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1、1,微生物的实验室培养,第二课时纯化大肠杆菌,2,微生物实验室培养(知识点总结),3,复习题,1、甲、乙、丙是三种微生物,下表、是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在中正常生长繁殖;甲能在中正常生长繁殖,而乙和丙都不能;乙能在中正常生长繁殖,甲、丙都不能。下列说法正确的是:,A、甲乙丙都是异养微生物 B 、甲乙都是自养微生物、丙是异养微生物 C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物 D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物,4,复习题,2、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是: 化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高
2、压蒸汽灭菌 巴氏消毒法 A、 B、 C、 D、,6,配制培养基,在火焰旁右手拿锥形瓶,左手拔出棉塞; 右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰; 左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,立刻盖上皿盖。 待平板冷却凝固后,将平板倒过来放置。,倒平板过程总结:,7,Q1.培养基高压蒸汽灭菌后,需冷却到_左右时,才能倒平板。用什么办法来估计培养基的温度?_,Q2.操作时锥形瓶口通过酒精灯火焰的目的是: _,Q3.将平板倒置的目的是: _,Q4.在倒平板过程中,将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么? _,50,感觉锥形瓶的温度刚刚不烫手,就可以倒平板了,防止
3、瓶口微生物污染培养基,既可以使培养基表面冷凝的水分更好的挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染,不能,因为空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生。,配制培养基,8,平板划线接种,原理: 通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面 。,9,平板划线接种,灼烧接种环,冷却,划线 (第一区域),蘸取菌液,灼烧接种环,冷却,划线 (第二区域),灼烧接种环,冷却,划线 (第三区域),灼烧接种环,冷却,划线 (第四区域),灼烧接种环,冷却,划线 (第五区域),灼烧接种环,平板倒置放置培养,10,平板划线接种,第一区域,第二区域,第三区域,第四区
4、域,第五区域,11,Q2:每次划线前灼烧接种环的目的:,Q3:划线结束后灼烧接种环的目的:,平板划线接种,答案:避免接种环上可能存在的微生物污染培养基,答案:杀死上次划线结束后残留的菌种,答案:及时杀死接种环上残留的菌种,避免污染环 境和操作者。,Q1:第一步灼烧接种环的目的:,12,稀释涂布平板接种,原理: 将菌液进行一系列梯度稀释,并将不同稀释度 菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。 当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成 的标准菌落。,13,1、梯度稀释,2、涂布平板,稀释涂布平板接种,14,结果分析与评价,1、培养基制备成功的标准,2、接种操作成功的标准,如果未接种的培养基在恒温
5、箱中保温12天后无菌落生长, 说明培养基配制是成功的,否则实验失败,需重新配制。,如果培养基上生长的菌落颜色、性状、大小基本一致, 并符合大肠杆菌菌落的特点,则说明操作是符合要求的。 如果培养基上出现了其他菌落,则说明接种过程中,无菌 操作还未达到要求,实验失败,需分析原因,再次实验。,15,菌种的保藏(了解),1、临时保藏:适用于频繁使用的菌种。将菌种接种到固体斜面培养基,在适宜的温度下培养。当菌落长成后,将试管置于4的冰箱中保藏 2、甘油冷冻管保藏:适用于需长期保存的菌种。在3mL甘油瓶中,装入1mL甘油灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀,放-20的冷冻箱中保藏,16,纯化大肠杆菌(实验过程),