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1、第十章,甾体激素类药物的分析,基本结构：环戊烷骈多氢菲,第一节 基本结构与分类,分类：,甾体激素,肾上腺皮质激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,一、肾上腺皮质激素,氢化可的松,醋酸地塞米松,二、雄性激素及蛋白同化激素,丙酸睾酮,苯丙酸诺龙,孕激素,黄体酮,雌激素,炔雌醇,第二节 鉴别试验,一、物理常数的测定 1、熔点： 2、比旋光度：偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光物质1g的溶液，在一定的波长和温度下测得的旋光度。 如醋酸地塞米松：二氧六环中10mg/ml下比旋度+8288 3、吸收系数：如醋酸地塞米松在无水乙醇中240nm （15g/ml）吸收系数为343371,（一
2、）与强酸的呈色反应（母核）,H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl,二、化学鉴别法,(二) 官能团的反应,肾上腺皮质激素药物,呈色,四氮唑盐 OH,1、 C17 醇酮基,还原性,A. 呈色反应,B. 沉淀反应,肾上腺皮质激素药物,氨制硝酸银,Ag黑色,碱性 酒石酸铜,Cu2O橙红色,甾酮类激素药物,呈色,羰基试剂,2. C3酮基和C20酮基,常用的羰基试剂： 2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼,异烟腙（黄色）,睾酮,黄体酮,异烟双腙（黄色）,具有甲酮基或活泼亚甲基药物,呈色,亚硝基铁氰化纳 间二硝基酚 芳香醛,3. 甲酮基,黄体酮,其他甾体,亚硝基铁 氰化钠,蓝紫色,淡橙色 不显色,黄体
3、酮,蓝紫色,含炔基的甾体激素,银盐沉淀,硝酸银,5. 乙炔基,4. 酚羟基,雌激素类药物,重氮苯磺酸,红色偶氮染料,炔雌醇,白,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,6. 有机卤素,茜素氟蓝 硝酸亚铈,硝酸硝酸银,AgCl,呈色（蓝紫色）,茜素氟蓝,蓝紫色,F-,7.酯的反应 C17或C21位上羟基的酯，水解产生相应的羧酸，再根据羧酸的性质进行鉴别。 如：,特臭,特臭,三 、 制备衍生物测定m.p.,（一）缩氨基脲的生成,（二）酯的水解,-3-酮 240nm,苯环 280nm,四 、UV法,结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基,炔雌醇,五、 IR法,六、 TLC法,主要用于甾体激素类药
4、物制剂的鉴别,方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。,七、 HPLC法,主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）,方法：对照品法 要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。,第三节 特殊杂质检查,一、有关物质的检查,来源 ：原料、中间体、异构体、降解产物,特点：（1）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似,方法（具有一定分离能力）：TLC法（高低浓度对比法）；HPLC法（主成分自身对照）,（一）TLC法（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质斑点数目 规定杂质斑点颜色,醋酸氟轻松:检查有关物质,取
5、本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml作为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5l，分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97 : 3）为展开剂，展开后晾干，在105干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑点比较，不得更深。,特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。,（二）HPLC法（高低浓度对比法）,判定方法： 规定杂质峰数目 规定杂质峰面积,特点： （1）
6、需特殊的仪器； （2）不需对照品； （3）可以控制杂质的总量；,来源： 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢,原理及方法：,二、硒的检查,醋酸氟轻松检查硒 取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至100ml容量瓶中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，用水加至刻度。取硒对照液（0.05ug/ml）和上述供试品溶液分别用氨试液调节pH值至2.0 0.2后，转移至分液漏斗中，用水少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐酸羟胺溶液（12）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基萘试液5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈振摇2，静置分层，取环己烷脱
7、水后，测A378nm。 规定 A供A对。,三、有机溶剂残留量的检查 （甲醇和丙酮）,甲醇 0.3%,丙酮 5.0%,GC法,内标法定量,原理及方法：,供试液对照液,钼酸铵,磷钼酸铵,H+,还原,磷钼酸蓝（钼蓝）,740nm,A样A对,四、游离磷酸盐的检查,检查 游离磷酸,地塞米松磷酸钠,精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20放置3050分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。,一、HPLC法,各国药典多采用RPHPLC（大多
8、内标法）,特点 用样量少，灵敏度高，分离效果好, 测定速度快.,甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质， 对利用结构特征设计的比色法有干扰。,第四节 含量测定,二、UV法,-3-酮 240nm,肾上腺皮质激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素,苯环 280nm（）,雌激素,肾上腺皮质激素类,C17 -醇酮基,强还原性,1. 原理,OH -,还原,(一)四氮唑比色法,三、比色法,三苯甲臜深红,蓝四氮唑（BT）,双甲臜（暗蓝）,2. 方法,对照品法,3. 讨论,（1） 基团对反应速度的影响,C11= O C11OH,C21OH C21-酯,21位酯化后反应速度减慢，酯化基团越大反应速度越慢,（2
9、） 溶剂、水分的影响,含水量5%,含水10%A10% 含水30%几无反应, 无水乙醇,（3）碱的种类及加入顺序,反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行 以氢氧化四甲基铵的结果最佳,加入顺序：,（4） O2与光线的影响,反应过程 反应产物,怕光,避光、快速,O2影响颜色强度和稳定性,隔绝空气、 快速、充N2,（5） 温度与时间,t甲臜分解%,肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素,C3酮基,1. 原理,异烟腙（黄色）,2. 方法：,暗45,对照品法,C供,C对,C供,A供,A对,C对,（1）溶剂的选择,异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇,无水甲醇 无水乙醇,3.讨论,（3）水分、温度、O2与光线的影响,含水量腙水解A%,不挥发溶剂、不吸收水分时 O2与光线无影响,反应速度,（4）,C3= O C17= O 、 C20= O C11= O 不反应,反应专属性 C3酮基,1. 原理,雌激素,雌二醇-3-甲醚,max=465,max=515,四、非水溶液滴定法,五、生物样品中甾体激素的分析,
