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1、蛋白质工程的崛起,活动1:阅读P26. 回答:为什么要进行蛋白质工程?,一、蛋白质工程崛起的缘由,这些蛋白质只是适应生物自身的需要，但不一定完全符合人类生产和生活需要，所以需要加以改造。,一、蛋白质工程崛起的缘由,1、基因工程的应用 （1）基因工程的实质：,将一种生物的基因转移到另一种生物体内，使后者产生本不能产生的蛋白质，进而表现出新的性状。,在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质。,（2）基因工程的不足：,天然蛋白质是生物在长期进化过程中形成的，它们的结构和功能符合特定物种生存的需要，却不一定完全符合人类生产和生活的需要。,2、天然蛋白质的不足,3、蛋白质工程的目的,生产符合人类生产和生活的
2、需要的蛋白质。,例如：,改造,玉米中赖氨酸含量比较低,天冬氨酸激酶 （352位的苏氨酸）,二氢吡啶二羧酸合成酶（104位的天冬酰胺）,天冬氨酸激酶 （异亮氨酸）,二氢吡啶二羧酸合成酶（异亮氨酸）,玉米中赖氨酸含量可提高数倍,改造,改造,问题1：,解决：,蛋白质功能 不能满足需求,改变蛋白质的结构,-半胱氨酸-,体外很难保存,？如何改造,-丝氨酸-,体外可以保存半年,问题2：如何对天然蛋白质的结构进行改造？,干扰素,干扰素（改）,思考与讨论,(你认为直接对蛋白质分子进行操作，还是通过对基因的操作来实现？能否说出你的理由？),答：毫无疑问应该从对基因的操作来实现对天然蛋白质改造，主要原因如下： （
3、1）任何一种天然蛋白质都是由基因编码的，改造了基因即对蛋白质进行了改造，而且改造过的蛋白质可以遗传下去。如果对蛋白质直接改造，即使改造成功，被改造过的蛋白质分子还是无法遗传的。 （基因改造可遗传； 蛋白质改造不可遗传） （2）对基因进行改造比对蛋白质直接改造要容易操作，难度要小得多。,-半胱氨酸-,体外很难保存,？如何改造,-丝氨酸-,体外可以保存半年,问题3、你能推测出干扰素基因改造前和改造后的该部分序列吗？ （半胱氨酸：UGU；丝氨酸：UCU）,干扰素,干扰素（改）,思考与讨论,某多肽链的一段氨基酸序列是： -丙氨酸-色氨酸-赖氨酸-甲硫氨酸-苯丙氨酸- 丙氨酸：GCU、GCC、GCA、G
4、CG 色氨酸：UGG 赖氨酸：AAA、AAG 甲硫氨酸：AUG 苯丙氨酸：UUU、UUC,讨论： 1、请写出决定这一段肽链的mRNA片段和基因片段的核苷酸序列。 2、确定目的基因的碱基序列后，怎样才能合成或改 造目的基因（DNA）？,思考与讨论,（1）mRNA序列为： GCU（或C或A或G）UGGAAA（或G）AUGUUU（或C） 脱氧核苷酸序列： CGA（或G或T或C）ACCTTT（或C）TACAAA（或G） （2）确定目的基因的碱基序列后，就可以根据人类的需要改造它，通过人工合成的方法或可以通过基因的定点诱变技术来改变后从基因文库中获取。,二、蛋白质工程的基本原理,根据人们对蛋白质功能的特
5、定需求，对蛋白质的结构进行分子设计。,1、目标：,2、原理(实质)：,改造基因（基因修饰或基因合成）,逆转录,转录,DNA,RNA,翻译,蛋白质,复制,复制,天然蛋白质的合成遵循中心法则,转录,DNA,RNA,翻译,肽链,折叠等,具有空间结构的蛋白质,表达生物特有的功能或性状,天然蛋白质的合成过程,遵循中心法则，并需经过高级空间结构的转变,. 途径:,预期的蛋白质功能,设计预期的蛋白质结构,推测应有的氨基酸序列,找到相对应的脱氧核苷酸序列（基因）,蛋白质 三维结构,氨基酸序 列多肽链,基因 DNA,预期功能,分子设计,mRNA,生物功能,转录,翻译,折叠,图1-29蛋白质工程流程图,蛋白质工程
6、是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类对生产和生活的需求。,4、蛋白质工程的概念 P27,了解蛋白质的结构和功能,改造基因（基因修饰或基因合成）,定向改造或制造蛋白质,5、基因工程与蛋白质工程的区别,基因工程,蛋白质工程,实质,结果,联系,通过改造基因，以 定向改造天然蛋白 质，甚至创造自然 界不存在的蛋白质,将目的基因从供体 转移到受体细胞，并 在受体细胞中表达,只能生产自然界 已存在的蛋白质,蛋白质工程是在基因工程基础上，延 伸出的第二代基因工程,能生产自然界 不存在的蛋白质,重组,创新,能不能根
7、据人类需要的蛋白质的结构，设计相应的基因，导入合适的细菌中，让细菌生产人类所需要的蛋白质食品呢？,理论上讲可以，但目前还没有真正成功的例子。一些报道利用细菌生产人类需要的蛋白质往往都是自然界已经存在的蛋白质，并非完全是人工设计出来而自然不存在的蛋白质。主要原因是蛋白质的高级结构非常复杂，人类对蛋白质的高级结构和在生物体内如何行使功能知之甚少，很难设计出一个崭新而又具有生命功能作用的蛋白质，而且一个崭新的蛋白质会带来什么危害也是人们所担心的。,异想天开,三、蛋白质工程的进展和前景,1、进展P28： （1）对胰岛素的改造，使其成为速效型药品。,天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素
8、从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已通过临床实验。,（2）水蛭素改造,水蛭素是水蛭唾液腺分泌的凝血酶特异抑制剂，它有多种变异体，由65或66个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药物用于治疗血栓疾病。为提高水蛭素活性，在综合各变异体结构特点的基础上提出改造水蛭素主要变异体HV2的设计方案，将47位的Asn（天冬酰胺）变成Lys（赖氨酸），使其与分子内第4或第5位Thr（苏氨酸）间形成氢键来帮助水蛭素N端肽段的正确取向，从而提高凝血效率，试
9、管试验活性提高4倍，在动物模型上检验抗血栓形成的效果，提高20倍。,2、前景诱人： 探索将蛋白质工程应用于微电子方面。,3、难度很大： 主要是目前科学家对大多数蛋白质的高级结构的了解还很不够。,用蛋白质工程制造的电子元件具有体积小、 耗电少和效率高的特点。,1、你知道人类蛋白质组计划吗？它与蛋白质工程有什么关系？我国科学家承担了什么任务？,人类蛋白质组计划是继人类基因组计划之后，生命科学乃至自然科学领域一项重大的科学命题。2001年，国际人类蛋白质组组织宣告成立。2003年，该组织正式提出启动了两项重大国际合作行动：一项是由中国科学家牵头执行的“人类肝脏蛋白质组计划”；另一项是以美国科学家牵头
10、执行的“人类血浆蛋白质组计划”，由此拉开了人类蛋白质组计划的帷幕。,四、知识拓展,“人类肝脏蛋白质组计划”是国际上第一个人类组织器官的蛋白质组计划，由我国贺福初院士牵头，这是中国科学家第一次领衔的重大国际科研协作计划，总部设在北京，目前有16个国家和地区的80多个实验室报名参加。它的科学目标是揭示并确认肝脏的蛋白质，为重大肝病预防、诊断、治疗和新药研发的突破提供重要的科学基础。,人类蛋白质组计划的深入研究将是对蛋白质工程的有力推动和理论支持。,2、你知道酶工程吗?绝大多数酶都是蛋白质，酶工程和蛋白质工程有什么区别？,酶工程就是指将酶所具有的生物催化作用，借助工程学的手段，应用于生产、生活、医疗诊断和环境保护等方面的一门科学技术。（如加酶洗衣粉） 通常所说的酶工程是用工程菌生产酶制剂，而没有经过由酶的功能来设计酶的分子结构，然后由酶的分子结构来确定相应基因的碱基序列等步骤。 因此，酶工程的重点在于对已存酶的合理充分利用，而蛋白质工程的重点则在于对已存在的蛋白质分子的改造。当然，随着蛋白质工程的发展，其成果也会应用到酶工程中，使酶工程成为蛋白质工程的一部分。,小结,1、蛋白质工程崛起的缘由,2、蛋白质工程的原理：,中心法则的逆推,预期的蛋白质功能出发,推测应有的氨基酸序列,设计预期的蛋白质结构,找到相应的脱氧核苷酸序列,3、蛋白质工程的进展和前景,
