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1、实验六、细菌的荚膜染色法,实验的目的要求,学习并掌握荚膜染色法,荚膜染色的基本原理,荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。 由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色(负染色法),使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。 也可采用Anthony氏染色法，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分。,实验材料,菌种,褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌,试剂,绘图墨水 1%甲基紫水溶液 6%葡萄糖水溶液 20%硫酸铜水溶液,甲醇
2、 香柏油 二甲苯,仪器和用具,载玻片 盖玻片 滤纸,显微镜 镜头纸,方法,湿墨水法 干墨水法(P78) Anthony氏法(P79),湿墨水法,制备细菌墨水混合液 加盖玻片 镜检,制备细菌墨水混合液,1、滴绘图墨水,2、制备混合液,绘图墨水,滴1滴绘图墨水在载玻 片中央,挑取少量菌苔,与墨水混 合均匀涂布,加盖玻片,在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液,1、加盖玻片,将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片,2、吸去多余液体,勿留气泡,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果： 背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。,干墨水法,制备细菌墨水混
3、合液 涂片 固定 染色 镜检,制备细菌墨水混合液,1、滴生理盐水,2、涂片,6%葡萄糖,在载玻片一 端 滴一滴6% 葡萄糖水,挑取少量菌苔,再加一环墨水,混合均匀,涂片,1、先将推片一 端放在混合液上,2、将推片向另 一端平行滑动,3、使混合液 均匀铺成薄层,4、干燥,室温自然晾干,固定、干燥,甲醇固定，自然干燥,甲醇,滴甲醇浸没涂片1分钟,倾去甲醇，室温自然干燥,注意：固定及干燥均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形。 同时，菌体失水收缩，会与周围染料脱离产生透明区，导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜。,染色,1、滴甲基紫染液,2、水洗,不要直接冲菌膜,甲基紫染液,甲基紫染液染色1-2分钟,3、自然干燥,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果： 背景灰色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。,Anthony氏法,制片 固定 染色 镜检,制片、固定,生理盐水,1、滴生理盐水,挑取少量菌苔,与生理盐水混匀 均匀涂布,2、涂片,滴半滴生理 盐水在载玻 片中央,3、干燥固定,室温自然晾干,染色,1%结晶紫染液,1、滴孔结晶紫染液,滴结晶紫染 色2分钟,3、脱色,20%CuSO4水溶液,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果： 背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色。,
