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1、 分类号：R692 密 级：间充质干细胞通过活化 M2型巨噬细胞减轻急性肾损伤的机制研究Mesenchymal Stem Cells AmeliorateAcute Kidney Injury through Activationof M2 Macrophages作者姓名：学科专业：耿燕秋内科学（肾病）陈香美院士导师：答辩委员会主席：论文答辩日期：二O一四年六月院校地址：邮政编码：北京市复兴路 28号100853 解放军医学院研究生学位论文原创性声明秉承我院“敬业、勤奋、求实、创新”的学风，本人声明：所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注
2、和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：指导教师签名：日期：日期：解放军医学院研究生学位论文版权使用授权书本人保证毕业离院后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为解放军医学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复印件和电子版本，可以采用影印、缩印、扫描或其它手段保存论文以供被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外）
3、。论文作者签名：指导教师签名：日期：日期： 目录中文摘要-(1)英文摘要-(5)前正言-(8)文-(15)实验研究一MSCs减轻横纹肌溶解 AKI的疗效研究-(15)前言-(15)材料-(17)方法-(19)结果-(27)讨论-(38)小结-(40)参考文献-(41)实验研究二M2型巨噬细胞在 MSCs减轻 AKI中的作用及机制研究-(44)前言-(44)材料-(46)方法-(48)结果-(53)讨论-(57)小结-(59)参考文献-(60)实验研究三不同表型巨噬细胞在横纹肌溶解 AKI中的作用研究 -(63)前言-(63)材料-(64)方法-(66) 结果-(73)讨论-(77)小结-(79
4、)参考文献-(80)全文总结-(83)综述-(85)附录:英文缩略语词表-(94)攻读学位期间发表文章情况-(95)致谢-(96) 解放军医学院博士学位论文作 者：耿燕秋学科专业：内科学（肾病） 导 师：陈香美 院士间充质干细胞通过活化M2型巨噬细胞减轻急性肾损伤的机制研究中文摘要研究背景横纹肌溶解(rhabdomyolysis，RM)指任何原因引起的广泛的横纹肌细胞坏死,肌细胞内容物外漏至细胞外液及血液循环中，导致急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)、电解质紊乱等一系列并发症,重症患者预后极差。与肌红蛋白尿相关的 AKI是创伤和非创伤性横纹肌溶解最严重的并发症，现有
5、治疗无法根本改善其预后。如何提高 RM后肾小管上皮细胞坏死的修复再生、降低 AKI死亡率，一直是医学界研究的重大课题。近年来骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）在急慢性肾脏病中的应用日益受到关注，给 AKI的治疗指明新的方向。多项研究均证实，MSCs治疗可明显改善肾小管损伤并有利于肾功能的恢复。巨噬细胞是天然免疫系统中重要的调节细胞,可分为经典活化的 M1型巨噬细胞和替代性活化的 M2型巨噬细胞两种极性状态。M2型巨噬细胞具有抑制炎症反应，促进组织重塑和再生修复的功能。体外研究中 MSCs可与巨噬细胞相互作用，促进 M2型巨噬细胞的产生。那么，诱导 M2
6、型巨噬细胞的生成是否是 MSCs减轻 AKI的机制？目前尚无相关报道。本研究旨在建立 RM所致 AKI的小鼠动物模型，探讨 MSCs是否通过诱导 M2型巨噬细胞的生成来减轻 AKI，为阐明 MSCs治疗减轻 AKI的机制提供理论依据。方法第一部分 C57BL/6小鼠经双下肢肌肉注射 50%甘油8ml/kg建立1 解放军医学院博士学位论文RM所致AKI模型，观察第6h、12h、24h、48h、72h、96h、120h和168h时间点血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)和磷酸肌酸激酶(CK)的变化趋势，以及肾脏、肌肉和肺脏的病理改变。将 C57BL/6小鼠随机分为 Sham+生理盐水 (NS)组、Sh
7、am+MSCs组、RM+NS组和RM+MSCs组。6小时后，MSCs组给予1106个红色荧光蛋白（RFP）标记的C57BL/6小鼠骨髓来源的MSCs尾静脉注射, NS组给予等体积的生理盐水尾静脉注射；（1）生化检测血BUN、Cr和CK水平（n=10）；（2）酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清细胞因子IL-6、TNF-和IL-10水平（n=5）；（3）光镜观察肌肉和肾脏病理损伤程度，计算肾小管坏死评分（ n=4）；（4）PCNA免疫组化评价肾小管上皮细胞损伤后增殖情况（n=5）；（5）双光子显微镜检测RFP标记的MSCs在RM模型小鼠各器官的定植情况（n=3）。第二部分 C57BL/6小鼠经 50%甘油 8ml/kg肌肉注射建立 RM模型，随机分为 RM+NS组和 RM+MSCs组，n=5。
