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1、南充职业技术学院农业科学技术系,第四单元 畜禽繁育技术（四 ） 精液品质检查、稀释,内容,一 精液品质检查 二 精液稀释 三 精液保存,一 精液及其品质检查,精液 精液品质检查,1 精液外观状状检查,采精量：牛一般为每次5-10毫升，马40-70毫升，绵羊和山羊 0.81.2毫升，猪150-300毫升。,颜色与气味：正常的精液颜色是乳白色或灰白色，牛、羊的有时为乳黄色。若精液颜色异常，表明公牛生殖器官有疾病，应该弃去或停止采精。 正常精液略带腥味，牛、羊的另有微汗脂味。家禽精液乳白色、不透明、浓稠。,云雾状：云雾状明显用+表示，云雾状较明显用+表示，+表示不明显。,2 精子活力检查,精子活率：
2、是指精液中做直线运动的精子数整个精子数的百分率。,检查方法：,评定：采用“十级一分制”。,牛、羊的精液因密度大，先用生理盐水稀释后检查；,检查是温度应稳定在37左右，因温度对精子活力影响较大。,平板压片法：,悬滴法：,家禽应在4042 条件下检查，于采精后2030min内完成。,3 精子密度检查,精子的密度：是指单位体积（1毫升）精液中所含精子数。 估测法：稠密、中等、稀疏 稠密：每毫升精液中精子数约在10亿以上； 中等：每毫升精液中精子数约在2-10亿之间； 稀疏：每毫升精液中精子数约在2亿以下。,稠密,中等,稀疏,牛精子密度示意图,血细胞记数法 在显微镜下找到血细胞计算板上的计算室； 稀释
3、精液； 镜检：1毫升原精液中的有效精子数=5个中方格的精子数5（25个中方格）10（等于1mm3内的精子数）1000（1ml稀释后的精子数）稀释倍数,1,2,3,家禽精子密度检查： 采用血细胞计数器法，公式： C=n 107 C:精子密度，n为5个中方格的精子总数。,家禽精子畸形率检查：,尾部畸形多于头部，有尾部盘绕、折断、无尾等。,光电比色法 是根据精子的透光性而测定精子数的方法。透光性越高，则精子数越少，透光性越差，则精子数越多。现在甚至可与计算机联接，立即知道被测精液的活率和密度。,4 精子的其他检查,精子畸形率检查 精子畸形率：是指畸形精子占视野中总精子数的百分率。 精子畸形分为四类：
4、 头部畸形 颈部畸形 中段畸形 主段畸形 精子畸形率猪不超过18%，羊不超过14%，马不超过12%。如果畸形率超过20%，则视为精液品质不良，不能用做输精。,双头,双尾,精子顶体异常率检查,顶体异常有膨胀、缺损、部分脱落、全部脱落等情况。正常精液顶体异常率不高，牛平均5.9，猪为2.3%，如果精子顶体异常率超过14%，受精能力就会明显下降。 精子顶体异常率是评定保存精液，尤其是冷冻精液品质的重要指标之一。,精子生存时间：精子在体外完全死亡所需要的时间。 精子存活指数：相邻两次检查精子的平均活率与间隔时间的乘积之和。 精子生存时间越长，生存的指数越大，说明精子活力越强，精液品质好。 美蓝褪色试验
5、 精液果糖分解测定,精子生存时间和生存指数检查,精液稀释的目的 稀释液的成分及作用 稀释液的种类和配制 精液稀释方法与稀释倍数,二 精液稀释,（一）精液稀释的目的,精液稀释是采精及精液品质检查后，向精液中添加的适合精于体外存活并保持受精能力的液体。精液稀释的目的是： 1扩大精液量，增加一次采精量的可配母畜数。 2通过向精液中添加营养物质和保护剂，可延长精子在体外的存活时间。 3便于精液保存和运输。,（二）稀释液的成分及作用, 1、稀释剂 ：稀释剂主要用以扩大精液容量，要求所选用的药液必须与精液具有相同的渗透压。严格地讲，凡向精液中添加的稀释液都具有扩大精液容量的作用，均属稀释剂的范畴，但各种物
6、质添加各有其主要作用，一般用来单纯扩大精液量的物质有等渗的氯化钠、葡萄糖、蔗糖溶液等。 2、营养剂 ： 主要为精子体外代谢提供养分，补充精子消耗的能量。如糖类、奶类、 卵黄等。, 3、保护剂 缓冲物质：精子在体外不断进行代谢，随着代谢产物(乳酸和CO2等)的累积，精液的pH逐渐下降，甚至会发生酸中毒，使精子不可逆地失去活力。因此，有必要向精液中添加一定量的缓冲物质，以平衡酸碱度。常用的缓冲剂有柠檬酸钠、酒石酸钾钠、磷酸二氢钾等。近些年，生产单位采用三羟甲基氨基甲烷(Tris)作为缓冲剂，效果较理想。,降低电解质浓度物质： 副性腺中Ca2+、Mg2+ 等强电解质含量较高，刺激精子代谢和运动加快，
7、在自然繁殖中无疑有助于受精，但这些强屯解质又能促进精于早衰、精液保存时间缩短。为此，需向精液中加入非电解质或弱电解质，以降低精液电解质的浓度。常用的非电解质和弱电解质有各种糖类、氨基乙酸等。,抗冷物质 在精液保存过程中，常进行降温处理，如温度发生急剧变化，会使精子遭受冷休克而失去活力。发生冷休克的原因使精子内部的缩醛磷脂在低温下冻结凝固，影响精子正常代谢，出现不可逆的变性死亡。因此，在保存的稀释液中加入抗冷物质，使精子免受伤害。常用的抗冷休克物质有卵黄、奶类等。,抗冻物质 在精液冷冻保存过程中，精液由液态向固态转化，对精子的危害较大，不使用抗冻剂，冷冻精液就不能成功。一般常用甘油和二甲基亚矾(
8、DMSO)作为抗冻剂。,抗菌物质 在采精和精液处理过程中，虽严格遵守操作规程，也难免使精液受到细菌的污染，况且稀释液中含营养物质较丰富，给细菌繁殖提供了较好条件。细菌过度繁殖不但影响精液品质，输精后也会使母畜生殖道感染，造成不孕。常用的抗菌物质有青霉素、链霉素、氨基苯磺胺等。, 4、其他添加剂 除上述三种成分以外，另向精液中添加的、起某种特殊作用的微量成分都属其他添加剂的范畴。 激素类 向精液中添加催产素、前列腺E型等，能促进母畜子宫和输卵管的蠕动，有利于精子运行，提高受胎率。 维生素类 某些维生素如B1、B2、B12、C、E等具有改进精子活力，提高受胎率的作用。 酶类 过氧化氢酶能分解精液中
9、的过氧化氢，提高精子活力；淀粉酶能促进精子获能等。, 1、稀释液的种类 现用稀释液。等渗液：生理盐水、蔗糖 低温保存稀释液。加入卵黄抗休克 常温保存稀释液。以糖类和弱酸盐为主，pH偏低。 冷冻保存稀释液。以卵黄、甘油为主体，具有抗冻的特点。,（三）稀释液的配制和种类, 3、稀释液的配制 A、稀释液应现用现配，如配制后确需保存，经消毒、密封后放入冰箱中最多能保存23d。 B、配制稀释液的器具，用前必须洗净并严格消毒，用稀释液冲洗后才能使用。 C、配制稀释液的蒸馏水要新鲜，最好现用现制。 D、所用药品要纯净，一般使用化学纯制剂。药品称量要准确，经溶解、过滤、消毒后方能使用。 E、卵黄要取自新鲜鸡蛋
10、，抽取时尽量不要混入蛋清，待稀释液消毒冷却后加入。 F、奶粉的颗粒比较大，溶解时先用等量蒸馏水调成浆糊状，然后加蒸馏水至需要量，用脱脂棉过滤后放人9095C的水浴中消毒lOmin。, 1、稀释方法 A、精液稀释应在采精后立即进行。 B、采精后把精液迅速置于30的保温瓶中，以防温度的变化。 C、稀释时把精液和稀释液同时放在30的水浴锅中。 D、稀释时把稀释液沿着精液容器的壁慢慢加入精液中，边加入边搅拌。 E、如需高倍稀释，应先做35倍的低倍稀释，然后再高倍，以防稀释打击。,（四）稀释方法与倍数, 2、精液的稀释倍数 A、精液稀释倍数，应依据母畜每次受精所需的有效精子数、稀释液的种类、受配母畜数量
11、等确定。 B、公牛的精液一般进行1040倍稀释，公猪的精液一般做24倍稀释。,如何精确计算一份精液的稀释倍数？ 首先要考虑以下几个因素： 猪 1、该份精液总量 250ml 2、精子密度 2亿/ml 3、有效精子数（保存后使用前精子活率） 0.6 4、每次输入有效精子数 10亿 5、每次输精量 20ml 该份精液的有效精子数：250ml20.6=300亿 则分成的份数： 300亿/10亿=30份 则稀释后总量： 3020=600ml 则稀释倍数： 600-250/250=1.4, C、案例：有一头黑白花种公牛一次采得鲜精11 ml，经检查，精子活力为O7，密度是12亿ml。如为母牛输精时要求有效
12、精子数不少于3 000万，输精量为0.25ml，本次采得的精液处理后，能为多少头母牛输精？ 解：l ml原精液中的有效精子数12亿ml 0.7 8.4亿ml。 稀释后的l ml精液中的有效精子数0.3亿0.25ml 1.2亿ml 稀释倍数8.4亿ml 1.2亿ml 7 (倍)。 输精母牛头数11 ml7(倍)0.25 ml308 (头) 答：本次采得的精液能为300余头母牛输精。,现以公牛精液稀释倍数的计算方法举例如下：,1、稀释液的配制 目的：增加输精母禽数，提高繁殖效率。 常用稀释液：P255表8-3 2、稀释精液时的注意事项 （1）精子应无污染、透明液少的新鲜精液。 （2）稀释前要检查精
13、液品质。 （3）等温条件下进行，稀释液的渗透压与酸碱度与精液相同。 （4）精液沿壁缓慢加入稀释液，防止气泡产生。 （5）改变PH值，在25 保存24h再受精。,（五）家禽精液稀释,精液稀释后即可进行保存。通过保存，可延长精子在体外的存活时间，便于使用和运输。 现行的精液保存方式有3种，即 1、常温(1525)保存 2、低温(05)保存 3、冷冻(79196 )保存。,液态保存,固态保存,三 精液保存, 1、精液常温保存 常温保存的温度在1525之间，温度允许有一定变动，所以又称为变温保存或室温保存。常温保存所需设备简单，特别适合猪的精液。 （1）原理 常温保存是通过增加酸度，降低精液的pH来抑
14、制精子的代谢活动，以减少其能量消耗。酸性在一定范围内是可逆抑制，通常把pH调整到6.35左右。, （2）方法 （1）向稀释液中充入二氧化碳，如伊利尼变温稀释(1VT)。 （2）利用精子本身在代谢中产酸，自行调节pH，如康奈尔大学稀释液(CUE)。 （3）向稀释液中加入有机酸，如己酸稀释液(CME)。 （4）常温保存的稀释液除降低pH使精于代谢减慢外，还依靠给精子补充足够的养分，同时加入抗菌物质以抑制细菌的孳生。 （5）有的还在稀释液中加入缓冲物质；有的加入明胶以阻止精子运动。, （3）稀释液 稀释液除能降低PH，使精子代谢减慢外，还能给精子补充足够的养分，同时加入抗菌物质抑制细菌生长和繁殖。另
15、外加入明胶缓冲物质，阻碍精子运动。, 2、精液低温保存 （1）原理 低温保存主要是向稀释液中添加抗冷物质，防止精子发生冷休克。在体温状态下，精子的代谢正常，当温度降低时，精子的代谢活动减慢，当温度降至05，精于的代谢较弱，几乎处于休眠状态。此时精子的物质代谢和能量代谢均降到较低水平，废物累积减少，且此温下不利微生物的繁殖，故可达到保存目的。, （2）稀释液 在马、绵羊的精液保存中应用，参见P186表55。, （3）方法 精液进行低温保存时，应采取逐步降温的方法，并使用含卵黄的稀释液，以防冷休克。 A、首先把稀释后的精液，按着一个输精量(羊1020个输精量)，分装到一个试管中，封口，再包以数层棉
16、花或纱布，最外层用塑料袋扎紧，防止水分渗入。 B、把包装好的精液放到05的低温环境中，经12h，精液即降至05。,泡沫盒保存精液, 注意事项： A、在保存过程中，要维持温度的恒定，防止升温。 B、如特殊情况或运输可用广口保温瓶进行，在保温瓶中加78成满的冰块，把包装好的精液放在冰块上盖好，注意定期添加冰块。 C、如无冰源，可采用化学制冷法，在冷水中加入一定量的氯化铵或尿素，可使水温达24。, 3、精液冷冻保存,精液冷冻保存是利用液氮(196)或干冰(79)作冷源，将精液处理后冷冻起来，达到长期保存的目的。 精液冷冻保存是人工授精工作的一大进步，由于保存时间的延长，使精液的使用不受地区的限制，从而加快了家畜品种的育成和改良速度。 （1）精液冷冻保存的原理：利用超低温使精液和精子快速冷冻，快速越过形成冰晶的温度范围（0-60 ）、精液或精子中的水分不形成
