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1、第三章 药物定量分析与分析方法验证,第一节 定量分析样品的前处理方法,一、概述,含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。,结构特点：CX,（一）卤原子的活泼性,1. 卤原子与碳原子直接相连，卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系,（1）乙烯型卤和芳卤 不活泼,（2）烯丙型卤和苄卤 活泼,（3）卤代烷型 介于两者之间,2. 分子中所含卤原子的个数,分子中所含卤原子的个数越多，活泼性越强，特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时，活泼性增强更加明显。,二、不经有机破坏的分析方法,（一）直接测定法 凡金属原子不直
2、接与碳原子相连的含金属药物或某些CM（金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中可以电离，因而不需有机破坏，可直接选用适当的方法进行测定。,富马酸亚铁的含量测定 ChP (2000),取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸 15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg。,原理,Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+,（二） 经水解后测定法,1.直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）
3、中，加入氢氧化钠溶液（或一定量过量的硝酸银滴定液）后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Volhard法）测定。,本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物（如卤原子和脂肪碳原子相连者）。,原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。,例:三氯叔丁醇的测定 ChP（2000）,2. 用硫酸水解后测定法,例 硬脂酸镁的测定 ChP（2000）,取本品约0.1g，精密称定，
4、精密加硫酸滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清，继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液12滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg的MgO。,原理：,(三) 经氧化还原后测定法,1.碱性还原后测定 卤素结合于芳环上时,由于分子中碘的结合较牢固,需在碱性条件下加还原剂（如锌粉）加热回流，使结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Fajans法）测定。,本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。,例 泛影酸的测定 ChP (2000),取本品约0.4g，精密称定
5、，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。,USP (24)、BP（1998）,ChP(2000)收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。,2. 酸性还原后测定法,取本品的干燥品约0.4g，精密称定，加锌粉1g及冰醋酸10ml，加热回流30min，放冷，冷凝管用水30ml洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉
6、用水洗涤2次，每次20ml，洗液与滤液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于19.031mg的C11H12 I 3NO2。,例 碘番酸的测定 JP (13),3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量,(1)含锑药物 (2)含铁药物,三、经有机破坏的分析方法,适用于金属原子与碳原子结合牢固的有机金属药物。,(一) 湿法破坏 1. 硝酸-高氯酸法 本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏，有机金属药物经破坏后，得到的无机金属离子一般呈高价态。 本法不能用于含氮杂环药物的破坏。,2. 硝酸
7、-硫酸法 本法适用于大多数有机物质的破坏，破坏得到的无机金属离子均为高价态。 本法不能用于含碱土金属有机药物的破坏。,3. 硫酸-硫酸盐法 本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂，加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。 本法常用于含砷或锑有机药物的破坏，破坏得到的无机金属离子多为低价态。,4. 其它湿法 硝酸硫酸高氯酸法 硫酸氧化剂法（过氧化氢法、高锰酸钾） 破坏后，金属呈高价态,(二) 干法破坏,适用于湿法不易破坏完全的有机物以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏,注意事项： （1）加热或灼烧时，应控制温度在420
8、以下 （2）一定要灰化完全 （3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但不要轻易弃去,(三) 氧瓶燃烧法,（1）原理,氧瓶燃烧法：将有机药物放入充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或含量测定。,适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析,本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析,（ 2） 仪器与材料,仪器装置 燃烧瓶为500、1000或2000ml无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状,称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样
9、品 纸袋,C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹,吸收液,A. 作用：吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定的便于测定的价态,氧气,B. 吸收液的选择,氟 水 氯 NaOH溶液 溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液 碘 NaOH硫酸肼饱和溶液 硫 NaOH或H2O2 硒 硝酸溶液,（3）操作方法,燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。 样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下
10、端的网内或螺旋处。,样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。,根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶。,（4）注意事项,ChP（2000）规定的燃烧瓶体积为500、1000或2000ml三种，采用常量或半微量分析,正确选用燃烧瓶的目的在于：样品能在足够的氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。,测定含氟有机药物时，
11、用石英制 燃烧瓶,铂丝燃烧时起催化作用,应同时做空白试验,燃烧时要注意防爆,燃烧要完全,燃烧产生的烟雾完全被吸收,例 碘苯酯的含量测定 ChP（2000）,原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴-醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点。,（5）应用,取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水l0ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾
12、10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振摇，放置数分钟，加甲酸约lml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约35min以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02 Mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2。,滴定度的计算 放大反应,2mol碘苯酯1molI2 1molI21molNaIO+1molNaI 1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaI,即2mol碘苯酯2m
13、olNaIO3,2mol NaIO3+10molI-6molI2,即2mol碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3,反应摩尔比为16,98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝,96：133（99x：138）选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸,99：76氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为 A. H2O2溶液 B. H2O2NaOH溶液 C. NaOH溶液 D硫酸肼饱和液 E. NaOH硫酸肼饱和
14、液,99：134. 氧瓶燃烧法可用于 A. 含卤素有机药物的含量测定 B. 醚类药物的含量测定 C. 检查甾体激素类药物中的氟 D. 检查甾体激素类药物中的硒 E. 芳酸类药物的含量测定,第二节、定量分析方法的特点 一、容量分析法 用原料药精制品(含量99.5)或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2；进行回收率试验。回收率一般在99.7100.3之间。,(一)容量分析法的特点(二)容量分析法的计算问题,二、光谱分析法 (一)UV-可见分光光度法 用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于1。制剂的测定，回收率一般应在98102之间。,线性：吸光度A一般在0.20.7，浓度点
15、n5。用浓度c对A作线性回归处理，得一直线方程，r应大于0.999(n5)，方程的截距应近于零。 (二)荧光分析法 1.特点 2.荧光分析仪 3.含量测定,三、色谱分析法 (一) HPLC法：要求RSD2，回收率98102之间。 线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点n应为57，用浓度c对峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方程，r应大于0.999，截距应趋于零。,专属性：要考查辅料、有关物质或降解产物对主药的色谱峰是否有干扰，如有干扰应设法排除。 (二)气相色谱法 1.对仪器的一般要求 2.系统适用性试验 3.测定法,第三节 药品质量标准分析方法验证,一)目的,证明所采用的
16、分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。,二)用途,（一）药品质量标准起草时，分析方法需经验证。,（二）药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。,三)需验证的分析项目,1. 鉴别试验； 2. 杂质定量或限度检查； 3. 原料或制剂中有效成分含量测定； 4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定； 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。,验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。,四)验证内容,一、 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。,测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。,回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M,加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品
