《水生实验动物质量监测课件》由会员分享,可在线阅读,更多相关《水生实验动物质量监测课件(72页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、实验动物质量标准和监测,张 钰 广东省实验动物监测所,实验动物是指经人工培育、遗传背景清楚、对其质量实行控制、用于科学试验及产品生产的动物。 区别于实验用动物。,与实验动物相关标准,实 验 动 物 遗 传 (3),实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制 GB14923,实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法 GB/T14927.1,实验动物近交系小鼠、大鼠皮肤移植法 GB/T14927.2,近交系、封闭群、杂交群 近交系:至少连续20代的全同胞兄妹交配培育而成,品系内所有个体都可以追溯到起源20代或以后代数的一对祖先。近交系数应大于99%。 封闭群:以非近亲交配方式进行繁殖生产的一个实验动物种
2、群,在不从外界引入新个体的条件下,至少连续繁殖4代以上。 杂交群:由不同品系或种群之间杂交产生的后代。,遗传监测重要性 保障品系的遗传特性 防止发生遗传突变和遗传污染,实验动物寄生虫学等级及检测 GB14922.1,实验动物寄生虫学检测方法GB/T18448.1-18448.10,实验动物微生物学等级及检测 GB14922.2,实验动物微生物学检测方法(1)GB/T14926.42-14926.43,实验动物微生物学检测方法(2)GB/T14926.1-14926.6 ;GB/T14926.8-14926.17 ;GB/T14926.41;GB/T14926.44-14926.49,实验动物微
3、生物学检测方法(3)GB/T14926.50-14926.55,实 验 动 物 质 量 (8),实验动物检测方法(4)GB/T14926.18-14926.32 GB/T14926.56-14926.64,SPF鸡微生物学监测总则 GB/T17998,普通级动物 (Conventional Animal, CV) (基础级动物),清洁级动物 (Clean Animal, CL),无特定病原体级动物(Specific Pathogen Free Animal, SPF),无菌级动物 (Germ Free Animal, GF),GB14922.1 GB14922.2,实验动物,SPF级动物监测项
4、目,我国实验动物质量要求的最低标准,其它行业、地方标准不能低于国家标准要求。,保证实验研究的顺利进行和工作人员的身体健康。 确保实验数据的准确性和可重复性。,质量监测意义,实验动物的微生物学、寄生虫学质量监测,实 验 动 物 环 境 设 施 (2),实验动物环境与设施 GB14925,实验动物设施建筑技术规范 GB50447,日常性监督指标 温度、日温差、相对湿度、压差; 监督性检测指标 沉降菌、氨气浓度、噪声、照度; 必要时检测指标 空气洁净度、换气次数、气流速度、昼夜明暗交替时间。,实 验 动 物 营 养 和 饲 料 (12),实验动物配合饲料通用质量标准 GB14924.1 实验动物配合
5、饲料卫生标准 GB14924.2 实验动物小鼠、大鼠配合饲料 GB14924.3 实验动物兔配合饲料 GB14924.4 实验动物豚鼠配合饲料 GB14924.5 实验动物地鼠配合饲料 GB14924.6 实验动物犬配合饲料 GB14924.7 实验动物猴配合饲料 GB14924.8,实验动物配合饲料常规营养成分的测定GB/T14924.9 实验动物配合饲料氨基酸的测定GB/T14924.10 实验动物配合饲料矿物质和微量元素的测定GB/T 14924.12 实验动物配合饲料维生素的测定 GB/T 14924.11,笼具 (地方标准),塑料笼箱;隔离器; 代谢笼;笼架; 层流架;饮水瓶;IVC
6、,动物,编号,外观检查,麻醉,皮肤取样,取血,无菌解剖,检测,检测报告,真菌检查,分离血清,检查病毒抗体或其他病原抗体,气管分泌物、肠内容物、脏器分离细菌,采用抽样检测。 检测程序包括监测项目的选定、采样、检测。,采样,要求,方法,成年动物,哨兵动物法(CD1小鼠),繁殖单元,随机抽样法(例如四角和中央),检测频率,普通级动物:每三个月至少检测 动物一次。,清洁级动物:每三个月至少检测动物一次。,无特定病原体动物:每三个月至少检测动物一次。,无菌动物:每年检测动物一次。每2-4周检查一次动物的生活环境标本和粪便标本。,监测方法,GB/T 14926.1-14926.64 GB/T 18448.
7、1- 18448.10,水生实验动物的质量控制,水生生物终生生活在水中,绝大部分体外受精、体外发育,在许多领域得到广泛应用,是毒性试验、环境监测、发育生物学、生理学、生态学、遗传学等研究常用的实验材料。 目前还没有质量监测标准,来保障实验用水生生物的质量。,国际斑马鱼研究中心提供974种斑马鱼,主要包括野生型和转基因和基因突变动物。,检测类别,水体质量问题 一般检查和剖检 细菌疾病 寄生虫疾病(原生虫疾病、多细胞寄生虫) 非感染性和先天性疾病 肿瘤疾病,国内外斑马鱼环境控制指标一览表,水体质量问题(Water Quality Problems),铜毒性 氯毒性 氨毒性 亚硝酸盐毒性 气泡病(G
8、as Bubble Disease),铜毒性 表现:咳嗽反射、换气次数和氧消耗增加、部分鱼嗜睡或不协调;发育迟缓、畸胎。 显微观察:鳃和侧线损伤,肝细胞可能出现空泡。 氯毒性 鱼对氯很敏感,引起急慢性死亡。 表现:鱼鳃严重急性坏死,呼吸困难,头周围出现斑点。 显微观察:鱼鳃严重坏死。,氨毒性 表现:行为异常(兴奋过度、厌食、生长迟缓,对病原敏感),换气减少。 显微观察:鱼鳃上皮增生。 亚硝酸盐毒性 表现:组织缺氧。,气泡病 气体饱和度超过当时温度、盐度和压力条件下的最大值。 表现:皮肤、鱼鳍或鳃出现肉眼可见泡沫,眼球后组织也可见明显泡沫,眼球突出。 显微观察:组织切片可见泡沫。,一般检查和剖检
9、(General Diagnostics and Necropsy Protocols ),行为 体表检查 鱼腮 剖检 触片(imprints) 组织学,行为,摩擦,寄生虫,反常的 呼吸模式,腮损伤,旋转或 盘旋游泳,神经损伤,另一些疾病迹象 (绝食、精神萎靡、待在不正常部位),体表检查 :立体解剖显微镜 异常:鱼鳍磨损、眼球混浊、溃疡、褪色、体表寄生虫和肿瘤等 制作湿片(Prepare wet mounts ) :观察寄生虫和其它病原体,鱼腮 颜色 解剖镜下检查 :寄生虫、囊肿、粘液过多和出血等 制作湿片:寄生虫、真菌和细菌,剖检: 体腔:腹水、出血或其它异常 肾脏:肿大、褪色 心脏:是否正
10、常 内脏器官:白色的囊肿可能感染分支杆菌 组织压片:寄生虫、真菌或肉芽肿 触片:常用Giemsa或Diff-Quik染色 对肾脏或其它感染脏器检查原虫和细菌,组织诊断 鱼的整体(通常纵切)或有代表性的脏器进行固定,固定液Dietrichs或Davidson,进行切片,染色镜检。,细菌疾病(Bacterial Diseases),分支杆菌病(Mycobacteriosis ) 滑动细菌(Gliding Bacteria) 细菌性喉囊炎(Bacterial aerocystitis)鱼鳔细菌感染,分支杆菌病 病原:海分支杆菌、脓肿分支杆菌、龟分支杆菌、偶发分支杆菌、草分支杆菌和嗜血分支杆菌等。 临
11、床症状和病变:溃疡、出血、头部周围充血、鱼鳞凸起、鱼鳍磨损、皮肤或鳃苍白等。内脏器官白色结节。 显微观察:肉芽肿 诊断:抗酸染色、PCR确诊。,滑动细菌(细菌性鳃病、环境性鳃病) 病原:黄杆菌属、屈桡杆菌等菌属;淡水鱼主要感染柱状黄杆菌和嗜鳃黄杆菌。 临床症状和病变:呼吸困难,鱼鳍和鱼尾表现特征性鱼鳍腐蚀,白色。 显微观察:上皮增生,次级鳃瓣融合,有的坏色,病变部位可见大量细菌。 诊断:观察到细菌。,细菌性喉囊炎 病原:不能确定具体的细菌类型,免疫抑制鱼内脏细菌移植到鱼漂引起疾病。 临床症状和病变:嗜睡,聚集鱼池底部。鱼鳍基部出现红斑。 显微观察:鱼漂出现大范围损伤和严重慢性炎症。组织切片可见
12、明显坏死,革兰氏染色可见大量细菌群落。 诊断:组织切片观察到特征性损伤,多种染色证实细菌的存在。,寄生虫病,天鹅绒疾病(Velvet Disease) 微孢子虫病(Microsporidiosis) Ich(白点病),原生动物疾病(Protozoan Diseases),原生动物疾病,天鹅绒疾病 病原:淡水天鹅绒(Piscinoodinium pillulare )鞭毛虫纲,腰鞭毛虫目 生活史:腰孢子虫阶段 滋养体 分裂前体 腰孢子虫 临床症状:精神萎靡,浮于水体表面,呼吸困难 显微观察:皮肤或鱼鳃湿片见滋养体 组织切片 :鳃感染上皮增生,皮肤感染上皮增生和坏死 诊断:切片中见滋养体(卵形的、
13、不透明、无运动能力 ),微孢子虫病 病原:微孢子虫(Microsporidium)(微孢子门、微孢子目 ),特定种属名:Paeudoloma neurophilia; 生活史:专性细胞内寄生,复杂生命周期,产生具有传染性和抵抗性的孢子,通过摄入具有传染性的孢子感染。 临床症状:衰弱和脊柱弯曲症状 显微观察:中枢神经系统(脊索和后脑)可见孢子 诊断:观察到孢子(湿片或切片),A:衰弱;B:脊柱弯曲,Ich(白点病) 病原:多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis) (纤毛虫纲、膜口目、凹口科) 临床症状和病变:粘液过多、呼吸困难和精神萎靡,皮肤凸起的白色节结 白点 显
14、微观察:皮肤和鳃的湿片可见纤毛虫 湿片,组织切片可见上皮增生、滋养体。 诊断:湿片见纤毛虫,确诊见到滋养体,寄生部位发现虫体。,体表白点(红大马哈鱼Sockeye salmon ),腮的湿片(箭头为纤毛虫),多细胞寄生虫(Metazoan Parasites),毛细线虫病(Capillariasis) 肾粘孢子虫病(Renal Myxosporidiosis),毛细线虫病 病原:毛细线虫(蠕虫),Pseudocapillaria tomentosa是第一个鉴别的感染斑马鱼的毛细线虫,具有广泛的宿主。 临床症状和病变:发黑、衰弱、嗜睡、剖检肝肿大和贫血。 显微观察:雌虫肠道湿片充满特殊虫卵湿片,
15、组织切片见蠕虫位于肠壁,感染组织严重蜂窝织炎 切片。 诊断:椭圆形、具双极囊的卵存在;确诊还需观察到虫体。,肠道湿片,肠道切片,肾粘孢子虫病 病原:粘原虫(粘原虫门,粘孢子虫纲),两极虫属(Myxidium)或楚克拉虫属(Zschokkella) 生活史:滋养体阶段和多细胞的孢子阶段。鱼吞食孢子或粘附鳃和皮肤感染。 临床症状和病变:一般无明显临床症状,可在多个器官中形成包囊。 显微观察:病变组织切片见虫体;粘孢子具有特殊极囊 (亚甲基兰和吉姆萨等特殊方法染色)。 诊断:组织切片观察到虫体。,位于肾小管中滋养体,粘孢子具两个极囊 Giemsa 染色 返回,非感染性和先天性疾病(Non-infec
16、tious or Idiopathic Diseases),肾钙质沉着症(Nephrocalcinosis) 心脏病:心包积液和扩张性心肌病 卵相关炎症(Egg-Associated Inflammation) 肝红细胞症(Hepatic Megalocytosis),肾钙质沉着症 钙在肾小管和集合管中沉积而成。水中较高CO2浓度(12mg/L);食物中钙镁较高等。 临床症状和病变:一般无明显临床症状。 显微观察:组织切片见肾小管和集合管中有嗜碱性、水晶状的沉积物。 诊断:肾组织切片中钙的沉积。,钙沉积,心脏病 临床症状和病变:心脏区域非常肿胀,切开出现严重出血或大块的血栓 显微观察:心包腔中充满血液或蛋白样渗出物;组织切片见心室扩张,充满液体。 诊断:剖检心脏出血,组织学确定。,心脏区域凸出,卵相关炎症 临床症状和病变:腹部扩张,卵巢成实心、瘤状物,甚至从内到外体表出现白色的溃疡 显微观察:严重慢性炎症