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1、. . 111 一 营养与食品卫生学的研究容与方法（一）营养学的研究容1.食物营养2.人体营养3.公共营养（二）食品卫生学的研究容1.食品的污染问题2.食品及其加工技术的卫生问题3.食源性疾病及食品安全评价体系的建立4.食品卫生监督管理（三）营养与食品卫生学研究方法1.实验研究：（1）离体实验（in vitro）（2）整体实验（in vivo）2.人群研究：（1）人群志愿者的实验研究（2）人群流行病学调查（3）意外事故或突发事件的人群研究二 动物实验方法一般来说，动物实验的研究工作应该明确描述：（1）研究的目的和/或者需要验证的假说。（2）选择特定动物模型的原因。（3）动物种、品系、来源和类型
2、。（4）每个独立实验，包括研究设计和使用动物数量。（5）数据分析所用的统计学方法。步骤的详细描述（一）动物实验的分类1、确证性的实验：用一种最大可能,正确解答问题的系统方法，收集有关处理实施后动物反应的科学数据。2、探索性的实验：为产生新的假说提供素材。这两类实验都涉及在实验人员的控制下，对动物施加一定的处理或操作，来发现是否处理在实验对象上引起一定的反应，或者对这种反应进行定量。3、检验性实验：是观察性的实验，用于发现科研人员不能控制的变量之间的联系。这种联系可能是暂时的也可能是长期的。实验设计的主要目的一是保证所测变量的任何差异是由处理造成的，而不是其他非对照变量引起；另一个目的是通过控制
3、确定的变量在尽可能小的围，减少所测反应的变异性，这样对处理效应的评介更准确。（二）动物实验的3R原则1减量化原则减量化原则(reduce)，要求用较少的原料和能源投入来达到既定的生产目的或消费目的，进而到从经济活动的源头就注意节约资源和减少污染。减量化有几种不同的表现。在生产中，减量化原则常常表现为要求产品小型化和轻型化。此外，减量化原则要求产品的包装应该追求简单朴实而不是豪华浪费，从而达到减少废物排放的目的。2再使用原则再使用原则(reuse)，要求制造产品和包装容器能够以初始的形式被反复使用。再使用原则要求抵制当今世界一次性用品的泛滥，生产者应该将制品及其包装当作一种日常生活器具来设计，使
4、其像餐具和背包一样可以被再三使用。再使用原则还要求制造商应该尽量延长产品的使用期，而不是非常快地更新换代。3再循环原则再循环原则(recycle)，要求生产出来的物品在完成其使用功能后能重新变成可以利用的资源，而不是不可恢复的垃圾。按照循环经济的思想，再循环有两种情况，一种是原级再循环，即废品被循环用来产生同种类型的新产品，例如报纸再生报纸、易拉罐再生易拉罐等等；另一种是次级再循环，即将废物资源转化成其它产品的原料。原级再循环在减少原材料消耗上面达到的效率要比次级再循环高得多，是循环经济追求的理想境界。（三）实验动物的选择一、 药理学研究中的选择1、 临床药物代动物学研究：首选动物及性别，应尽
5、量与药效量或毒理学研究所用动物一致。药物动力学参数测定：最好使用犬、猴子等大动物，可在同一动物上多次采样。药物分布实验：大、小鼠较方便。药物排泄试验：一般首选大鼠，胆汁采集可在乙醚麻醉，胆管插管引流。2、 一般药理研究：主要药效作用以外广泛药理作用的研究。动物：小鼠、大鼠、猫、犬等性别不限。3、 作用于神经系统的药物研究：促智药：成年大小鼠一般应用幼年、老年鼠。镇静催眠药：成年小鼠 便于分组。抗痛药：成年大小鼠，以雄性为宜。镇痛药：需在整体动物上进行，常用成年小鼠、兔，也可用豚鼠、犬等，雌雄兼用。中枢性肌松药：小鼠、猫。解热药：首选兔。兔：品种、年龄、室温、动物活动情况等不同，对发热反应速度和
6、程度有明显影响，应按药典规定进行。神经节传导阻滞影响药物：首选猫，最常用的是颈神经节，因其前后部易于区分。4、 心血管系统的药物研究：抗心肌缺血药：狗、猫、兔、大小鼠。抗心率失常药：豚鼠。小鼠不便操作。降压药：狗、猫、大鼠。不宜用兔：外周循环对外界环境刺激极敏感，血压变化大。治疗心功能不全药：狗、猫、豚鼠、兔。一般不用大鼠。降血脂药：大鼠、兔。模型动物：遗传性高脂血症WHHL兔。抗动脉粥样硬化药：一般用兔、鹌鹑。抗血小板聚集药、抗凝血药：大鼠、兔，个别也可用小鼠。5、 呼吸系统药物：镇咳药筛选：首选豚鼠，对化学刺激或机械刺激都很敏感。猫：生理条件下很少咳嗽，可用于刺激喉上神经诱发咳嗽，在初筛基
7、础上进一步肯定药物的镇咳作用。支气管扩药：常用豚鼠：气道平滑肌对致痉剂药物反应敏感。大鼠：某些免疫和药理学特点与人类较近。祛痰药：一般用雄性小鼠，兔、猫。犬：适用于观察药物的镇咳作用持续时间。兔：对化学、电刺激不敏感。大小鼠：实验可靠性差。6、 消化系统药物：胃肠解痉药：大鼠、豚鼠、家兔、犬等，雌雄均可。催吐、止吐：犬、猫、鸽等。兔、豚鼠、大鼠，无呕吐反射，故不选用。7、泌尿系统药物：利尿、抗利尿药：雄性大鼠或犬为好。8、分泌系统药物：肾上腺皮质激素类药物：大小鼠，雌雄均可。9、计生药：终止中期妊娠药，子宫收缩药：雌性大鼠、豚鼠、兔、猫。女用避孕药：雌性大鼠、仓鼠、兔、猕猴。男用避孕药：雄性近
8、交系大鼠，猕猴。10、精神药物：抗焦虑药：成年大小鼠、兔。抗抑郁药：大小鼠，其次为犬、猪。二、药物安全性评价试验1、急性毒性大多为半数致死量（LD50）实验。也有不少国家对一部分药不再要求做LD50。可节约大量的动物和药品。如药物毒性很小，则进行耐受剂量实验。常用大鼠、小鼠，最常用为封闭群动物2、长期毒性试验观察连续给予受试药物。需两种以上的动物才能较正确地预示受试药物在临床上的毒性反应，常用：一种为啮齿类大鼠，另一种为犬、猴、小型猪。大鼠:封闭群，大动物：Beagle犬。3、生殖毒性实验：（1）一般生殖毒性试验3个独立试验（2）致畸敏感期毒性试验（3）围产期毒性试验不同种属动物对药物敏感性不
9、同至少应用二种以上动物。啮齿类：小鼠、大鼠、仓鼠非啮齿类：兔、犬、灵长类。4、致突变及致癌试验长期致癌：（1）对动物要求高。常用：F344大鼠，A系小鼠，基因剔除小鼠。（2）对环境要求高；（3）排除一切其它致癌因素。5、药物依赖性试验观察期一般较长，项目较多。都采用大、小鼠及猴。6、其他毒性试验：药物毒性试验及原则之一，给药途径必须与将采用的临床给药途径相一致。外用药毒性 :皮肤给药。（无论急性、长期）一般用兔、豚鼠、大鼠。外用药的刺激过敏试验，豚鼠(过敏)，(大鼠皮肤不适宜)；兔，(刺激)栓剂：年轻兔、大鼠滴鼻剂、吸入剂：考照临床给药途径，用大鼠、豚鼠、兔。眼科以兔为宜。生物制品，生物工程产
10、品：有较为严格种属特异性。三 动物实验的应用题目：Protective role of puerarin on lead-induced alterations of the hepatic glutathione antioxidant system and hyperlipidemia in rats(一) 目的：探讨根素对铅诱导的肝脏谷胱甘肽氧化系统以及老鼠高脂血症的作用机理。（二）材料与方法：1 材料：根素、醋酸铅溶、LDL感受器、CYP7A1抗体、HMGR抗体、-激动蛋白受体、雄性Wistar大鼠2 方法：2.1 动物分组体重170g 8周龄大鼠实验室条件下适应后，随即分为4组，每组
11、10只：（1）对照组(Ctrl)：饮食无铅水，试验期间每天灌喂0.9%的生理盐水（2）铅处理组(Pb)：每天饮食500 mg Pb/L的水（3）铅+根素组(Pb+Pu)：每天饮食500 mg Pb/L的水，灌胃200 mg/(kg.day)根素。（4）根根素组(Pu)：饮食同对照组，每天灌喂200 mg/(kg.day)根素。 室温23，空气湿度60%，自由饮食。实验持续75天2.2 测定指标：每日前摄入量、血液和肝脏中的Pb含量、ALT、AST、肝脏组织学变化、肝脏ROS, TBARS、 GSH、肝脏中HMGR、CYP7A1基因表达等（三）结果与分析Fig 5 根对铅诱导的老鼠肝脏GCL、G
12、R、Gpx及GST活性的影响GCL、GR、Gpx及GST对于保持细胞的氧化还原平衡发挥着重要作用，由图5可以看出，铅诱导后，肝脏中的GCL、GR、Gpx及GST四种酶的活性均显著降低，而服用根素后，能使这四种酶的活性恢复到正常水平。Fig 6 根素对铅诱导的老鼠血浆脂质含量的影响由图6可以看出，铅有道能显著增加老鼠血浆中脂质含量，与对照组相比，胆固醇、甘油三酯及低密度值蛋白含量分别增加了1.34倍、1.32倍和1.78倍，差异显著。而血浆中高密度脂蛋白含量降低了34%。服用根素后，血浆中的胆固醇、甘油三酯及低密度值蛋白分别降低20%、22%和45%，HDL含量增加了0.34倍，差异均达到显著水
13、平。结果表明，根素能抑制铅诱导的老鼠高脂血症。图7 根素对铅诱导的老鼠肝脏HMGR、CYP7A1及LDL-R表达的影响A图：根素对铅诱导的老鼠肝脏脂质代相关蛋白表达的影响B图：LDL-R蛋白条带的相关度分析C图：HMGR蛋白条带的相关度分析D图：CYP7A1蛋白条带的相关度分析由图7可以看出，铅诱导后，与对照组相比，HMGR表达量增加了64%，而根素能显著抑制HMGR的表达；铅诱导使得CYP7A1及LDL-R的表达量分别增加了78%和60%，而根素能显著降低CYP7A1及LDL-R的表达量；Pb+Pu、Pu及对照组三组之间差异无统计学意义。（四）结论上述实验表明：根素通过减少ROS的产生、更新抗氧化酶的活性、影响肝脂生物合成及代相关基因的表达，而对Pb诱导的肝脏损伤和高脂血症具有保护作用。 . . .
