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1、附 录 A(资料性附录）洗手及手消毒方法A.1 洗手方法A.1.1 湿: 在水龙头下把手淋湿,擦上洗手液。A.1.2 搓: 手心、手背、指缝相对搓揉持续至少15s以上:掌心相对, 手指并拢相互摩擦；手心对手背沿指缝相互搓擦,交换进行；掌心相对, 双手交叉沿指缝相互摩擦； 一手握另一手大拇指旋转搓擦, 交换进行； 弯曲各手指关节, 在另一手掌心旋转搓擦, 交换进行；搓洗手腕, 交换进行。A.1.3 冲: 用清水把手冲洗干净；然后要用清水将水龙头冲洗干净, 再关闭水龙头；最好用擦完手的纸巾或消毒毛巾来关，提倡安装脚踏或感应式水龙头。A.1.4 擦: 用干净的纸巾擦干或烘干机烘干。A.2 手消毒方法
2、按照手消毒剂的产品使用说明，取适量消毒剂于掌心, 双手相互揉搓, 揉搓时应注意手指、指尖、指缝、大拇指和手背等, 并持续至少15s以上, 然后在流动水下冲净或用纸巾擦干。附 录 B(资料性附录）托幼机构环境及物品预防性消毒方法消毒对象物理消毒方法化学消毒方法备注空气开窗通风每日至少2次；每次至少30min。在外界温度适宜、空气质量较好、保障安全性的条件下，应首选持续开窗通风的方式。采用紫外线杀菌灯进行照射消毒每日1次，每次持续照射时间30min以上。1.不具备开窗通风空气消毒条件时使用；2.可使用悬挂式或移动式30W紫外线杀菌灯。按照1.5瓦/m3计算紫外线杀菌灯管需要量，安装悬挂式紫外线灯管
3、高度应距地面2.0m2.2m；3.应定期测试紫外线灯管辐照强度，若低于70W/cm2则应更换灯管；4.有人时禁止开启紫外线杀菌灯，以防误伤；5.采用动态紫外线杀菌空气消毒机在室内有人环境持续消毒时，应使用无臭氧式紫外线杀菌灯。餐具、炊具、水杯煮沸消毒15min或蒸汽消毒10min。1.对食（饮）具进行消毒前应先去掉残渣、清洗干净；2.物品煮沸消毒时应全部浸没在水中；蒸汽消毒时，被蒸物品应疏松放置，水沸后开始计算时间。餐具消毒柜、消毒碗柜消毒。按产品说明使用。1.使用符合国家标准规定的产品。2.保洁柜无消毒作用。不得用保洁柜代替消毒柜进行消毒。毛巾类织物用洗涤剂清洗干净后，置阳光直接照射下曝晒干
4、燥。曝晒时不得相互叠夹。曝晒时间不低于6h。煮沸消毒15min或蒸汽消毒10min。煮沸消毒时，被煮物品应全部浸没在水中；蒸汽消毒时，被蒸物品应疏松放置。使用含氯消毒剂消毒：使用浓度为有效氯250 mg/L、浸泡消毒30min。1.消毒时将织物全部浸没在消毒液中，消毒后用清水将残留消毒剂冲净；2.含氯消毒剂对织物有腐蚀和漂白作用，故有色织物慎用。抹布、拖布煮沸消毒15min或蒸汽消毒10min。煮沸消毒时，抹布应全部浸没在水中；蒸汽消毒时，抹布应疏松放置。使用500 mg/L含氯消毒剂或200 mg/L二氧化氯消毒液浸泡消毒30min。消毒时将抹布全部浸没在消毒液中，消毒后可直接控干或晾干存放
5、；或用清水将残留消毒剂冲净后控干或晾干存放。餐桌、床围栏、门把手、水龙头等物体表面使用250500 mg/L含氯消毒剂或100200 mg/L二氧化氯消毒液擦拭消毒30min。1.可采用表面擦拭、喷洒的消毒方式。2.餐桌消毒后要用清水将残留消毒剂擦净。3.家具、门把手、水龙头等易腐蚀的物体表面消毒后可用清水将残留消毒剂去除。玩具、图书每两周至少通风晾晒一次。1.适用于不能湿式擦拭、清洗的物品。2.曝晒时不得相互叠夹。曝晒时间不低于6h。使用含氯消毒剂消毒：使用浓度为有效氯250 mg/L，表面擦拭、浸泡消毒1030min。1.适用于耐湿、耐腐蚀物品的擦拭、消毒，消毒后用清水将残留消毒剂冲净或擦
6、净；2.根据污染情况，每周至少清洁消毒1次。便盆、坐便器与皮肤接触部位、盛装吐泻物的容器使用含氯消毒剂消毒：使用浓度为有效氯10002000mg/L、浸泡或擦拭消毒30min。1.应先清洗后消毒。2.浸泡消毒时将便盆全部浸没在消毒液中。3.消毒后用清水将残留消毒剂冲净后控干或晾干存放。体温计使用75%乙醇溶液浸泡消毒。1. 应使用符合国家相关规定要求的乙醇消毒剂；2. 浸泡温度计的乙醇应每3天更换1次，且盛放容器应进行灭菌后使用。备注：1.使用的消毒药械应在有效期内，按产品使用说明书规定的正确方法使用。2.含氯消毒剂应按照产品的有效氯含量使用自来水进行配制，应现配现用；配制消毒剂的容器宜加盖，
7、配制场所应通风透气，配制人员应注意个人防护，佩戴口罩、手套等防护用品，必要时可加戴防护镜。3.当托幼机构内发生传染病疫情时，应按照GB19193规定进行消毒处理。附 录 C(规范性附录）采样及检验方法C.1 采样及检验原则在清洁或消毒处理后 2h 内进行采样。微生物指标的检验应在采样后 4h 内尽快进行，如不能在 4h 内检验，样品应保存于 04条件下，在 24h 内进行检验。C.2 室内空气微生物采样及检验方法C.2.1 沉降法C.2.1.1 样品采集采样在动态(室内有人活动)条件下进行，采样时应记录室内人员数量、温湿度。室内面积30m2，在一条对角线上设里、中、外（在四等分的3个等分点上）
8、 3 点，里、外点位置距墙1m；室内面积30m2，设4角及中央5点，周围四点距墙 1m。采样时将普通营养琼脂平板（直径为 9cm）置于采样点与地面垂直高度 60cm100cm，打开平板盖使平板在空气中暴露 5min，盖上平板盖。同时设空白对照。C.2.1.2 培养将采样平板置于 361培养 48h 观察结果，计数平板上细菌菌落数。C.2.1.3结果计算每皿平均细菌菌落数（CFU/皿5min）=放置平板细菌菌落数总数（CFU）采样放置平板数C.2.2 撞击法C.2.2.1 样品采集 采样选用六级撞击式空气采样器在动态(室内有人活动)条件下进行，采样时应记录室内人员数量、温湿度。房间面积小于50m
9、2的，中央设置1个采样点；50200m2的，室内对称点上设置2个采样点；200m2以上的，设置35个采样点,布点方法同C.2.1.1，均匀分布；采样点应避开通风口、通风道。将采样器置于采样点 60cm100cm 高度，距墙1m处，采用无菌操作装入普通营养琼脂平板（直径为 9cm），按使用说明操作采样器，采样流量为28.3L/min，采样时间为5min。同时设空白对照。C.2.2.2 培养无菌操作取出采样平板，置于 361培养 48h 观察结果，计数平板上细菌菌落数。C.2.2.3结果计算空气中细菌菌落总数（CFU/m3）=平板细菌菌落数总数（CFU）1000空气流量（L/min）采样时间（mi
10、n）C.3 物体表面、手微生物采样及检验方法C.3.1 样品采集C.3.1.1 普通物体表面将5cm5cm 的无菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌胰蛋白胨生理盐水（TPS）的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂擦 5 次，并随之转动棉拭子，连续采样1 4 个规格板面积（被采样本表面积100cm2采全部表面，100cm2采集 100cm2），然后剪去手接触部分，将棉拭子放入含 10mL TPS（若消毒因子为化学消毒剂，采样液为相应中和剂）采样管内送检。门把手等小型或不规则物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样，估算采样面积计算结果。C.3.1.2 棉织品毛巾、浴巾的采样部位为对折后两面的中央，床
11、单、被套的采样部位为上下两部即颈部、脚部接触部位。将5cm5cm 的无菌规格板放在采样部位，用浸有TPS的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂擦 5 次，并随之转动棉拭子，然后剪去手接触部分，将棉拭子放入含 10mL TPS（若消毒因子为化学消毒剂，采样液为相应中和剂）采样管内送检。每25cm2采样面积为1份样品，每件物品共采集2份样品。C.3.1.3 洁具 面盆的采样部位在盆内二分之一高度的相对两侧壁，坐便器的采样部位在坐便圈前部弯曲处。将5cm5cm 的无菌规格板放在采样部位，用浸有无菌TPS的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂擦 5 次，并随之转动棉拭子，然后剪去手接触部分，将棉拭子放入含
12、 10mL TPS（若消毒因子为化学消毒剂，采样液为相应中和剂）采样管内送检。每25cm2采样面积为1份样品，每件物品共采集2份样品。C.3.1.4 手被检人在清洁或消毒处理后采样。双手五指并拢，用浸有无菌TPS的棉拭子1支在双手指曲面，从指根到指端来回涂擦 2 次，然后剪去手接触部分，将棉拭子放入含 10mL 无菌TPS（若消毒因子为化学消毒剂，采样液中加足量相应中和剂）的采样管内送检。C.3.2 检验方法C.3.2.1 细菌菌落总数C.3.2.1.1 检验方法将每支采样管振荡 80 次，取 1.0mL 样液接种无菌平皿内，如预判可能污染严重，可做适当稀释后接种，每个样本平行接种两个平皿，倾
13、注营养琼脂，摇匀并冷却后置 361培养 48h，计数平板上细菌菌落总数。C.3.2.1.2 结果计算C.3.2.1.21 物体表面细菌菌落总数物体表面细菌菌落总数（CFU/cm2）=平板菌落均数（CFU）10稀释倍数采样面积（cm2）C.3.2.1.22 手表面细菌菌落总数手表面细菌菌落总数（CFU/cm2）=平板菌落均数（CFU）10稀释倍数2采样面积*（cm2）*注：采样面积：成人每只手采样面积按 30 cm2 计，儿童每只手采样面积按 20 cm2 计。C.3.2.2 大肠菌群按 GB 4789.3 第一法 执行。C.3.2.3 金黄色葡萄球菌按 GB 4789.10 第一法 金黄色葡萄
14、球菌定性检验 执行。C.3.2.4铜绿假单胞菌按 GB 15979 附录A 执行。C.4 餐（饮）具微生物采样与检验方法C.4.1 样品采集C.4.1.1 大肠菌群发酵法按 GB 14934 附录 A.2.1 执行，纸片法按 GB14934 附录 A.2.2 执行。C.4.1.2 沙门氏菌按 GB 14934 附录 A.2.1 执行。C.4.2 检验方法C.4.2.1 大肠菌群按 GB 14934 附录 B 执行。C.4.2.2 沙门氏菌按 GB 14934 附录 C 执行。C.5 饮水微生物采样及检测方法C.5.1 饮水采集 按 GB/T 5750.1 执行。C.5.2 检验方法C 5.2.1 菌落总数按 GB/T 5750.12 执行。C 5.2.1 总大肠菌群按 GB/T 5750.12 执行。C 5.2.2 大肠埃希氏菌按 GB/T 5750.12 执行。C 5.2.3 铜绿假单胞菌按 GB 8538 执行。C.6 使用中消毒液染菌量采样及检测方法C.6.1 样品采集方法用无菌吸管吸取被检消毒液 1.0ml，加入到 9.0ml含相应中和剂的无菌TPS采样管中混匀，中和10min以上送检。常用消毒剂的中和剂建议：含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂使用含5g/L硫代硫酸钠、5g/L吐温80的TPS，醇类消毒剂、酚类消毒剂、复方消毒剂使用DE中和肉汤，洗必泰、季铵盐类消毒
