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1、定性实验的方法学验证Method validation of the qualitative test 李慧源 临床免疫学实验室 Kingmed clinical immunology Lab,Method validation of the qualitative test,验证目的: 1.评价和验证各定性检测项目的准确度、精密度、灵敏度、特异性、等各项参数，满足临床检测和认可组织的要求. 2.验证厂家提供的试剂参数能在本实验室得到重现.,Method validation of the qualitative test,验证的内容: 准确度(Accuracy) 精密度(Precision)
2、 诊断敏感性（sensitivity of diagnosis） 特异性（specificity）: 同一项目不同检测方法或仪器的比对 CUTOFF值验证,Method validation of the qualitative test,实施验证的时机: 引进新检测项目及方法。 已确立的检测方法的更新。 原有的检测方法应用扩大到新的检测范畴。 质控指标表明已确立的检测方法性能正随时间而改变。,Method validation of the qualitative test,几个重要概念及计算公式的回顾: 1.诊断敏感性:将实际患病者正确诊断为阳性的百分率。 计算公式为：真阳性/（真阳性+假
3、阴性）X 100% . 2.特异性 : 指将实际无病者检测为阴性的百分率。 计算公式为：真阴性/( 真阴性+假阳性） X 100% .,Method validation of the qualitative test,3.Kappa检验: 用与两组定性结果一致性比较.用公式计算得到一个 kappa值. kappa值位于-1,1, Kappa075时两组结果一致性较好；0.75Kappa0.4两者一致性一般；Kappa0.4表示两者一致性很差. 观察一致率P0=（A+D）/ N 机遇一致率Pc=(R1C1/N + R2C2/N) / N 实际观察一致率= P0 Pc 非机遇一致率= 1- Pc
4、 Kappa= （ P0 Pc）/（1- Pc）,Method validation of the qualitative test,一.准确度验证: 1 .检测已知值的参考物质 室间质评材料 (卫生部或者CAP) 厂商提供的已赋值的参考材料 分析用参考方法或决定方法定值的材料。(如dsDNA检测) 2. 方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析两种方法检测结果一致性.(比如HBV酶免法和发光法比对),Method validation of the qualitative test,二.精密度验证: 1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重
5、复检测10次.然后计算均值,SD和CV. 2.批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行检测双孔.然后计算均值,SD和CV. Note:1.用S/CO比值进行统计计算. 2.最好选择临界值,或弱阳性样本. 判断标准:批内CV小于15%,批间CV小于25%.,Method validation of the qualitative test,三.诊断敏感性: 1.验证方法:取10-20份已知真阳性的样本（样本来源困难时可以酌情减少）。用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。 2.样本来源: 临床上明确诊断的阳性病人血清； 厂家提供的明确为阳性的样本； PT中的阳性样本； 决定
6、性参考方法检测阳性的样本； 以上阳性样本来源紧张时，可以进行稀释（如2：3，3：4这样稀释）,Method validation of the qualitative test,四.特异性: 1.验证方法：选取20份正常健康人血清（一般取自健康体检者），计算其检测阴性结果所占百分率。 2.样本来源:体检样本,体检者本人填写确认符合要求后即可. NOTE:部分项目在健康体检人群中阳性率也很高,此类项目特异性验证很难执行,建议引用厂家说明书. 比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗体IgG.因为很难确认体检者既往是否有过感染史,而IgG抗体在体内存留时间长.因此很难收集到真正
7、意义上的阴性样本.,Method validation of the qualitative test,补充1:同一项目不同检测方法或仪器的比对 适用范围:一个项目有两种以上的方法或者两台以上的仪器(包括同一型号的仪器)同时检测,需要进行一致性比对. 定量检测中,报告单位不同的不需要比对,首次比对选取40份(20)样本,最好阴阳性各半 随机每8份分成一组 两种方法(或两台仪器)每天平行检测一组样本 将所有检测结果汇总 Kappa检验,评价一致性,Method validation of the qualitative test,补充说明:关于CUTOFF值验证 定量实验但是报告定性结果的才需要
8、做CUTOFF值验证.(比如PCR室的乙肝DNA定性).,Method validation of the qualitative test,验证方法1: 找临界浓度的标准品(可要求厂家提供),连续检测20次,95%的结果落在临界范围即可. 验证方法2: 连续统计一段时间的检测结果,处于临界 范围的结果比例小于5%即可.,Method validation of the qualitative test,甲肝IgM定性项目方法学验证.doc 2008年3月优生仪器比对.doc,Method validation of the qualitative test,参考资料: 1.定性实验方法学验证管理程序KM-MP0301.20 2. User Protocaln for Evaluation of Qualitative Test Performance Performance;Approved Guideline，NCCLS-EP12-A,The end ! 欢迎大家提问探讨,
