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1、学 海 无 涯 1 新生儿溶血病检测卡标准操作程序(新生儿溶血病检测卡标准操作程序(SOP) 一、一、 准备工作准备工作 (一)微柱凝胶试剂卡的准备:(一)微柱凝胶试剂卡的准备:观察外观,如有干胶、杂质、气泡不可使用,之后将卡放置室温(18 25)平衡,再用专用离心机离心 5 分钟。 ( (二二) )试剂的制备:试剂的制备:6%牛血清白蛋白(盐水稀释) (三)(三)标本采集标本采集:采集被检对象静脉血,将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。 (四)(四)红细胞标本的制备红细胞标本的制备:用红细胞稀释液配制红细胞悬液,红细胞最终浓度为 0.8%1。 (五)(五)血清标本的制备:血清标本的
2、制备:将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中,10 分钟后离心,取上 清;或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中,4放置 12 小时,或 37放置 2 小时后离心, 2000rpm,10 分钟,取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。 (六)(六)放散放散试验试验:1 1、充分洗涤红细胞至少三次,取同体积洗涤后的压积血和 6%牛血清白蛋白混匀, 置于 56孵育 10 分钟,期间不断摇动,离心 1000rpm,23 分钟,取上清。即放散液。 2 2、充分洗涤红细胞至少三次,用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。参见 酸性放散试剂盒使用说明书。 二、二、 实验步骤实验步骤 1 1、取新生儿的红
3、细胞 0.8%1悬液 50ul 分别加入卡 1 中的 16 孔中。 2 2、使用专用离心机离心 5 分钟,900rpm 2 分钟,1500 rpm 3 分钟。 3 3、取出,判读结果。 4 4、第二卡 13 孔分别加入 50ul 新生儿血清,46 孔分别加入 50ul 新生儿红细胞放散液。 5 5、将 A 型红细胞悬液 50ul 分别加入 1 号、4 号;将 B 型红细胞悬液 50ul 分别加入 2 号、5 号; 将 O 型红细胞悬液 50ul 分别加入 3 号 6 号孔中。 6 6、37孵育 15 分钟。 7 7、取出,使用专用离心机离心 5 分钟(900rpm2 分钟,1500 rpm3
4、分钟) ,取出,判读结果。 结果判定结果判定 阳性结果:阳性结果:红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血 细胞被致敏。 阴性结果:阴性结果:红细胞完全沉降到凝胶底部,在凝胶管底部形成红细胞扣。表明血清中无相应抗原免 疫的抗体或血细胞没有被致敏。 反应强度:反应强度:特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面,为强阳性反应;复合物在胶中为弱阳性反 应;愈靠近胶底部颗粒愈小,反应愈弱(2+或 1+) 。 三、注意事项三、注意事项 1 1、红细胞标本一定不能被细菌污染,否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实 验。 2 2、血清标本:血清标本必须充分去除纤维
5、蛋白,否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出,阻碍红 细胞沉淀,呈假阳性反应。 3 3、如在微柱凝胶中出现溶血现象,强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应,也不排除其他原因所致 溶血,故对此标本一定认真分析,并向上级主管技术人员多报告并讨论。 4 4、父亲红细胞标本也可用与其同型的 A 型或 B 型红细胞代替。 5 5洗出尽量多红细胞进行放散;注意放散的温度不可超过 56,以防溶血;天冷时放散液注意保 温;尽可能多得放散液吸出;注意出去放散液中残留的红细胞;放散前红细胞要充分洗涤, 至少三次。 6 6、每日试验前,先取出微柱凝胶卡放置至室温。 7 7、红细胞悬液的浓度控制在 0.8%1之间。 8 8、试
6、剂卡应放在 18-25储存,如若长期放在 4冰箱,建议每 1-2 个月取出,用专用离心机离 心一次,以防止干胶或产生气泡。 学 海 无 涯 2 新生儿溶血病游离、放散试验的判定新生儿溶血病游离、放散试验的判定 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阳性 + + O 阳性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) A 型 O + 0 阴性 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阴性 + + O 阳性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) B 型 O + 0 阳性 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阳性 + + O 阳性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) A B 型 O + 0 阳性 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阴性 + + O 阴性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) O 型 O + 0 阴性