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1、免疫血清的制备,目的要求,熟悉免疫血清制备的过程 了解动物实验的基本知识,原理,将抗原物质经适当途径，按照预先制定的免疫方案免疫动物，经过一定时间，可刺激机体产生特异抗体并释放入血液，当血中抗体达到一定效价时采血，分离血清，即为特异性免疫血清（又称为抗血清）。因抗原具有多种表位，可激活多个克隆的B细胞活化产生抗体，因此，这种免疫血清又称为多克隆抗体。 本实验以绵羊红细胞（SRBC）作为免疫原，以家兔为免疫动物，制备兔抗养红细胞免疫血清（也称为溶血素）,原理,适当的途径、方法,一定时间,原理,优质免疫血清的产生主要取决于： （一 ）、抗原的纯度和免疫原性 （二 ）、动物应答的能力以及免疫程序,免
2、疫程序,影响因素 ：免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。,适当的途径、方法,一定时间,材料,1.动物 健康成年家兔，雄性，体重2-3kg；健康成年绵羊。 2.试剂 生理盐水、碘酒、75%酒精。 3.器材 剪刀、镊子、无菌注射器、量筒、无菌毛细滴管、无菌试管、离心管、三角烧瓶（200ml）、动物固定架、手术器械一套、塑料放血管等。,阿氏液（Alsevers Solution） 阿氏液是一种红细胞保存液，含有抗凝剂柠檬酸钠和细胞需要的养分葡萄糖。 阿氏液配方如下： 葡萄糖 2.05克 柠檬酸钠 0.8克 柠檬酸 0.055克 氯化钠 0.42克 加蒸馏水至100毫升，加热溶解后
3、将pH值调到6.1，高压灭菌，放置在4备用。,方法 兔抗羊红细胞免疫血清（溶血素）的制备,1.抗原制备 （1）用碘酒和75% 消毒绵羊皮肤，抽取颈静脉血液，注入含有等量阿氏液的三角烧瓶内，混匀。阿氏液既有抗凝作用，又适于储存SRBC。分装后置4冰箱内，可使用3周。 （2）无菌取上述绵羊血于离心管中，用无菌生理盐水洗涤红细胞，2000r/min，离心5min，吸弃上清液和白细胞层，再用无菌生理盐水与SRBC混匀， 2000r/min，离心5min，重复3次。最后一次离心10min，以使血细胞沉积于管底，弃去上清液。 （3）根据红细胞积压，用生理盐水配成20%SRBC悬液。,2.免疫动物 （1）全
4、班分为4组，每组选择健康雄性兔1只，用于免疫。 （2）用全血和SRBC悬液按下述方案免疫兔子。,免疫日期 第1天 第3天 第5天 第7天 第12天 第15天,注射途径 皮内 皮内 皮内 皮内 耳静脉 耳静脉 免疫原 全血 全血 全血 全血 20%悬液 20%悬液 剂量(ml) 0.5 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0,（3）试血 末次注射后第7天，耳静脉采血1ml ,分离血清，用试管凝集试验滴定效价。（1：2000以上可用）,3、分离血清 （1） 颈动脉放血（心脏采血）并收集于无菌三角烧瓶中凝固后4冰箱过夜，分离上层血清。然后2500r/min离心10min，收集收集上层血清。 （2）收集的血清经鉴定纯化后，小量分装，-20冻存。,
