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1、UGT2B7基因多态性与联苯胺职业暴露工人尿脱落细胞巴氏分级结果的摘要： 目的 研究UGT2B7基因多态性与联苯胺职业暴露工人尿脱落细胞巴氏分级（PG）结果之间的关系。 方法 选取上海市染料化工行业职业性联苯胺接触队列中2003年接受膀胱癌医学监护的成员248人为对象，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）检测UGT2B7基因型；用巴氏分级法对尿脱落细胞进行分级。 结果 PG 组和PG组的UGT2B7*1/*1（CC）基因型携带者的比率分别为54.9%和48.0%（P 0.05）。两组人群UGT2B7各基因型的分布频率也未见显著性差异（P 0.05）。 结论 UGT2B7基
2、因多态性形态对联苯胺暴露工人PG升高的风险可能没有影响。关键词：葡萄糖醛酸转移酶；多态性；联苯胺；巴氏分级Association between Polymorphism of UGT2B7 Genotype and Papanicolaou Grade of Exfoliated Urothelial Cells in Workers Occupationally Exposed to BenzidineSHEN Chun-lin，XIANG Cui-qin，ZHANG Sheng-nian，QIN Yi-qiu，YUAN Dong，ZHANG Yun-ying，LIU Cha-zhen，C
3、HEN Ji-gang（Shanghai Municipal Center for Diseases Control and Prevention，Shanghai 200336，China）Abstract：Objective To investigate the association between polymorphism of UGT2B7 Genotype and Papanicolaou grade of exfoliated urothelial cells in workers occupationally exposed to benzidine. Methods All
4、248 subjects in this study were members of benzidine-exposed cohort in Shanghai dyestuff industry，who participated in the medical surveillance in 2003. The genotype polymorphism of UGT2B7 were assessed with the method of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism（PCR-RFLP）. R
5、esults The proportion for individuals carrying UGT2B7*1/*1（CC）in Papanicoloau grade above II was higher than that in Papanicolaou grade II and below II（54.9% and 48.0% respectively），but not statistically significant. Conclusion The result indicates that there is no definite correlation between UGT2B
6、7 gene polymorphism and elevated Papanicolaou grading.Key Words：UDP-glucuronosyltransferase（UGT）；polymorphism；benzidine；Papanicolaou gradings（PG）UGT是一种重要的相代谢酶，催化多种外源性化学物如芳香族、羟酸、酚、脂肪醇等和-D-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的结合反应。葡萄糖醛酸结合是联苯胺在体内的重要代谢途径1-3。ZENSER等研究发现，肝脏中表达的5种UGT1A基因型和UGT2B7基因型的葡萄糖醛酸转移酶均参与联苯胺及其代谢物在体内的代谢4。但有关UGT
7、基因多态性的研究多是在离体细胞或实验动物上开展，目前尚未见疾病人群或高危人群中UGT2B7基因多态性分布的报道5-8。本研究对上海市联苯胺职业暴露人员UGT2B7的基因多态性进行了分析，探讨该基因的多态性形态与膀胱癌易感性之间可能存在的联系。1 对象与方法1.1 研究对象选择上海市染料化工行业职业性联苯胺接触队列中2003年接受膀胱癌医学监护成员248人为研究对象，每人抽取静脉血5 ml，EDTA抗凝，血样置-80 保存备用。到血样采集之日止，此248人均未被诊断为膀胱癌或其他任何癌症及重大疾病。以2003年巴氏分级（PG）的检查结果为依据，分为PGII组和PGII组。参照HAYES等人9的评
8、估方法，职业性联苯胺接触者的工种接触强度序数定义为：“1”是制造联苯胺工艺过程中的反应和还原工种、使用联苯胺生产染料工艺过程中的后处理工种；“2”是制造或使用联苯胺工艺过程中的维修、技术、分析及管理诸工种；“3”是使用联苯胺生产染料工艺过程中的反应（或称合成）和试验工种；“4”是制造联苯胺工艺过程中的后处理工种、使用联苯胺生产染料工艺过程中的送料、配料及仓库工种。联苯胺接触强度指数为工种接触强度序数与从事该工种的累计年限之乘积，按照联苯胺接触强度指数的大小分成3组，指数5者为低暴露水平组，指数520者为中等暴露水平组，指数20者为高暴露水平组。1.2 DNA的抽提采用常规的酚-氯仿法抽提DNA
9、10。1.3 主要试剂DNA限制性内切酶Bse GI购自Sigma公司、DNA聚合酶Taq和4dNTP购自Promega公司，其它试剂均为分析纯；PCR扩增引物（上海生工）序列为：上游引物5-GAC AAT GGG GAA AGC TGA CG-3；下游引物5-GTT TGG CAG GTT TGC AGT G-3。1.4 UGT2B7基因型的鉴定根据HOLTHE 等人的限制性酶切片段长度多态性的方法（PCR-RFLP）进行11。以基因组DNA为模板，用PCR法进行DNA扩增，PCR扩增产物为116 bp的目的片段。PCR反应条件为94 预变性10 min，94 变性30 s、65 退火30
10、s、72 延伸30 s，循环35次，72 延伸10 min，所有PCR反应均设有空白对照。PCR扩增产物在含2%（w/v）溴乙锭的琼脂糖凝胶上电泳检测。8.5 l的PCR产物加限制性内切酶Bse GI 2U，使体系总体积为10 l，55 温育3 h，然后加入10 mmol/L的EDTA 终止酶切反应。酶切产物在4%（w/v）含溴乙锭的琼脂糖凝胶上电泳分离，电压100 V，电流10 mA，电泳30 min，紫外灯下观察电泳结果。1.5 数据处理和统计方法 应用SPSS12.0统计软件进行统计分析。采用2检验分析比较两组人群各基因型的分布差异，计算OR值和95% CI值来评估各基因型的风险。同时结
11、合年龄、吸烟、性别和暴露水平等多种因素分析基因多态性对PG及癌症风险的影响。对研究样本的群体代表性，采用2检验验证Hardy-Weinberg平衡。2 结果2.1 调查对象的基本情况受检对象共248人，PGII组71人，PGII组177人，人群基本情况见表1，PGII和PGII组的平均年龄分别为67.108.74岁与62.239.36岁，PGII组人群的平均年龄显著大于PGII组（P 0.001）； PGII组女性的比率显著高于PGII组（P = 0.006）；两组人群吸烟状况、联苯胺暴露接触水平的分布差异不具有统计学意义。2.2 UGT2B7基因多态性在人群中的分布人群中UGT2B7基因型分
12、析结果见表2，表中列出UGT2B7基因型在不同种族人群中的分布频率并与本次研究联苯胺职业暴露队列人群UGT2B7基因型的分布频率进行了比较，结果表明，中国联苯胺职业暴露人群与日本同类人群（84人）之间UGT2B7基因多态性的分布无差异，而与高加索同类人群（91人）之间存在显著的差异（P 0.05）；两组人群UGT2B7各基因型的分布频率也无显著差异（P 0.05）。另外，结合性别、年龄等风险因素对UGT2B7基因型与巴氏分级PG之间的关系进行了分析，结果表明UGT2B7基因型与上述两个风险因素之间不存在相互作用。2.4 UGT2B7等位基因分布表4可见，UGT2B7等位基因His和Tyr在PG
13、II组和PGII组中的分布，2 = 0.771，P = 0.380，两组间等位基因分布均衡，没有组间差异。2.5 吻合度检验为了检验观察样本基因型频率是否达到了Hardy-Weinberg平衡，对两组的基因型频率进行吻合度检验。结果显示UGT2B7基因型期望值与观察值吻合较好，达到Hardy-Weinberg平衡（见表5）。 3 讨论尿脱落细胞巴氏染色检查法是PAPANICOLAOU和MARSHALL于1945年建立的一种无创性泌尿系统肿瘤诊断方法13。CRABBE14采用此法对有职业暴露的染料工人进行了尿细胞学筛选，检出了67例膀胱癌，特异性达90%，从此尿脱落细胞巴氏染色检查法成为膀胱癌诊
14、断的常用方法之一15。其尿脱落细胞的判断标准如下：第I级，未见非典型或异常细胞（正常）；II，有非典型细胞，但无恶性现象，包括良性变形细胞、炎性增生细胞和异质细胞等；III，有可疑恶性细胞；IV，有癌细胞；V，有癌细胞，形态典型16。根据巴氏分级的检查结果，我们将联苯胺接触人群分成PGII组（正常组）和PGII组（异常组）。UGT2B7是一种重要的相代谢酶，葡萄糖醛酸结合反应是联苯胺在体内的重要代谢途径。本研究检测了它的多态性在联苯胺职业接触人群中的分布频率。对UGT2B7*1/*1（CC）来讲，其在联苯胺职业接触人群中的出现频率与日本同类人群的频率相似（P0.05），却远远高于高加索同类人群
15、中的频率12（P 0.001）。这表明中国人群与其他种族人群之间有着显著不同的UGT2B7基因多态性分布形态，这种差异可能对不同种族个体的疾病易感性有着不同的影响。结合巴氏分级的检查结果，分析比较PGII组（正常组）和PGII组（异常组）中UGT2B7各基因型的分布差异，结果显示UGT2B7等位基因在两组间的分布均衡可比，样本基因型频率符合Hardy-Weinberg平衡法则。虽然异常组人群中UGT2B7*1/*1（CC）基因型携带者的比率高于正常组，但是两组人群UGT2B7各基因型的分布频率无显著差异，UGT2B7基因的多态性形态可能不影响联苯胺职业接触人群膀胱癌的发病风险，其对联苯胺暴露工人巴氏分级升高的风险可能也没有影响。这也侧面地证实了ZENSER等人细胞学的研究结果，UGT2B7催化联苯胺代谢的能力相对较弱。参考文献：印木泉遗传毒理学M北京：科学出版社，2002，79-80.刘茶珍，边建超，沈福民.葡萄糖醛酸转移酶的分子生物学研究进展J.江西中医学院学报，1998，10（2）：94-96.彭金咏，栾连军. 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的研究进展J.中国现代应用
