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1、全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）,1,基本概念,艾滋病(AIDS)又称获得性免疫缺陷综合征，是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种免疫缺陷性疾病。 HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组。迄今为止，根据血清学反应和病毒核酸序列测定，全球流行的HIV可分为2型：HIV-1型和HIV-2型。在HIV-1型内，根据编码包膜蛋白的env基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性又进一步分为3个组：组（主要组）、组（外围组）和组（新组或非M非O组），组内又可分为10个亚型。在HIV-1型和HIV-2型之间,其核苷酸序列有45的同源性，并且存在免疫交叉反应。应用免疫
2、印迹法(West blot)可以将二者明确地区别开来。,2,HIV感染机理,HIV病毒侵入人体后，其表面糖蛋白gp120与细胞表面受体蛋白CD4以高亲和力结合，吸附到宿主细胞上；gp120再与宿主细胞表面辅助受体相互作用，使病毒与宿主细胞膜更接近；gp41产生一系列构象变化，其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜，导致病毒包膜与细胞膜的最终融合，病毒RNA进入细胞。 在HIV感染后，最先能够监测到病毒RNA、然后是p24抗原，最后是抗体。,3,全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）,全国艾滋病检测技术规范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS
3、（2009年修订版） 中国疾病预防控制中心 二九年九月,4,全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）,中国疾病预防控制中心性艾滋病预防控制中心对全国艾滋病检测技术规范（2004年版）进行修改、增补和完善后，制定出全国艾滋病检测技术规范（2009年版），使其既能满足目前艾滋病检测工作的实际需要，又能体现检测技术的发展。,5,全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）,本次主要对以下几个方面内容进行了修改、增补和完善：（1）在样品的采集和处理中，增加了滤纸干血斑样品、快速检测样品的采集和处理，用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定样品、尿液和唾液样品的采集和处理；（2）在HIV抗体检测中，增加了免
4、疫荧光法和化学发光法，进一步明确了不同情况下的检测策略；（3）在HIV核酸检测中，增加了HIV感染产妇所生婴儿HIV感染早期诊断检测流程和适用于窗口期的集合核酸检测方法,6,全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）,（4）根据临床治疗需求，增加了HIV-1的耐药检测；（5）进一步完善了艾滋病检测实验室安全防护和艾滋病检测实验室的质量管理，使其更加符合目前艾滋病防治工作的需求，更加具有可操作性；（6）考虑到技术发展和新的需求，增加了HIV-1新近感染检测和HIV-1的分离培养技术。,7,全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）,修订后的规范共九章，包括：样品的采集和处理、HIV抗体检测、HI
5、V-1抗原检测、HIV核酸检测、HIV-1耐药检测、CD4+ 和CD8+ T淋巴细胞检测、HIV-1的分离培养、实验室生物安全、艾滋病检测实验室的质量管理。,8,全国艾滋病检测技术规范（2009年修订版）,本规范上报卫生部，经获准由中国疾病预防控制中心发至全国艾滋病检测实验室及有关单位。本规范将为国家、卫生部与财政部等部委下发的关于艾滋病防治工作的各项政策法规的有效实施提供强有力的技术支持，并具体指导艾滋病检测实验室技术人员开展日常工作。 本规范起草单位：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心。,9,第一章 样品的采集和处理,应制定样品编码的标准操作程序，规定样品编码的原则和方法，为样品制
6、定唯一性编码（编号），保证其唯一性。 样品的保存 用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，短期（1周）内进行检测的可存放于28， 一周以上应存放于-20以下。 用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内进行检测的可存放于4，3个月以内应存放于-20以下。3个月以上应置于-70以下。,10,第一章 样品的采集和处理,艾滋病检测筛查实验室检测的筛查阳性样品应及时送确证实验室，筛查阴性样品，可根据具体需要决定保存时间，建议至少保存12个月。特殊用途或专项项目的样品根据具体要求确定保存时间。 艾滋病检测确证实验室收到的筛查阳性样品，无论确证结果如何，均应将剩余的样品保存至少10年，特殊用途或专项项目的样品根据具
7、体要求确定保存时间。,11,第一章 样品的采集和处理,样品的运送 应符合生物安全要求；要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。 应采用三层容器对样品进行包装，随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息，并应放置在第二层和第三层容器之间。 第一层容器：直接装样品，应防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的唯一性编码或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。,12,第一章 样品的采集和处理,第二层容器：容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。要求不易破碎、带盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒处理
8、。 第三层容器：容纳并保护第二层容器的运输用外层包装箱。外面要贴上醒目的标签，注明数量、收样和发件人及联系方式，同时要注明“小心轻放、防止日晒、小心水浸、防止重压”等字样，还应易于消毒。 特殊情况下经有关部门批准可以用特快专递邮寄样品，但必须按三层包装，将样品管包扎好，严禁使用玻璃容器。,13,A类感染性物质的包装与标签(P.I.602),14,15,16,B类包装,17,包装材料生产厂家,北京新晔瑞峰&北京培容生物科技有限公司（www.l-s-） 北京泉发科技发展有限责任公司 （） 天津津检危险品包装材料科技有限公司,18,样品的接收,样品包裹必须在具有处理感染性材料能力的实验室内、由经过培
9、训的、穿戴防护衣、戴口罩、防护眼镜的工作人员在生物安全柜中打开，用后的包裹应及时进行消毒。 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告实验室负责人和上一级实验室技术人员。 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，应将样品安全废弃。并将样品情况立即通知送样人。 接收样品时应填写样品接收单。,19,第二章 HIV抗体检测,HIV抗体检测实验室要求 应符合全国艾滋病检测工作管理办法（2006）中对实验室人员、建筑设施和设备等条件的要求。 实验室的质量保证和实验室安全防护
10、,20,HIV感染的主要检测方法,病毒培养是检测HIV感染最精确的方法。一般采取培养外周血单个核细胞(PBMC)的方法进行HIV的诊断。 病毒核酸检测通常是通过检测HIV RNA水平来反映病毒载量，具有很高的灵敏度，使用适时荧光聚合酶链反应(PCR)技术，能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。病毒核酸检测方法可用于HIV的早期诊断，如窗口期辅助诊断、病程监控、指导治疗方案及疗效测定、预测疾病进程等。 目前常用的测定方法有逆转录PCR实验(RT-PCR)、核酸序列扩增实验(NASBA)、分支DNA杂交实验(bDNA)等。使用高灵敏度的适时荧光PCR技术，能够在HIV感染的前2周检测到病毒核酸。
11、,21,HIV感染的常用检测方法,常用HIV病原学检测方法: 病毒分离 抗原检测-24抗原的检测 核酸检测（ cDNA测定-PCR、 RNA测定-病毒载量） 其他方法：逆转录酶测定、原位杂交 常用HIV抗体检测方法: ELISA 快速HIV检测 免疫印记法 （ Western Blot） 其他方法：免疫荧光法（IFA）、放射免疫沉淀,22,HIV感染的主要检测方法,抗体通常是在感染后38周能够被检测出来。95%在三个月可以检测出抗体。 窗口期-在窗口期病毒抗体不能被检出，或许可以检测到病毒相关抗原或分离病毒。 抗原能够在个体感染后先于血清转化218 d被检测到。因此，在血清转化期通过检测p24
12、抗原有着很大的优势，可以作为早期辅助诊断HIV感染的一种方法。,23,HIV抗原检测的目的,检测早期感染，缩短窗口期 （可提前1-2周），最早可达9天。 HIV-P24抗原阳性仅作为HIV感染窗口期的辅助诊断依据，不能据此确诊。 新生儿的感染辅助诊断： 婴幼儿HIV抗体阳性不能用于诊断感染HIV，婴幼儿体内从母亲得到的HIV抗体持续存在时间最长不超过18个月。 在18月龄以前可以用多种不同的非抗体依赖性的检验方法对新生儿HIV感染进行辅助诊断，包括：HIV P24抗原检测、病毒分离培养、RNA或DNA测定。,24,HIV抗体检测的目的,临床HIV疾病的诊断 输血和移植安全 监测人群流行状况,2
13、5,HIV抗体检测的要点,根据目的选择检测方法及检测策略。 严格遵守实验室SOP。(SOP文件包括哪些内容，见规范52面。)。 筛查试验阳性，须作确证试验。 筛查试验阴性， 不应做确证试验。 筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。,26,HIV抗体检测,以诊断为目的的检测策略 常规HIV抗体检测的方法和程序 HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。 筛查试验 筛查试剂 必须是经国家食品药品监督管理局注册批准 、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。 筛查样品 HIV抗体筛查可采用血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液(无法进行确认
14、)样品。,27,28,2011 年全国HIV 抗体诊断试剂临床质量评估报告,29,2011 年全国HIV 抗体诊断试剂临床质量评估报告,30,2011 年全国HIV 抗体诊断试剂临床质量评估报告,31,32,33,34,35,HIV抗体检测,筛查方法 （1）酶联免疫吸附试验（ELISA） 可使用血液、唾液、尿液样品，ELISA多为单纯HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。 （2）化学发
15、光或免疫荧光试验,36,HIV抗体检测,（3）快速检测（RT）及其它检测试验 这类试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。一般可在1030分钟内得出结果。,37,快速检测（RT）及其它检测,试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA，适用于应急检测、门诊急诊个体检测，尤其是基层单位。,38,快速试剂的局限性,一般不用于血液筛查 有一定的假阳性反应，如作为临床诊断，要复检和确认 有一定的假阴性反应（尤其暴露时间3个月）,39,快速检测（RT）及其它检测,明胶颗粒凝集试验（PA）：是HIV血清抗体检测的一种简便方法。将HIV抗原致敏
16、明胶颗粒作为载体，与待检样品作用。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体。有效试验必须有阴性和阳性质控。,40,41,HIV抗体检测,免疫渗滤试验：斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：均以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上，加待检样品。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10分钟以内。有效试验的质控点必须显色。 免疫层析试验：以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品（血液或唾液）沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。,42,HIV抗体检测,筛查程序 （1）初筛试验 根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；(如果标本的OD值略低于CUT-OFF值时（CO-10ODCO）判定时需小心) ；对呈阳性反应的样
