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1、学 海 无 涯 1 新生儿溶血病检测卡标准操作程序（新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP） 一、一、 准备工作准备工作 （一）微柱凝胶试剂卡的准备：（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18 25）平衡，再用专用离心机离心 5 分钟。 ( (二二) )试剂的制备：试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释） （三）（三）标本采集标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。 （四）（四）红细胞标本的制备红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为 0.8%1。 （五）（五）血清标本的制备：血清标本的
2、制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10 分钟后离心，取上 清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4放置 12 小时，或 37放置 2 小时后离心， 2000rpm，10 分钟，取上清。该上清不得有絮状物或沉淀。 （六）（六）放散放散试验试验：1 1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和 6%牛血清白蛋白混匀， 置于 56孵育 10 分钟，期间不断摇动，离心 1000rpm，23 分钟，取上清。即放散液。 2 2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。参见 酸性放散试剂盒使用说明书。 二、二、 实验步骤实验步骤 1 1、取新生儿的红
3、细胞 0.8%1悬液 50ul 分别加入卡 1 中的 16 孔中。 2 2、使用专用离心机离心 5 分钟，900rpm 2 分钟，1500 rpm 3 分钟。 3 3、取出，判读结果。 4 4、第二卡 13 孔分别加入 50ul 新生儿血清，46 孔分别加入 50ul 新生儿红细胞放散液。 5 5、将 A 型红细胞悬液 50ul 分别加入 1 号、4 号；将 B 型红细胞悬液 50ul 分别加入 2 号、5 号； 将 O 型红细胞悬液 50ul 分别加入 3 号 6 号孔中。 6 6、37孵育 15 分钟。 7 7、取出，使用专用离心机离心 5 分钟（900rpm2 分钟，1500 rpm3
4、分钟） ，取出，判读结果。 结果判定结果判定 阳性结果：阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血 细胞被致敏。 阴性结果：阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。表明血清中无相应抗原免 疫的抗体或血细胞没有被致敏。 反应强度：反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反 应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱（2+或 1+） 。 三、注意事项三、注意事项 1 1、红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本实 验。 2 2、血清标本：血清标本必须充分去除纤维
5、蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红 细胞沉淀，呈假阳性反应。 3 3、如在微柱凝胶中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致 溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员多报告并讨论。 4 4、父亲红细胞标本也可用与其同型的 A 型或 B 型红细胞代替。 5 5洗出尽量多红细胞进行放散；注意放散的温度不可超过 56，以防溶血；天冷时放散液注意保 温；尽可能多得放散液吸出；注意出去放散液中残留的红细胞；放散前红细胞要充分洗涤， 至少三次。 6 6、每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。 7 7、红细胞悬液的浓度控制在 0.8%1之间。 8 8、试
6、剂卡应放在 18-25储存，如若长期放在 4冰箱，建议每 1-2 个月取出，用专用离心机离 心一次，以防止干胶或产生气泡。 学 海 无 涯 2 新生儿溶血病游离、放散试验的判定新生儿溶血病游离、放散试验的判定 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阳性 + + O 阳性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) A 型 O + 0 阴性 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阴性 + + O 阳性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) B 型 O + 0 阳性 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阳性 + + O 阳性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) A B 型 O + 0 阳性 新生儿血型 A 细胞 B 细胞 O 细胞 结果 + O O 阴性 + + O 阴性 O O + 阳性(ABO 以外抗体引起溶血病) O 型 O + 0 阴性
