《消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求2020版》由会员分享，可在线阅读，更多相关《消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求2020版（19页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、WS/T 6862020 1 消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物检测方法与评价要求 1 范围 本标准规定了消毒剂与抗抑菌剂中抗病毒药物的检测方法和评价要求。 本标准适用于消毒剂与抗抑菌剂中更昔洛韦、 阿昔洛韦、 喷昔洛韦和利巴韦林及其它抗病毒药物的 测定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 中华人民共和国药典 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 抗病毒药物 antiviral
2、drugs 用于预防和治疗病毒感染的药物。 4 更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦的检测方法 4.1 高效液相色谱法 4.1.1 原理 以乙酸甲醇混合溶液超声提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，提取液经离心、过滤， C18色谱柱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。 4.1.2 试剂和材料 除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1.2.1 试剂 4.1.2.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 4.1.2.1.2 冰乙酸（CH3COOH）。 4.1.2.1.3 乙酸铵（CH3COONH4）。 4.1.2.2 试剂配制 WS/T 686
3、2020 2 4.1.2.2.1 样品提取溶液：分别移取甲醇 80 mL 和冰乙酸 10 mL，置于试剂瓶中，加入水 10 mL，混匀。 4.1.2.2.2 乙酸铵乙酸缓冲溶液：称取乙酸铵 0.77 g，置于试剂瓶中，加入水 400 mL 溶解，再加入 冰乙酸 2 mL，加水至 500 mL，混匀。 4.1.2.3 标准品 更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦纯度均大于 97%或经国家认证并授予证书的标准物质，其它相关信 息参见附录 A。 4.1.2.4 标准溶液配制 4.1.2.4.1 标准储备液：准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各 25.0 mg，分别置于 50 mL 容量 瓶中，加入样品提取
4、溶液约 40 mL，超声 10 min，溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓度 均为 500 mg/L 的标准储备液。冷藏保存，有效期为 3 个月。 4.1.2.4.2 混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液 稀释成质量浓度均为 50 mg/L 的混合标准中间液。冷藏保存，有效期为 1 个月。 4.1.2.4.3 混合标准系列溶液：取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列 溶液，如 0.5 mg/L、2.5 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L。临用现配。 4.1.2.5 材料 4.1.2.5.1
5、 有机系滤膜：孔径为 0.45 m。 4.1.2.5.2 玻璃珠：5 mm。 4.1.3 仪器和设备 4.1.3.1 高效液相色谱仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.1.3.2 分析天平：最小分度值为 0.1 mg。 4.1.3.3 离心机：3 000 r/min。 4.1.3.4 涡旋混合器。 4.1.3.5 超声波清洗器。 4.1.4 分析步骤 4.1.4.1 样品前处理 4.1.4.1.1 液体剂型 称取0.5 g（精确至1 mg）试样于10 mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10 mL 刻度，涡旋混匀1 min，超声10 min，经滤膜过滤，备用。 4.1.4.
6、1.2 其它剂型 称取 0.5 g（精确至 1 mg）试样于 10 mL 具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至 10 mL 刻度，加入 1 至 2 颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声 10 min，离心 5 min，取上清液 经滤膜过滤，备用。 4.1.4.2 高效液相色谱参考条件 高效液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱：C18柱（柱长 250 mm，内径 4.6 mm，粒径 5 m），或相当者； WS/T 6862020 3 b) 流动相：A 相为甲醇，B 相为乙酸铵乙酸缓冲溶液； c) 流速：1.0 mL/min； d) 柱温：30； e) 进样体积：5 L； f) 检
7、测波长：254 nm； g） 梯度洗脱程序：见附录B.1。 4.1.4.3 标准曲线的制作 将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入高效液相色谱仪，以色谱峰的峰面积为纵坐标，与 其对应的质量浓度为横坐标，绘制峰面积质量浓度（mg/L）标准曲线。更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛 韦混合标准溶液的高效液相色谱图参见附录 C.1。 4.1.4.4 测定 将处理好的试样溶液注入高效液相色谱仪，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。 4.1.4.5 结果计算和表述 试样中目标化合物的含量按式（1）计算： ) 1.(. m V X 式中： X试样中目标化合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） ；
8、 标准曲线计算的试样溶液中目标化合物的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L） ； V定容体积，单位为毫升（mL） ； m称样量，单位为克（g） 。 结果保留三位有效数字。 4.1.4.6 精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。本方法回收率和精 密度见附录D。 4.1.4.7 检出限和定量限 当取样量为0.5 g，定容体积为10 mL，本方法的检出限和定量限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦 的检出限均为2.0 mg/kg；定量限均为7.0 mg/kg。 4.2 胶束电动毛细管色谱法 4.2.1 原理 以含有十二烷基硫酸钠的样品提取溶液提取试样中的更昔洛韦、
9、阿昔洛韦和喷昔洛韦， 用胶束电动 毛细管色谱分离模式进行分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，外标法定量。 4.2.2 试剂和材料 除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 WS/T 6862020 4 4.2.2.1 试剂 4.2.2.1.1 十二烷基硫酸钠（SDS，C12H25SO4Na）。 4.2.2.1.2 硼砂（Na2B4O7 10H2O）。 4.2.2.1.3 无水磷酸二氢钠（NaH2PO4）。 4.2.2.1.4 氢氧化钠（NaOH）。 4.2.2.2 试剂配制 4.2.2.2.1 分离缓冲溶液：称取 SDS 2.019 g、硼砂 0.19
10、1 g 和无水磷酸二氢钠 0.150 g，置于同一具 塞带刻度塑料离心管中，加水至 50 mL 刻度，超声溶解、混匀，配制成含有 140 mmol/L SDS、10 mmol/L 硼砂和 25 mmol/L 磷酸二氢钠的分离缓冲溶液。 4.2.2.2.2 样品提取溶液：将分离缓冲溶液用水稀释 10 倍，配制成样品提取溶液。 4.2.2.2.3 氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠 2 g，加入预先装有 40 mL 水的塑料离心管中，振摇溶解， 再加水至 50 mL 刻度、混匀，配制成 1 mol/L 氢氧化钠溶液。 4.2.2.3 标准品 同4.1.2.3。 4.2.2.4 标准溶液配制 4.2.2.4
11、.1 标准储备液：准确称取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦各 10.0 mg，分别置于 10 mL 容量 瓶中，加入样品提取溶液约 5 mL，振摇（或超声）溶解，用样品提取溶液定容至刻度，配制成质量浓 度均为 1000 mg/L 的标准储备液。临用现配。 4.2.2.4.2 混合标准中间液：分别移取更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦标准储备液，用样品提取溶液 稀释成质量浓度均为 100 mg/L 的混合标准中间液。临用现配。 4.2.2.4.3 混合标准系列溶液：取不同体积的混合标准中间液，用样品提取溶液稀释成混合标准系列 溶液，如 1.0 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg
12、/L、40.0 mg/L。临用现配。 4.2.2.5 材料 同4.1.2.5。 4.2.3 仪器和设备 4.2.3.1 毛细管电泳仪：带二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2.3.2 未涂层熔融石英毛细管：内径 50 m，外径 375 m。 4.2.3.3 同 4.1.3.2。 4.2.3.4 同 4.1.3.4。 4.2.3.5 同 4.1.3.5。 4.2.4 分析步骤 4.2.4.1 样品预处理 4.2.4.1.1 液体剂型 称取0.5 g（精确至1 mg）试样于10 mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10 mL 刻度，涡旋混匀1 min，超声10 min，备用。 WS
13、/T 6862020 5 4.2.4.1.2 其它剂型 称取0.5 g（精确至1 mg）试样于10 mL具塞带刻度离心管（比色管）中，加入样品提取溶液至10 mL 刻度，加入1至2颗玻璃珠，涡旋混匀至溶液呈均匀状态，超声10 min，备用。 4.2.4.2 毛细管电泳参考条件 毛细管电泳参考条件如下： a) 分离柱：未涂层熔融石英毛细管，302 mm（有效长度为 200 mm）； b) 电压：10 kV； c) 进样压力：3.448 kPa； d) 进样时间：4 s（进样体积约 7.9 nL）； e) 检测波长：254 nm； f) 清洗程序：新装毛细管在使用前分别用 NaOH 溶液冲洗 20
14、 min，水冲洗 5 min，分离缓冲溶液 冲洗 5 min。每次进样前依次用 NaOH 溶液冲洗 1.5 min，水冲洗 1.5 min，分离缓冲溶液冲洗 1.5 min。 4.2.4.3 标准曲线的制作 将混合标准系列溶液，按浓度由低到高依次注入毛细管电泳仪，以色谱峰的校正峰面积（峰面积除 以迁移时间）为纵坐标，与其对应的质量浓度为横坐标，绘制校正峰面积质量浓度 （mg/L）标准曲线。 更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦混合标准溶液的毛细管电泳图参见附录 E.1。 4.2.4.4 测定 将处理好的试样溶液注入毛细管电泳仪，根据标准曲线计算试样溶液中目标化合物的质量浓度。 4.2.4.5 结果计算
15、和表述 试样中目标化合物的含量按式（1）计算。 结果保留三位有效数字。 4.2.4.6 精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 10%。 4.2.4.7 检出限和定量限 当取样量为 0.5 g，定容体积为 10 mL，本方法的检出限和定量限：更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛 韦的检出限均为 4.0 mg/kg；定量限均为 14.0 mg/kg。 4.3 超高效液相色谱-串联质谱确证方法 4.3.1 原理 以乙酸甲醇混合溶液超声提取试样中的更昔洛韦、阿昔洛韦和喷昔洛韦，经离心、过滤，用超高效 液相色谱-串联质谱仪进行确证。 4.3.2 试剂和材料 除另有规定外，所有试
16、剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 中规定的一级水。 WS/T 6862020 6 4.3.2.1 试剂 4.3.2.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 4.3.2.1.2 甲酸（HCOOH）：色谱纯。 4.3.2.1.3 冰乙酸（CH3COOH）。 4.3.2.2 试剂配制 4.3.2.2.1 同 4.1.2.2.1。 4.3.2.2.2 0.1 %甲酸甲醇溶液：100 mL 甲醇中加入 0.1 mL 甲酸，混匀。 4.3.2.2.3 0.1 %甲酸水溶液：100 mL 水中加入 0.1 mL 甲酸，混匀。 4.3.2.3 标准品 同 4.1.2.3。 4.3.2.4 标准溶液配制 4.3.2.4.1 同 4.1.2.4.1。 4.3.2.4.2 混合标准中间液：分别移取更
