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1、生长快、肉质好的转基因鱼(中国),乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷),过程分析,1.1 DNA重组技术的基本工具,DNA重组技术的基本工具,准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） 基因转移工具（“分子运输车”）,基因的大小以纳米计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具：,识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。,主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性核酸内切酶
2、。,4000种。,形成两种末端,一、 “分子手术刀” 限制性核酸内切酶,大肠杆菌的一种限制酶（EcoR)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。 Sma能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。,重播,限制酶切割DNA后形成的末端黏性末端、平末端是如何形成的？,什么叫黏性末端？,当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。,什么叫平末端？,当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。,基因的针线DNA连接酶,切断的D
3、NA片段要与受体细胞的DNA连接，你觉得可以用什么酶？,DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？,限制酶切割后有两种不同的结果，一种产生黏性末端，一种产生平末端。那么恢复它们的连接时，所用DNA连接酶是否可以不加选择？,E.coliDNA连接酶：连接黏性末端,T4DNA连接酶：连接黏性末端和平末端,基因进入受体细胞的载体,要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物的细胞内去！能将外源基因送入细胞的工具就是载体。,载体必须具备的条件,如果载体对受体细胞有害将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，没有标记基因我们能否鉴定？ 假如目的基因导入受体细胞后不能复
4、制将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？,作为载体的必要条件,1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害,作为载体的必要条件,能自我复制 有切割位点 能与目的基因结合 能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达； 有遗传标记基因 对受体细胞无害 比较容易得到,3、基因的运输工具运载体,能复制并带着插入的目的基因一起复制,有切割位点,有标记基因的存在，将来可用含青霉素的培养基鉴别。,，在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（
5、 ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶,不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA,D,练习,不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA,D,补救练习,3) 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达,C,练习,达标，在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段
6、，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 基因工程常用的受体细胞有（ ） (1)大肠杆菌 （2）枯草杆菌 （3）支原体 （4）动植物细胞 A. （3）（4） B. （1）（2）（4） C. （2）（3）（4） D. （1）（2）（3）,A、 BamHI和EcoRI；末端互补序列AATT B、 BamHI和Hind；末端互补序列GATC C、 EcoRI和Hind；末端互补序列AATT D、 BamHI和BglII；末端互补序列GATC,限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上 特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI， EcoRI，Hind以及Bgl的辨识序列。箭头表示 每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶 所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确 的末端互补序列为何？（ ）,基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ） A、人工合成目的基因 B、目的基因与运载体结合 C、将目的基因导入受体细胞 D、目的基因的检测和表达,C,一、DNA重组技术的基本工具 1.限制性核酸内切酶-”分子手术刀” 2. DNA连接酶-”分子缝合针” 3 基因的运载工具运载体：具备条件,本课小结：,分类 作用,来源 作用 特点 结果,作业： 重组DNA分子的模拟制作。,效果分析：,
