置于冰箱保存。10.粪便与直肠拭子样本采集和处理：101采集时间：10.1.1腹泻患者于急性期，尽量在用药前采集粪便；101.2伤寒患者于发病2w以后采集粪便；101.3怀疑霍乱时立即采集粪便送检。102采集方法：102.1自然排便法：取新鲜粪便的黏液、脓血、或絮状物等有意义成分，23g或12 m1，盛无菌容器内或置于保存液或增茵液内送检；若疑似霍乱者应置于碱性蛋白胨水中(pH8.6)。102.2
10、直肠拭子法：难以获得粪便或排便困难患者及幼儿可采用此法，将拭子前端用无菌甘油或生理盐水湿润,然后插入肛门约45cm(幼儿23cm)，轻轻在直肠内旋转。擦取直肠表面粘液后取出，盛于无菌试管中或保存液中送检。11眼、耳、鼻、咽拭子培养标本：11.1采集眼分泌物：先用无菌生理盐水冲洗眼部,然后用棉拭于拭干，再用无菌棉拭于采集分泌物。112采集咽分泌物：先用清水撤口用压舌板将舌向下向外压，将咽拭子在咽后壁或悬雍垂后侧涂抹数次，切勿接触口腔和舌粘膜。113采集耳、鼻或鼻咽分泌物：直接用拭子涂抹病灶部位,切勿接触周围粘膜或皮肤。114送检：标本采集过程中应注意避免粘膜上的正常菌群污染,标本采集后标明左、右
11、眼（耳）或鼻咽部，连同拭子一起置无菌管内送检。12.穿刺液样本：121穿刺液培养标本：包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液等。122采集时间：一般在用抗生素等抗菌药物治疗之前，或在停止使用抗菌药物之后23d采集标本。123采集方法：12.3无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本；123.2标本采集量应1ml(结核分支杆菌培养时应为l5m1)；12.3.3标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中立即送检；12.3.4可在盛器中先加入灭菌肝素然后再加入穿；13.脓汁及创伤感染分泌物标本的采集：；131采集要点：对采集标本部位应首先清除污垢，；132封闭性脓肿患者病灶局部的皮肤或粘膜表面：；133开放性
12、脓肿和脓汁分泌物：在患部附近的皮肤；134大面积烧伤的创面分泌物：由于创面的部位不；14真菌感染培养标本采集：；141浅部真菌感染标本采集：；14.1.12.3.4可在盛器中先加入灭菌肝素然后再加入穿刺液，以防止穿刺液凝固(0.5ml 肝素可抗凝5ml标本)。穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液及鞘膜液。13.脓汁及创伤感染分泌物标本的采集：131采集要点：对采集标本部位应首先清除污垢，再以碘酒或酒精消毒，防止皮肤表面污染菌混入影响检验结果，盛放标本器皿应无菌。132封闭性脓肿患者病灶局部的皮肤或粘膜表面：先用碘酒消毒，再用75%酒精脱碘，以无菌干燥注射器穿刺抽取，将采集的脓汁注入无菌试管中。
13、133开放性脓肿和脓汁分泌物：在患部附近的皮肤或粘膜用无菌纱布或棉布擦拭，供培养用的标本尽可能从深部流出，如为瘘管可在无菌操作下取组织碎片。134大面积烧伤的创面分泌物：由于创面的部位不同，细菌种类也不同，故应用无菌棉拭子采取多创面的脓汁或分泌物，置于无菌试管送检。注意事项：烧伤12 小时内的创面及分泌物中细菌检出率较低。14真菌感染培养标本采集：141浅部真菌感染标本采集：14.1.1皮肤：常规消毒皮肤，从皮肤癣菌皮损边缘刮取鳞屑，置无菌平皿内送检，皮肤溃疡则采集病损边缘脓汁或组织；14.1.2指(趾)甲：消毒指(趾)指甲并去掉其表面部分，取可疑病变部分，用刀片修成小薄片56 片置无菌容器内
14、送检；14.1.3毛发：采集根部断折处，至少56 根送检。14.2深部真菌感染标本采集：14.2.1血液：无菌采血810 m1，注入未用过抗生素的或可中和抗生素的血培养瓶中，立刻送检，如不能立刻送检时血培养瓶应放室温，但不可超过89h；14.2.2脑脊液：采样量不少于35m1,分别注入两支无菌试管中送检(一管做真菌培养和墨汁染色一管测隐球菌抗原和其他培养) ；142.4呼吸道及泌尿生殖道：其深部真菌感染标本采集同一般菌培养标本。15厌氧菌感染培养标本的采集：15.1标本采集：15.1.1标本不能被正常菌群污染,采集时尽量避免接触空气,立即送检,严格遵守无菌操作;15.1.2血液及其他体液(胸水
15、、腹水、心包液、关节液、胆汁、脑脊液等)注入厌氧血培养,立即送检;15.1.3深部脓肿,在病灶部位开放前取材,可用针管抽取,针头用无菌胶塞密封,也可用血气采集针抽取,立即送检;15.1.4抽出液体标本后,要尽快排除注射器内的空气。15.2标本运送：152.1注意事项：标本采集后不得冰箱储存,必须尽快(半小时内)送实验室;15.2.2运送方法:a 注射器运送(标本抽取后尽快排除空气)或接种道专门的运送培养基中直接运送;b 含运送培养基的无氧小瓶运送;c 厌氧罐运送(组织块);d 大量液体标本运送时要装满标本瓶兵立即驱氧,加盖运送;e 一般不采用棉拭子法二 微生物检验报告的解读1细菌室药敏试验中常选用的抗生素种类氨基糖甙类：阿米卡星、庆大霉素1代头孢：头孢唑啉2代头孢：头孢呋辛钠3代头孢：头孢他啶、头孢噻肟 、头孢吡肟（ 马斯平）单环 -内酰胺类：氨曲南广谱青霉素类：氨苄西林、青霉素G 、苯唑西林抗假单胞菌广谱青霉素：哌拉西林复方-内酰胺类：阿莫西林-克拉维酸（奥格门丁 ）氨苄西林-舒巴坦 （优力新）哌拉西林-他唑巴坦 （特治星）头孢哌酮-舒巴坦 （舒普深）碳青霉烯类：
