维生素类药物分析PPT课件

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1、.,1,第十四章 维生素类药物的分析 Chapter 14 Analysis of Vitamins,.,2,学习要求,掌握VitA的鉴别和含量测定； VitC的鉴别、检查和含量测定。 熟悉VitB1的鉴别和含量测定； VitE的鉴别、检查和含量测定。 了解VitD的鉴别、检查和含量测定。,.,3,概 述,一、概念 维生素 1）维持人体正常生理功能所必需的一类微量 的生物活性物质。 2）大多数人体内不能自行合成,必须从食物 中摄取。,.,4,.,5,.,6,VitA 缺乏夜盲症 VitB1缺乏脚气病 VitC 缺乏坏血病 VitD 缺乏 ,如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人

2、体的正常生理机能。,.,7,.,8,.,9,结 构 性 质,Vit A、D、E、B1、C,鉴 别 试 验,杂 质 检 查,含 量 测 定,.,10,VitA1： 视黄醇，生物活性最高 VitA2： 去氢维生素，活性是VA1的30-40% VitA3： 去水维生素，活性是VA1的0.4%,第一节 维生素A的分析 Analysis of vitamin A,故通常所说的维生素A是指维生素A1。,.,11,人工合成的VA醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，还有VA胶丸、VAD胶丸和VAD滴丸,Ch.P,药典收录情况,.,12,存在多种立体异 构化合物 具有UV吸收,1 化学结构,一结构与性质,.,1

3、3,R=H VitA 醇 VA1 retinol R= COCH3 VitA 醋酸酯 vitamin A acetate R= COC15H31 VitA 棕榈酸酯 vitamin A palmitate,.,14,.,15,.,16,（1）环己烯 + 共轭多烯侧链；5个双键 （2）存在多种立体异构体，具有UV吸收 天然 VitA 侧链为全反式； （3）通常所说的维生素A是指维生素A1 （4）天然来源为鱼肝油，主要为醋酸酯和 棕榈酸酯。目前多为人工合成产物,结构特点：,.,17,（二）性 质 Properties,.,18,不溶于水 溶于乙醚，氯仿，异丙醇，环己烷，脂肪和油。,.,19,共轭多

4、烯侧链 性质不稳定. 临床用其醋酸酯或棕榈酸酯的油溶液,密封、凉暗处保存，充氮气或加入抗氧剂,.,20,.,21,.,22, 鉴别 含量测定,.,23,a.溶解性 b.不稳定性 c.紫外吸收特性 d. 与SbCl3作用,小结.维生素A结构性质,.,24,二、鉴别试验,Carr- Price,UV,TLC,.,25,（一）三氯化锑反应 Carr-Price,.,26,注意事项：反应需在无水、无醇条件下进行。,溶剂：无水三氯化锑的无醇氯仿溶液,.,27,VitA：5个共轭双键，无水乙醇液max=326nm,VitA2、A3：6个共轭双键，红移.,（二）紫外分光光度法 UV,.,28,例：VA和其标

5、准品用环己烷溶解 展开剂：环己烷乙醚（8：2） 薄层板： 硅胶G 显色剂： SbCl3 T.S. 现 象： 蓝色斑点 Rf ：VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA 棕榈酸酯 0.75,目的：鉴别醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯,（三）薄层色谱法 TLC,.,29,三、含量测定,紫外-可见分光光度法,比 色 法,高效液相色谱法,.,30,（一）紫外-可见分光光度法 Ch.P 2005,利用共轭多烯结构， 在325328nm处有选择性吸收峰,.,31,（1）原因,为了消除杂质（相关物质）吸收所引起的误差,相关物质结构相似,维生素A最大吸收波长 附近也有吸收，对测定有影响。 Morton和St

6、ubbs等人在1946年提出了三点 校正法。,.,32,相关物质的吸收, d.鲸醇：维生素A醇的二聚体， 无生物活性,.,33,（2）原理：假定、根据,a:杂质吸收在310nm340nm范围近似呈一条直线， 随, A b:物质对光的吸收具有加和性 A样品 = A维生素A + A相关物质,.,34,（3）波长的选择,.,35,等波长差法：测VitA醋酸酯,1=328nm; 2=316nm; 3=340nm,.,36,ii等吸收比法：测VitA醇,1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm,.,37,*波长的选择,VA醋酸酯1 =328nm 2 =316nm 3 =340nm,等波长差法

7、：,等吸收比法：,VA 醇 1=325nm 2=310nm 3=334nm,.,38,（4）测定方法 Ch.p收载有2种方法,第一法（直接测定法）,.,39,波长： 300、316、328、340、360nm 测定： A0、 A1、 A2、 A3、 A4 找到： max = 328nm （326329） 在326329nm， 第一法测定。 不在326329nm，第二法测定。 计算比值：A0/A2 、A1/A2 、A2/A2 、A3/A2 、A4/A2 比较：,算吸光度比值差,.,40,.,41,判断,.,42,.,43,.,44,1IU的VitA = 0.300ug的维生素A醇 = 0.344

8、ug的维生素A醋酸酯,a: 效价的定义：每g供试品中含有VitA的 国际单位数。单位 IU/g,计算,.,45,b:换算因子的定义：单位 数值所相当的效价,.,46,d:求效价,.,47,e:求标示量%,.,48,小结：第一法（直接测定法）-VA醋酸酯, 判断 A328, A 328校正, 求效价,求, 求,.,49,已知：平均胶丸重为0.0815g 维生素A的标示量为10000IU/丸 取样：0.1279g100ml，从中取出2ml 25ml.,练习题：维生素A醋酸酯胶丸的含量测定,求：维生素A醋酸酯的标示百分含量。,.,50,首先计算吸收度比值和吸收度比值差。由结果 知，需计算校正吸收度。

9、,由此可知，应该用测得的A328计算。,.,51,.,52,第二法(皂化法),.,53,波长： 300、310、325、334nm 测定： A0、 A1、 A2、 A3 找到： max = 325nm （323327） 在323327nm，皂化法测定。 不在323327nm，色谱法纯化。 计算比值：A0/A2 - A300/A325,算吸光度比值,.,54,判断,吸光度比值是否 0.73,A325校正 = 6.815A3252.555A3104.260A334,.,55,.,56,最大吸收波长是否在323327之间,是,否,A300/A325是否 0.73,色谱法纯化,是,否,A325校正 =

10、 6.815A325-2.555A310-4.260A334,.,57,.,58,小结：测定方法,第一法VA醋酸酯,第二法VA醇 323327nm A300/A325 0.73,326329nm 0.02之间,超,否,A328,3% 之间：A328 -15%-3%： A328校正 +3%:皂化法,3% 之间：A325 +3%: A325校正,色谱 法,A328校正 =3.52（2A328 A316A340）,A325校正 = 6.815A325-2.555A310-4.260A334,.,59,求, 判断A,.,60,小结:VitA 紫外分光光度法 Ch.P 2005,方法：三点校正法三波长测

11、定法,2、3：在1两侧,等波长差法：,等吸收比法：,1：VitA的max,（1）原因：消除杂质吸收所引起的误差,a: 杂质吸收在310nm-340nm范围近似呈 一条直线，随 , A b: 物质对光的吸收具有加和性,（2）原理,（3）波长的选择,（4）测定方法,.,61,（二）三氯化锑比色法,（三）高效液相色谱法,.,62,思考题,1、三点校正紫外分光光度法测定维生素A含量的依据（原理）是什么？ 2、三点校正紫外分光光度法测定维生素A醋酸酯含量时，换算因子是多少？写出测定其胶丸含量时标示量%的计算式。 3、将维生素A溶于无水乙醇-盐酸溶液中，测定紫外吸收光谱，在326nm波长处有一吸收峰，而将

12、此液置水浴上加热，冷却后，在300-400nm范围内出现3个吸收峰，这是为什么？,.,63,小结：VitA的分析,a.紫外吸收特性 b. 溶解性 c. 不稳定性 d. 与SbCl3作用,结构性质,鉴别试验,含量测定,Carr-Price、UV、TLC,紫外-可见分光光度法,三氯化锑比色法,高效液相色谱法,.,64,维生素A含量用生物效价表示，其效价单位是 A、IU B、g C、ml D、IU/g E、IU/ml,.,65,已知每单位维生素A相当于维生素A醋酸酯0.344g，其 =1530，则换算因数等于 A、1820 B、1830 C、1900 D、1920 E、无法计算,.,66,计算维生素

13、A吸收度的校正公式为 A328(校正后)=3.52(2A328-A316-A340)。如果校正后的吸收度与未校正的吸收度之差对未经校正吸收度的百分比为-3.2%，则应 A、用皂化法测定 B、用校正后的吸收度计算含量 C、用未校正的吸收度计算含量 D、改用另一校正公式计算 E、以上都不对,.,67,维生素A的鉴别试验为 A、三氯化铁反应 B、硫酸锑反应 C、2,6-二氯靛酚反应 D、三氯化锑反应 E、间二硝基苯的碱性乙醇液反应,.,68,维生素A具有易被紫外光裂解、易被空气中氧或氧化剂氧化等性质，是由于分子中含有（ ） A、环已烯基 B、2,6,6-三甲基环已烯基 C、伯醇基 D、乙醇基 E、共

14、轭多烯醇侧链,E,.,69,哪些描述适合VitA结构及性质 A、分子具有长二烯醇侧链，易被氧化 B、具有较长的全反式共轭多烯结构 C. 含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍 生物，易被氧化 D. 与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰 色，很快转变为紫红色 E、样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加后， 呈橙红色,.,70,中国药典（2000年版）规定维生素A的测定采用紫外分光光度（三点校正法），此法又称为 A、等波长差法 B、等吸收比法 C、6/7A法 D、差示分光光度法 E、双波长分光光度法,.,71,用“三点校正法”测定维生素A含量的依据是 A、维生素A可见光区有最大吸收 B、杂质在310340nm波

15、长范围内呈线性吸收 C、物质对光吸收具加和性 D、维生素A与三氯化锑的无水氯仿溶液作 用，产生不稳定蓝色 E、维生素A在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧 化生成具有蓝色荧光的硫色素,.,72,第二节 维生素B1的分析 Analysis of vitamin B1,.,73,一、结构与性质,1、结构(盐酸硫胺),.,74,2、结构特点,.,75,3、性质,.,76,（五）、具有两个碱性基团， 可以和酸成盐。 噻唑环上的季铵 嘧啶环上的氨基,.,77,.,78,二、鉴别试验,VB1专属反应，用于鉴别和含量测定。,.,79,.,80,（三）其他反应,S元素反应,Cl-反应,.,81,小结：VitB1鉴别试

16、验,O,Cl-反应,NaOH Pb(NO3)2,PbS,S元素反应,（一）硫色素反应 Ch.P（2005）,（二）沉淀反应,（三）其他反应,.,82,三、含量测定,非水滴定法（Ch.P 2005测原料药） 紫外分光光度法（Ch.P 2005测制剂） 硫色素荧光法 硅钨酸重量法,.,83,（一）非水碱量法 VitB1原料,.,84,溶剂：冰醋酸 指示剂：ChP 以喹那啶红-亚甲蓝 （紫红天蓝） 滴定剂：高氯酸 (0.1mol/L) 醋酸汞：消除氢卤酸盐的干扰 需要做空白试验 摩尔比： 1：2,2、方法,.,85,3、计算,要求：99.0%,.,86,（二）UV法 VitB1片剂、注射剂,1、原理 共轭体,pH=2 HCl (91000) m