第09章 维生素类药物的分析课件

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1、第九章,维生素类药物的分析,第一节 概述,维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的 微量营养物资。 人体不能合成维生素。,VitA、D2、D3、 E、K1 等,脂溶性,水溶性,VitB族(B1、B2、B6、B12) VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺,VitM,VitPP,-H 维生素A醇 -COCH3 维生素A醋酸酯 -COC15H31 维生素A棕榈酸酯,R :,第二节 维生素A,为一个具有共轭多烯侧链的 环己烯,（一）,具有UV吸收,存在多种立体异构化合物,维生素A 325.5 100% 新维生素Aa 328 75% 新维生素Ab 320.5 24% 新维生素Ac 310.5 15% 异维生素A

2、a 323 21% 异维生素Ab 324 24%,相对生物效价,VitA2,VitA3,易发生脱氢、脱水、聚合反应,鲸醇,或有金属离子存在时氧化,环氧化物,VitA醛,VitA酸,CHCl3,不溶于水 易溶于有机溶剂和植物油等,条件 无水无醇,CHCl3,蓝色,紫红,（BP（1998）,max为326nm 一个吸收峰,max为350390nm 三个吸收峰,去水VitA（VitA3）,VitA,USP 显色剂 磷钼酸 规定斑点颜色和Rf值,BP 杂质对照品法 显色剂 三氯化锑,立体异构体 氧化产物及光照产物 合成中间体 去氢维生素A（ VitA2） 去水维生素A（ VitA3）,UV法,（一）,

3、三点校正法 1. 条件： （1）杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小； （2）物质对光的吸收具有加和性。,2. 波长的选择： （1） 1 VitA的max（328nm） （2） 2 3 分别在1的两侧各选一点,测定对象 VitA醋酸酯,第一法 等波长差法,第二法 等吸收度法(皂化法),测定对象 VitA醇,测定法 （1）基本步骤: 第一步 A选择 选择依据： 所选A值中杂质的干扰已基本消除,注意： C 为混合样品的浓度,第二步 求,第三步 求效价,换算因数由纯品计算而得：,第四步：求标示量,方法：,（2）,第一法,维生素A醋酸酯,判断 是否在326329n

4、m之间,在326329nm之间,改用第二法,是,否,求算 并与规定值比较,规定值 差值,判断差值是否超过规定值的,有一个以上超过,无超过,计算 A328（校正）,用A328计算,第二法,第二法,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为,A300 ：0.354 A316 ：0.561 A328 ：0.

5、628 A340 ：0.523 A360 ：0.216,A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328 ：0.299,求本品中维生素A的含量？,A300 /A328 ：0.564 A316/A328 ：0.893 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.833 A360/A328 ：0.344,0.555 0.907 1.000 0.811 0.299,+ 0.01 0.01 0 + 0.02 + 0.04, ,= = = = =,适用于维生素A醇,（等吸收度法）,

6、第一法无法消除杂质干扰时用此法, 皂化法、6/7A法 ,（3）第二法,水溶性,脂溶性,判断max是否在323327nm之间,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算,是,否,判断 A300 /A325 是否大于0.73,是,否,取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定,计算A325(校正),0,3%,3%,三氯化锑比色法,（二）,优点 简便 快速,max 618nm620nm,标准曲线法,苯并二氢吡喃醇,第三节 维生素E,*,*,*,生物效价 右旋体 ： 消旋体 = 1.4 ：10,（天然品）,（合成品）,dl生育酚醋酸酯,结构与性质,一、,苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链,1、易溶于有机溶剂，不

7、溶于水,2、UV,3、酯键 易水解,（一）,硝酸反应,橙红色,（橙红色）,生育红,生育酚,HNO3,强氧化剂,取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75加热15分钟，溶液应显橙红色。,三氯化铁联吡啶反应,（二）,生育酚,对-生育醌,弱氧化剂,红色,= 41.045.5,max = 284nm,min = 254nm,0.01%无水乙醇中,维生素EUV图,薄层板 硅胶G,展开剂 环己烷 -乙醚（4 ：1）,显色剂 硫酸（105 5）,VitE Rf = 0.7,游离生育酚,硫酸铈滴定液（0.01mol/L） 二苯胺（亮黄灰紫）,利用游离生育酚的还原性， 将硫酸铈还原成

8、硫酸亚铈,试剂,（二）,（M生育酚= 430.8）,例,取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过 1.0ml。,2.15,药典规定,消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml,设：应消耗硫酸铈液 V ml,0.011.0 实际浓度 V,若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L， 应重新计算硫酸铈的消耗量,例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/L,GC法,（一）,GC特点,1、,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,挥发性低、不稳定、极性强衍生化易受样品蒸气压限制,载气N2 固定液硅

9、酮（OV-17） 担体硅藻土或高分子多孔小球 柱温265 检测器氢火焰离子化检测器(FID) 内标正三十二烷 n 500 R2,内标法加校正因子,内标法,供试液（样品+内标）,内标物,对照液（对照+内标）,校正因子：,实际工作中的计算方法,例,内标液 取正三十二烷加正己烷溶解 并稀释成1.0mg/ml溶液,对照液 精密称取VitE对照品0.2011g 置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内 标液10ml，密塞，振摇使溶解，取 13ul注入GC仪，测定，计算,供试液 精密称取供试品0.1998g置棕 色具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul 注入GC仪，测定，计算,对照液,

10、供试液,本品含C31H52O3应为96.0 102.0%,BP GC 内标 正三十二烷 R1.4,USP GC 内标 十六酸十六醇酯 R1.0,JP HPLC 外标 dl生育酚 R1.4,利用生育酚的易氧化性,还原型,氧化型,二苯胺（亮黄灰紫）,防止Ce(SO4)2的水解 减慢生育酚被O2氧化速度,C、酸性条件,Ce(SO4)2易溶于水 生育酚易溶于醇,B、溶剂,分子量较大，反应慢 易被O2氧化,A、反应速度,MVitE = 472,样品 dl生育酚 固定相十八烷基硅烷键合硅胶 流动相甲醇-水（49 ：1） 检测波长292nm R2.6 RSD0.8%,测定对象血清中VitA和VitE 固定相

11、十八烷基硅烷键合硅胶 流动相甲醇-水（96 ：4） 检测波长 8前330nm 8后292nm,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),第四节 维生素B1,HCl,Cl-,（一）,溶解性,1、易溶于水,2、水溶液呈酸性,（二）,UV,共轭双键,max = 246nm,嘧啶环 伯氨,噻唑环 季铵,1、可与酸成盐,2、与生物碱,3、含量测定 非水碱量法,（三）,硫色素反应,（四）,碱性,ChP,硫色素,2H,VitB1,H+,H+,H+,H+,S元素反应,Cl-反应,喹那啶红亚甲蓝 （紫红天蓝）,UV法,（二）,片剂、注射剂,= 421,（每片）相当于标示量的%=,A = ECL,规格 g/片,g/100

12、ml,g,ChP,（每ml）相当于标示量的%=,规格 g/ml,ml,准确度高 灵敏度低 操作繁琐 设备简单,2337.27,3479.22,取本品约50mg，精密称定，加水50ml溶解后，加盐酸2ml，煮沸，立即滴加硅钨酸试液4ml，继续煮沸2分钟，用80恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀先用煮沸的盐酸溶液（120）20ml分次洗涤，再用水10ml洗涤1次，最后用丙酮洗涤2次，每次5ml，在80干燥至恒重，精密称定，所得重量与0.1939相乘，即得,例,精密称取本品0.0519g，加水50 ml溶解，加盐酸2ml煮沸，立即滴加 硅钨酸试液4 ml，继续煮沸2分钟，用 80恒重的垂熔玻璃坩埚滤过，沉

13、淀 先用煮沸的盐酸溶液（120）20 ml 分次洗涤，再用水10ml 洗涤1次，后 用丙酮洗涤2次，每次5ml。在80干 燥至恒重，称得沉淀重量为0.2557g。 求本品的含量按干燥品计算为多少？,(本品干燥失重项下测定结果为3.73%),A. 取样量50mg 提高灵敏度,B. 80 保持4个H2O,C. HCl 增大沉淀颗粒,D. 硅钨酸 ：VitB1 = 8 ：1 使沉淀完全,E. 硅钨酸边搅拌边缓慢加入 增大沉淀颗粒,NaOH,激发波长365nm 发射波长435nm,+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH + 异丁醇,+ NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇 + NaOH +

14、 异丁醇,S,d,A,b,对照液,供试液,（1）灵敏度高，线性范围宽 （2）代谢产物不干扰，适用于 体液分析,第五节 维生素C,L抗坏血酸,二烯醇结构,二酮基结构,二烯醇结构,有活性,有活性,无活性,糖类的显色反应,50,结构与糖类相似,C3OH的 pKa = 4.17,C2OH的 pKa = 11.57,一元酸,L(+)抗坏血酸 活性最强,手性C（C4、C5）,*,*,与碱反应,1、与AgNO3反应,2、与2，6 - 二氯靛酚反应,(ChP2000),氧化型,玫瑰红色,(ChP2000),（玫瑰色）,（无色）,3、与碱性酒石酸铜反应,USP,4、与KMnO4反应,或盐酸,50,吡咯,USP,

15、（蓝色）,(糠醛),（戊糖）,BP,0.01mol/L HCl,指示剂 淀粉指示液,H+,取本品约0.2g，精密称定，加新 沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶 解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴 定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝 色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液 (0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6,（1）酸性环境 d . HCl,（2）新沸冷H2O,减慢VitC被O2氧化速度,（3）立即滴定,赶走水中O2,减少O2的干扰,（4）附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,USP,JP,（2）快速滴定 2min内,（1）酸性环境 HPO3-HAc,稳定VitC,防止其他还原性物质干扰,（3）剩余比色测定,（定量过量）,（测剩余染料）,（4）缺点,需经常标定,贮存一周,干扰多 氧化力较强,1、HPLC的优点,灵敏度高,选择性高,分离分析同步,微量分析,干扰少,快速,2、HPLC法分离VitC常用方法及测 定对象,对象 制剂、生物样品、果汁,方法 离子交换色谱法 离子对色谱法 分配色谱法（正、反相）,血、尿、组织、细胞等,例,多种维生素片中VitA、 VitB1、 VitB2 、VitB6 、烟酰胺、VitC、 VitE的含量测定,色谱柱 ODS 流动相 A、水 -甲醇