《实验室常用技术参数资料[汇编]》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验室常用技术参数资料[汇编]（27页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 实验室常见技术参数资料 实验室常见技术参数资料 一、 核酸及蛋白质常见数据 1核苷三磷酸的物理常数 化合物分子量max(pH7.0)1 摩尔溶液 ( pH7.0) 中 max 时的最大吸收值 OD280/OD260 ATP 507 259 15400 0.15 CTP 483 271 9000 0.97 GTP 523 253 13700 0.66 UTP 484 262 10000 0.38 dATP 494 259 15200 0.15 dCTP 467 271 9300 0.98 dGTP 507 253 13700 0.6
2、6 dTTP 482 267 9600 0.71 2常见核酸的长度与分子量 核酸 核苷酸数分子量 DNA 48502( 双链环状 ) 3.0 107 pBR322 4363( 双链) 2.8106 28SrRNA 4800 1.6106 23SrRNA 3700 1.2106 18SrRNA 1900 6.1105 19SrRNA 1700 5.5105 5SrRNA 120 3.6 104 tRNA( 大肠杆菌 ) 75 2.5104 3常见核酸蛋白换算数据 ( 1) 重量换算 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 1g=10-6g 1pg=10-12g 1ng=1
3、0-9g 1fg=10-15g ( 2) 分光光度换算 : 1A260双链 DNA=50 g/ml 1A260单链 DNA=30 g/ml 1A260单链 RNA=40 g/ml ( 3) DNA 摩尔换算 : 1g 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol 末端 1g pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66g 1pmol pBR322=2.8g 1kb 双链 DNA( 钠盐) =6.6 105 道尔顿 1kb 单链 DNA( 钠盐) =3.3 105 道尔顿 1kb 单链 RNA( 钠盐) =3.4 105 道尔顿 ( 4) 蛋白摩尔
4、换算 : 100pmol分子量 100, 000 蛋白质=10g 100pmol分子量 50, 000 蛋白质=5g 100pmol分子量 10, 000 蛋白质=1g 氨基酸的平均分子量 =126.7 道尔顿 ( 5) 蛋白质 /DNA换算: 1kb DNA=333 个氨基酸编码容量 =3.7104MW 蛋白质 10, 000MW蛋白质 =270bp DNA 30, 000MW蛋白质 =810bp DNA 50, 000MW蛋白质 =1.35kb 100, 000MW蛋白质 =2.7kb DNA 4常见蛋白质分子量标准参照物 ( 1) 高分子量标准参照 ( 2) 中分子量标准参照 ( 3)
5、低分子量标准参照 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 肌球蛋白分子量 磷酸化酶 B 97, 400 碳酸酐酶 31, 00 肌球蛋白 212, 000 牛血清白蛋白 66, 200 大豆脻蛋白酶 21, 500 -半乳糖甘酶 B 116, 000 谷氨酶脱氢酶 55, 000 抑制剂 磷酸化酶 B 97, 400 卵白蛋白 42, 700 马心肌球蛋白 16, 900 牛血清白蛋白 66, 200 醛缩酶 40, 000 溶菌酶 14, 400 过氧化氢酶 57, 000 碳酸酐酶 31, 000 肌球蛋白 ( F1) 8, 100 醛缩酶 40, 000 大豆脻蛋
6、白酶 21, 500 肌球蛋白 ( F2) 6, 200 抑制剂肌球蛋白 ( F3) 2, 500 溶菌酶 14, 400 5常见 DNA分子量标准参照物 DNA/Hind DNA/EcoR /Hind +EcoR pBR322/Hae 23130 21226 21227 587 123 9416 7421 5148 405 104 6557 5804 4973 504 89 4361 5643 4268 458 80 2322 4843 3530 434 64 2027 3530 2027 267 57 564 1904 234 51 125 1584 213 21 1375 192 18
7、974 184 11 831 124 7 564 125 续上表 pBR322/Hinf 174/Hinf 174/Hae 174/Tap 1631 726 140 1353 2914 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 517 713 118 1078 1175 506 553 100 872 404 396 500 82 603 327 344 417 66 310 231 298 413 48 281 141 221 311 42 271 87 220 249 40 234 54 154 200 24 194 33 75 151 118 20 72 二、 常见
8、缓冲液 1分子克隆常见缓冲液 2磷酸缓冲液 ( 1) 25下 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液的配制 pH 1mol/L K2HPO4(ml) 1mol/L KH2PO4(ml) 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 27.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4 7.8 90.8 9.2 8.0 94.0 6.2 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 ( 2) 25下 0.1mo
9、l/L 磷酸钠缓冲液的配制 pH 1mol/L Na2HPO4(ml) 1mol/L NaH2PO4(ml) 5.8 7.9 92.1 6.0 12.0 88.0 6.2 17.8 82.2 6.4 25.5 74.5 6.6 35.2 64.8 6.8 46.3 53.7 7.0 57.7 42.3 7.2 68.4 31.6 7.4 77.4 22.6 7.6 84.5 15.5 7.8 89.6 10.4 8.0 93.2 6.8 : 用 蒸 馏 水 将 混 合 的 两 种1mol/L贮 存 液 稀 释 至 1000ml, 根 据 Henderson-Hasselbalch方程计算其 p
10、H值: pH=pK +1g( 质子受体 / 质子供体 ) 在此, pK =6.86(25 ) 。 3电泳缓冲液 测序凝胶加样缓冲液 98% 去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青 FF 0.025%溴酚蓝 甲酰胺 : 许多批号的试剂级甲酰胺, 其纯度符合使用要求, 无须再进行处 理。不过, 一旦略呈黄色 , 则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床 树脂共同搅拌 1 小时进行去离子处理 , 并用 Whatman 1 号滤纸过滤 2 次, 去离子 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 甲酰胺分装成小份 , 充氮存于 -7
11、0。 常见的电泳缓冲液 缓冲液 使用液 浓贮存液 ( 每升) Tris- 乙酸( TAE) 1 : 0.04mol/L Tris- 乙酸 50: 242g Tris碱 0.001mol/L EDTA 57.1ml冰乙酸 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris- 磷酸( TPE) 1 :0.09mol/L Tris- 磷酸 10:10g Tris碱 0.002mol/L EDTA 15.5ml85% 磷酸( 1.679g/ml) 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) Tris- 硼酸( TBE) a 0.50.045mol/L Tris- 硼酸 5: 54g
12、 Tris碱 0.001mol/L EDTA 27.5硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 碱性缓冲液 b 1:50mmol/L NaOH 1:5ml 10mol/L NaOH 1mmol/L EDTA 2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) Tris- 甘氨酸 c 1 :25mmol/L Tris 5:15.1g Tris 250mmol/L 甘氨酸 94g 苷氨酸 ( 电泳级 ) ( pH8.3) 0.1% SDS 50ml 10% SDS(电泳级 ) 说明: TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物, 为避免这一问题 , 可在室温下用 玻璃瓶保存 5溶液 ,
13、出现沉淀后则予以废弃。 以片都以 1TBE作为使用液 ( 即 1: 5 稀释浓贮液 ) 进行琼脂糖凝胶电泳。 但 0.5的使用液已具备足够的缓冲容量。 当前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1: 10 稀释的贮存液作为使用液。 进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小, 故经过缓冲液的电流量一般 较大, 需要使用 1TBE以提供足够的缓冲容量。 碱性电泳缓冲液应现用现配。 Tris- 甘氨酸缓冲液用 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 2SDS凝胶加样缓冲液 : 100mmol/L Tris?HCl(6.8) 200mmol/L二硫苏糖醇 ( DT
14、T) 4%SDS( 电泳级) 0.2%溴酚蓝 20% 甘油 不含 DTT的 2SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温, 应在临用前取1mol/L 贮存液现加于上述缓冲液中。 4凝胶加样缓冲液 缓冲液类型6缓冲液贮存温度 0.25%溴酚蓝 4 0.25%二甲苯青 FF 40%( W/V) 蔗糖水溶液 0.25 溴酚蓝 室温 0.25%二甲苯青 FF 15% 聚蔗糖 (Ficoll400) 0.25%溴酚蓝 4 0.25%二甲苯青 FF 30% 甘油水溶液 0.25%溴酚蓝 4 40%(W/V) 蔗糖水溶液 碱性加样缓冲液 : 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA 18%聚蔗糖 (Fi
15、coll400) 4 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三: 增大样品密度 ; 以确保 DNA均匀进 入样品孔内 ; 使样品呈现颜色 , 从而使加样操作更为便利, 含有在电块中能以 可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF 的 2.2 倍, 而与琼脂糖浓度无关。以0.5TBF作电泳液时 , 溴酚蓝在琼脂糖中 的泳动速率约与长 300bp的双链线状 DNA 相同, 而二甲苯青 FF的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%1.4%的范围
16、内 , 这些对应关系受 凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。 可是, 对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿 作为示踪染料 , 因为在碱性 pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。 5各种 pH值的 Tris 缓冲液的配制 各种 pH值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH值( 25 ) 0.1mol/L HCl的体积 71 45 7 72 44 7 73 43 4 74 42 0 75 40 3 76 38 5 77 36 6 78 34 5 79 32 0 80 29 2 8.1 26.2 8.2 22.9 8.3 19.9 8.4 17.2 8.5 14.7 资料内容仅供您学习参考，如有不当或者侵权，请联系改正或者删除。 8.6 12.4 8.7 10.3 8.8
