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1、土壤中分解尿素的细菌的分离和计数一、选择题1下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是()A土壤取样时应选取距地表约38 cm的土壤层B测定细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液C土壤中能合成脲酶的细菌能分解尿素D向以尿素为唯一氮源的培养基中加入刚果红溶液可以鉴定出分解尿素的细菌解析：选D鉴定分解尿素的细菌时需向以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。2分离土壤中分解尿素的细菌时，对培养基的要求是()加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A BC D解析：选C土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生成氨，利用尿素中的氮合成自
2、身有机物。培养基中尿素作为唯一氮源，分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物要用固体培养基，需要加琼脂；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物，需要加葡萄糖作为碳源。3下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448 hD确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析：选D采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在30300的实验组平板进行计数。4下列操作需
3、要在火焰旁进行的是()土壤取样称取土壤稀释土壤溶液涂布平板微生物的培养A BC D解析：选D实验操作过程要进行严格的无菌操作，除实验空间必须消毒外，每个操作步骤都必须在无菌区进行。土壤的称取、溶液的稀释、涂布平板都需要在酒精灯火焰旁的无菌区(或接种箱内的酒精灯火焰旁)完成，以防止杂菌污染。5通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法不能从混杂的微生物群体中分离出的是()A大肠杆菌 B霉菌C放线菌 D固氮细菌解析：选A固氮微生物的生长
4、不需要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培养基上正常生长；加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常生长，而放线菌却能利用酚作为原料合成自身产物。6在做分离分解尿素的细菌实验时，一同学从对应稀释倍数为106的培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。该同学的结果产生的原因可能有()土样不同培养基被污染操作失误没有设置对照A BC D解析：选A实验结果不同，最可能的原因是土样不同，其次是操作失误或培养基被污染，而与是否设置对照没有关系。7三个培养皿中分别加入10 mL不同的培养基，然后接种相同的大肠杆菌样液。培养36 h后，
5、计算菌落数，结果如下表。下列相关叙述正确的是()培养皿培养基成分菌落数琼脂、葡萄糖35琼脂、葡萄糖、生长因子250琼脂、生长因子0A该实验采用的是液体培养基B该实验采用平板划线法接种C和对照，说明大肠杆菌的生长不需要生长因子D和对照，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖解析：选D该培养基加入了琼脂，故为固体培养基；对微生物进行计数时宜采用稀释涂布平板法接种，而不是平板划线法接种；与中有葡萄糖、生长因子两种变量，不能得出相应结论；和对照，自变量是有无葡萄糖，说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖。8苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，
6、研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是()A图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源D使用平板划线法可以在上获得单菌落解析：选C用苯酚作为选择培养基中的碳源，也是微生物的能源物质，会影响其他微生物生长。测定培养液中细菌数目常采用稀释涂布平板法。若为对照实验，则中应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在上获得单菌落。9关于土壤中细菌的分离，下列正确的操作步骤是()土壤取样称取10 g
7、土壤，加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107倍的稀释液A BC D解析：选C在分离土壤中某种细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。10下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()A可采用干热灭菌法对微生物培养基进行灭菌B测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：选A培养基灭菌通常用的是高压蒸汽灭菌法，而干热灭菌法
8、通常适用于玻璃器皿、金属用具等耐高温且不适合其他方法的物品；分离能分解尿素的细菌，用的选择培养基里尿素是唯一的氮源，这样才能分离出分解尿素的细菌。二、非选择题11多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，呈油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品_，接种到以_为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于_。 (2)对初步提取到的菌株要进行_，一般操作方法有两种，如图是_法。(3)若要测定培养液酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数。若用_法统计菌
9、落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_。(4)将1 mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为_。解析：(1)依题意可知：筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释(溶解)接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上。在该培养基中，只有能降解多氯联苯的微生物才能生长，而其他微生物则不能生长，所以从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌株要进行纯化。图中采用的操作方法是平板划线法。(3)若要测定培养液酵母菌的菌体数
10、，既可在显微镜下用血细胞计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，其目的是检验培养基平板灭菌是否成功(或倒平板是否感染杂菌或是否彻底灭菌)。(4)将1 mL酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为(565758)30.11001035.7107个/L。答案：(1)稀释(溶解)多氯联苯选择培养基(2)纯化平板划线(3)稀释涂布平板检验培养基平板灭菌是否成功(倒平板是否感染杂菌或是否彻底灭菌)(4)5.
11、7107个/L12蛋白酶在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。某同学为筛选产蛋白酶的高产菌株，做了如下实验步骤(配制了下列培养基，在适宜条件下培养)：步骤取样培养基培养结果土壤样品葡萄糖、(NH4)2SO4、K2HPO43H2O、KH2PO4、NaCl、CaCl2、MgSO47H2O，加水定容培养液a1mL培养液a同上菌落挑取单菌落细菌培养基培养液b(1)为实现筛选目的，步骤所使用的培养基配方中，应去除_并加入高浓度的_。(2)为实现目的菌的分离和计数，步骤所使用的培养基中还应加入_制成平板，采用的接种方法是_，实验结果如图A。(3)步骤应挑取图A中_处的菌落，本步骤的目的是_。
12、(4)图B是该蛋白酶和其他酶的热稳定性数据，即酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性。在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在6070 条件下保温一定时间，其作用是_。解析：(1)培养基中添加特定的成分以促进需要的微生物生长而抑制其他微生物生长，用于进行微生物筛选。根据题意，为筛选产蛋白酶的高产菌株，步骤所使用的培养基配方中，应去除葡萄糖并加入高浓度的蛋白质。(2)为实现目的菌的分离和计数，步骤所使用的培养基中还应加入琼脂(凝固剂)制成平板，采用的接种方法是稀释涂布平板法。(3)图A中a处的菌落透明圈最大，故其菌种分解蛋白质的能力最强，所以步骤应挑取图A中a处的
13、菌落，本步骤的目的是快速增加目的菌的种群数量(即扩大培养)。(4)图B曲线表明，6070 条件下，蛋白酶的活性很高，而此时其他酶的活性很低，因此在该蛋白酶的工业化生产过程中，通常需对发酵液在6070 条件下保温一定时间，可大幅度降低发酵液中其他酶的活性。答案：(1)葡萄糖蛋白质(2)琼脂稀释涂布平板法(3)a快速增加目的菌的种群数量(扩大培养)(4)大幅度降低发酵液中其他酶的活性13(四川高考)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源；鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较_
