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1、第九章 临床病原体检测,临床病原体检查目的 1.明确感染是否发生以及病原体的类型。 2.提供体外抗微生物药物敏感实验的结果。 3.密切监视烈性传染病与新的传染病的发生，及时向行政主管部门报告。 4.配合相关机构进行流行病学调查。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,临床病原体检查的基本程序 1.医生、护士、病人、检验师：正确采集运送标本。 2.检验科：直接镜检、免疫学和分子生物检测、病原体分离培养鉴定、药敏实验报告结果。 3.医生：明确诊断、合理用药。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,一、标本采集和运送 标本采集的基本原则 1.无菌、及时、按照要求、标注清晰 2.根
2、据病史与临床表现确定标本采集的类型与部位，尽量采集病变明显部位标本。 3. 在发病的早期或急性期采集标本，最好在抗生素使用前（如使用过抗生素应在申请单上注明）。 4.采集标本防止污染，并置于无菌容器，加盖密封、立即送检。 5.标本必须贴上标签，与检验申请单同时送检。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,（一）血液 1.适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的病人。 2.一般在抗生素使用前，于发热初期或高峰期采血，已用过抗菌药物治疗者，在下次用药前采集。 3. 血液与培养基的比例为1：10，一般成人血量10-20ml，婴儿1-5ml，最好在床边接种。,第一节 标本的采集运送、 实验室评
3、价和检查方法,（二）尿液 1.无菌采集中段尿 2.如考虑厌氧菌感染，采取膀胱穿刺法采集标本、无菌厌氧小瓶运送。 3.排尿困难者考虑导尿采集标本。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,（三）粪便 1.自然排便，挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。 2. 排便困难者，采用直肠拭子采集。 3.根据细菌种类不同选用合适的运送培养液。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,（四）呼吸道标本 1.类型：鼻咽拭子、痰和经气管采集的标本。 2.上呼吸道存在正常菌群，在采集标本与结果分析时应予考虑。 3.痰标本：采集时间：晨痰，且在取痰前用清水反复漱口。方法：自然咳痰气管镜下采集法气管穿
4、刺法,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,（五）脑脊液与其它无菌体液 1.脑脊液由临床医生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置于无菌容器中立即保温送检或床边接种。 2.胸水、腹水和心包液等标本宜采集较大量标本送检，标本接种于血培养瓶。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,（六）眼、耳部标本 用拭子采样，也可在局部麻醉后取角膜刮屑。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,（七）泌尿生殖道标本 1.男性：无菌采集尿道口分泌物或前列腺液。 2.女性：用无菌棉纤采集阴道或宫颈分泌物。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,（八）创面、组织和脓肿标本 1.大面积创
5、伤的创面分泌物：首先清除采集部位的污物，以碘酒、酒精消毒皮肤，再用无菌棉纤多点采取脓液或分泌物，置于无菌试管中送检。 2.开放性脓肿及脓性分泌物：用无菌棉纤采取脓液或病灶深部分泌物 3.封闭性脓肿：局部消毒后，用注射器抽取，怀疑厌氧菌感染，应隔绝空气采集 （九）血清,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,三、检查方法 （一）直接显微镜检查 （二）病原体特异性抗原的检测 （三）病原体核酸的检测 （四）病原体的分离培养与鉴定 （五）血清学实验,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,革兰氏阳性球菌,革兰氏阴性杆菌,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,墨汁染色找 新型隐
6、球菌,抗酸染色,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,不染色标本：用于观察病原体的大小、形态与运动等特性。 结果评价：部分病原体可借此初步诊断，如暗视野显微镜下见弹簧状螺旋体，应怀疑梅毒螺旋体的感染。,第一节 标本的采集运送、 实验室评价和检查方法,明确感染病原体。 为临床提供体外抗微生物药物敏感试验结果。,第三节 临床感染常见病原体检查,一、流行病学和临床类型 （一）流行病学 流行病学的特点： （1）疾病谱发生变迁 （2）多重耐药株出现 （3）器官移植、抗肿瘤化疗和放疗的开展,第三节 临床感染常见病原体检查,（二）临床类型 临床常见病原体为：细菌、病毒、支原体、衣原体、立克次体 、
7、真菌、螺旋体以及寄生虫等 细菌感染是发病率较高的感染性疾病，病原体种类以革兰氏阴性条件致病菌、凝固酶阴性葡萄球菌、耐甲氧西林葡萄球菌和耐药的白色念珠菌为主。 病毒感染是人群发病率最高的感染类型,第三节 临床感染常见病原体检查,二、检查项目和临床应用 （一）细菌感染：检测细菌或其抗原-直接涂片镜检、培养、抗原检测检测抗体检测细菌遗传物质-基因探针技术、PCR技术 细菌培养是最重要的确诊方法 （二）病毒感染：病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原检测、特异性抗体 细胞培养是最常用的病毒分离方法,第三节 临床感染常见病原体检查,（三）真菌感染：直接显微镜检查、分离培养、免疫学试验和动物试验、核酸杂交和PCR
8、技术 形态学检查是真菌检测的重要手段,第三节 临床感染常见病原体检查,（四）寄生虫病：直接显微镜检查是寄生虫感染的主要诊断依据,第三节 临床感染常见病原体检查,（五）其它病原体感染 1.支原体：分离培养是支原体感染的确诊依据。 目前临床多检测支原体抗原与核酸，用于早期快速诊断。 2.螺旋体：血清学 3.立克次体：血清学、分离培养、核酸检测 4.衣原体：直接显微镜检查、分离培养、DNA探针技术和PCR技术，目前临床多检测衣原体抗原与核酸，用于早期快速诊断。 5.SARS病毒：免疫学方法检测抗体、基因检测、细胞培养,第三节 临床感染常见病原体检查,（六）实验结果分析和临床应用 正常人群的无菌体液中
9、检测到细菌，应考虑细菌为感染的病原体。 存在正常菌群的标本检测到细菌，应结合细菌的量考虑是否为致病菌。 如临床表现支持感染，但培养阴性，应考虑为标本不合格、培养不恰当、病原体为难培养菌或已使用抗生素等因素，尤其是直接镜检找到病原体，而培养阴性，应考虑有L细菌、厌氧菌或苛氧菌感染。,第三节 临床感染常见病原体检查,PCR是检测病原体微生物最灵敏的方法，但具有一定的假阳性与假阴性。阳性只表明存在某种病原体的核酸，是否正被感染应结合临床具体分析。 血清学试验是目前应用最广泛的感染性疾病检测方法，特异性IgM可作为感染性疾病的早期诊断指标，且可区分原发与复发感染。特异性 IgG，尤其双份血清的滴度呈4
10、倍或4倍以上升高，考虑病原体感染。,第四节 病毒性肝炎标志物检测,一、甲型肝炎病毒标志物检测 （一）甲型肝炎病毒抗原测定 【临床意义】 1.HAVAg阳性：见于甲肝患者 （二）甲型肝炎病毒抗体测定 【临床意义】IgM阳性是特异性早期诊断指标，提示HAV感染期； IgA阳性见于甲肝早期和急性期； IgG阳性出现于恢复期且持久存在，是获得免疫力的标志，提示既往感染。 （三）HAV-RNA测定 【临床意义】HAV-RNA阳性：对早期诊断具有特异性,第四节 病毒性肝炎标志物检测,二、乙型肝炎病毒标志物检测 （一）乙肝六项测定 1.HBsAg 【临床意义】 阳性见于乙型肝炎潜伏期和急性期；发病后3个月不
11、转阴，易发展成慢性乙型肝炎或肝硬化；携带者HBsAg也呈阳性。 2.抗HBs 【临床意义】是保护性抗体，提示机体有一定免疫力。,第四节 病毒性肝炎标志物检测,3. HBeAg 【临床意义】阳性表明乙型肝炎处于活动期，是病毒复制活跃，传染性强的指标；持续阳性易转变为慢性肝炎或肝硬化。 4.抗HBe 【临床意义】出现于急性感染的恢复期，持续时间较长。意味着HBV部分被清除或抑制，复制减少，传染性降低,第四节 病毒性肝炎标志物检测,5. HBcAg:阳性提示有感染性的HBV存在，含量较多表示复制活跃，传染性强，预后较差 6.抗HBc：主要包括IgM、IgG、IgA。 (1).抗HBc总抗体：检出率比
12、HBsAg更敏感，可作为HBsAg阴性的HBV感染的敏感指标 (2). 抗HBc IgM：是最早出现的特异性抗体，是诊断急性乙型肝炎和判断病毒复制活跃的指标，并提示病人的血液有强传染性。 (3）.抗HBc IgG：是HBV既往感染的指标，不是早期诊断指标,第四节 病毒性肝炎标志物检测,（三）Pre-S1和Pre-S2 （四）HBV-DNA 【临床意义】阳性是诊断乙型肝炎的佐证，表明HBV复制及有传染性。,第六节医院感染常见病原体检测,医院感染:又称院内感染，或医院获得性感染，是指在医院发生的感染，其感染范围可包括各种病人、医院工作人员、探视者。 院内感染发生环节：传染源的存在、传播途径和易感人群,第六节医院感染常见病原体检测,一、流行病学和临床类型 （一）流行病学 1.病原学 细菌是最常见的病原菌 2.感染源 病原体来源于住院病人、医务人员、探视者、陪伴人员、医院环境及未彻底消毒灭菌的医疗器械、血液制品等,第六节医院感染常见病原体检测,（二）常见临床类型 1.下呼吸道感染 2.尿路感染 3.手术切口感染 4.胃肠道感染 5.血液感染 6.皮肤和软组织感染,第六节医院感染常见病原体检测,二、检查项目和临床应用 1.标本采集和送检 2.涂片镜检 3.分离培养鉴定,
