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1、.,实验一显微镜的使用及微生物形态的观察,.,1熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能； 2学习并掌握油镜的原理和使用方法； 3学习观察微生物的个体形态； 4学会生物图的绘制。,一、目的要求,.,二、显微镜的基本构造,1. 物镜转换器 2. 接物镜 3.游标卡尺 4.载物台 5.聚光器 6. 彩虹光阑 7.光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋 12. 微调螺旋 13. 镜臂 14.镜筒 15.目镜 16.标本移动螺旋,.,显微镜是由机械装置和光学系统两大部分组成。,1机械装置 镜座（base）和镜臂（arm） 镜座位于显微镜底部 , 呈马蹄形，它支持全镜。
2、镜臂有固定式和活动式两种，活动式的镜臂可改变角度。镜臂支持镜筒。 镜筒（body tube） 是由金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器。镜筒有单筒和双筒两种，单筒又可分为直立式和后倾式两种。而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜45。双筒中的一个目镜有屈光度调节装置，以备在两眼视力不同的情况下调节使用。,.,转换器（nosepiece）：为两个金属碟所合成的一个转盘，其上装 3 - 4个物镜 , 可使每个物镜通过镜筒与目镜构成一个放大系统。 载物台（stage）：又称镜台，为方形或圆形的盘，用以载放被检物体，中心有一个通光孔。在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本推动
3、器，将标本固定后，能向前后左右推动。有的推动器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的视野。 调焦装置：是调节物镜和标本间距离的机件，有粗动螺旋（coarse adjustment）即粗调节器和微动螺旋（fine adj-ustment）即细调节器，利用它们使镜筒或镜台上下移动，当物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像。,.,2光学系统 物镜（objective）：安装在镜筒下端的转换器上，因接近被观察的物体，故又称接物镜。其作用是将物体作第一次放大，是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数。如10/0.25 ；160/0.17 ，
4、其中 “10 ”表示放大倍数，“0.25” 表示数值孔径（numerical aperture），“160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度（mm）。 目镜（coular lens）：装于镜筒上端，由两块透镜组成。目镜把物镜造成的像再次放大，不增加分辨力，上面一般标有4、10、16等放大倍数，可根据需要选用。一般可按与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的 500-700 倍，最大也不能超过 1000 倍的选择。目镜的放大倍数过大，反而影响观察效果。,.,聚光器（condenser）：光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射标本，增强明度和造成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚光器由聚光
5、镜和虹彩光圈（iris diaphragm）组成，聚光镜由透镜组成。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动把手可随意调整透进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像。 光源（light source）：较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的镜座内，通过按扭开关来控制；老式的显微镜大多是采用附着在镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使用油镜或光线弱时可用凹面反光镜。 滤光片（filter）：可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线波长不同。如只需某一波长的光线时，就要用滤光片。选用适当的滤
6、光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长的可见光，可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片。,.,三、基本原理,1、细菌的个体形态是指细菌细胞的大小，形状等特征，利用观察个体形态对细菌进行初步识别和鉴定。,.,.,2、放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝，并进一步分化产生孢子丝及孢子。,.,.,3、霉菌可产生复合分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌
7、丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。,.,毛霉与根霉,.,青霉,分生孢子,分生孢子梗,小梗,梗基,附枝,.,曲霉,分生孢子,次生小梗,初生小梗,顶囊,分生孢子梗,足细胞,.,显微镜、细菌三型涂片、霉菌 和放线菌的永久玻片等。,四、器材,.,五、操作步骤,（1）置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约 3-4 ，镜检者姿势要端正，一般用左眼观察，右眼便于绘图或记录，两眼必须同时睁开，以减少疲劳，亦可练习左右眼均能观察。 （2）调节光源、光线较强的天然光源宜用平面镜；光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜。,.,.,（3）低倍镜观察
8、 检查的标本需先用低倍镜观察，因为低倍镜视野较大，易发现目标和确定检查的位置。 将三型涂片玻片标本置镜台上，用标本夹夹住，移动推动器，使观察对象处在物镜正下方，转动粗调节器，物镜降至距标本约0.5cm处，由目镜观察，此时可适当地缩小光圈，否则视野中只见光亮一片，难见到目的物，同时用粗调节器慢慢升起镜筒，直至物像出现后再用细调节器调节到物像清楚时为止，然后移动标本，认真观察标本各部位，找到合适的目的物，并将其移至视野中心，准备用高倍镜观察。,.,（4）高倍镜观察 将高倍镜转至正下方，在转换物镜时，需用眼睛在侧面观察，避免镜头与玻片相撞。如果高倍镜触及载玻片应立即停止旋动，说明原来低倍镜就没有调准
9、焦距，目的物并没找到，要用低倍镜重调，如果调对了，换高倍镜时基本可以看到目的物，若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。找到最适宜观察的部位后，将此部位移至视野中心，准备用油镜观察。,.,（5）油镜观察 用粗调节器将镜筒提起约2，将油镜转至正下方。 在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油，切勿加多。 从侧面注视，用粗调节器将镜筒小心地降下，使油镜浸在香柏油中，其镜头几乎与标本相接，应特别注意不能压在标本上，更不可用力过猛，否则不仅压碎玻片，也会损坏镜头。 标本观察完毕后，转动粗调节器将镜筒升起，取下标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净，然后用擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后再用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。,.,（6）观察后的处理工作 擦完后，把物镜转离光轴，把反光镜转到与载物台垂直的方向，以减少灰尘粘落上面，而后罩上镜套，小心的放回镜箱内，保存备用。 注意：微生物标本片，多用涂片法制成，观察完毕，不能用力擦去玻片上的镜油，只能用擦镜纸轻轻压吸或滴一滴二甲苯用擦镜纸轻拉。示教片看完处理后应放回原处。,.,六、思考题和作业题,1、使用油镜观察时，为什么要在载玻片上滴加香柏油？ 2、镜检玻片标本时，为什么要先用低倍物镜观察，而不是直接用高倍物镜或油镜观察？ 3、绘制青霉和根霉图,
