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1、食品中亚硝酸盐的测定(盐酸萘乙二胺分光光度法),实验目的,1.明确亚硝酸盐在食品中的作用以及限量标准。 2.掌握盐酸萘乙二胺法测定食品中亚硝酸盐的原理、操作步骤、注意事项。,实验原理,样品经沉淀蛋白质,除去脂肪后,在弱酸条件下硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料,产生的颜色深浅与亚硝酸根含量成正比,可以比色测定。与标准系列比较定量。,722分光光度计 组织绞碎机 分析天平 500mL容量瓶 恒温水浴锅 50mL具塞比色管,实验步骤,1.样品的处理 2.标准曲线的绘制 3.试样的侧定,样品的处理,(1)取样:取适量的火腿肠,放入搅碎机内搅碎。准确称取5.0克经绞碎、
2、混匀的样品,置于50毫升烧杯中。 (2)沉淀蛋白质: 加12.5mL硼砂饱和溶液,搅拌均匀,以70左右的水约300mL将样品洗入500mL容量瓶中,置沸水浴中加热15min,取出后冷却至室温。 一面转动一面加入5毫升亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5mL乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质, (3)过滤:加水定容,放置0.5h,除去上层脂肪,清液用滤纸过滤,弃去初滤液30mL,滤液备用。,标准曲线的绘制,精密吸取0.00, 0.20, 0.40, 0.60, 0.80, 1.00, 1.50, 2.00, 2.50mL亚硝酸钠标准使用液(相当于0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5g亚硝酸钠),分别置
3、于50mL比色管中。各加2ml对氨基苯磺酸溶液(4g/l),混匀,静置3-5min后各加入1ml 0.2盐酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混匀,静置15min, 以零管调节零点,于波长538nm处测吸光度A,绘制标准曲线。,试样的测定,精密吸取40.0ml样液于50ml比色管中。以下按标准曲线测定方法依次加入其它试剂。加水稀释至刻度,混匀,静置15min,以零管调节零点,于波长538nm处测吸光度A。 同时做试剂空白。,数据处理,X 试样中亚硝酸盐的含量, mg/kg; V1 测定时所取溶液体积,mL; V2 试样处理液总体积,mL m 试样质量,g; A试样测定液中亚硝酸盐的质量,g;,评 价,
4、722分光光度计的使用方法,722分光光度计的使用方法,1、预热 为使仪器内部达到热平衡,开机后预热时间不小于30 分钟(波长调至538nm处)。 注意:由于仪器检测器(光电管)有一定的使用寿命,应当尽量减少对光电管的光照,所以在预热的过程中应打开样品室盖,切断光路。,722分光光度计的使用方法,2、改变波长 通过旋转波长调节手轮可以改变仪器的波长显示值(顺时针方向旋转波长调节手轮波长显示值增大,逆时针方向旋转则显示值减少)。调节波长时,视线一定要与视窗垂直。,722分光光度计的使用方法,3、置0%(T) 打开样品室盖,切断光路(或将黑体置入四槽位样品架中,用样品架拉杆来改变四槽位样品架的位置
5、,使黑体遮断光路)后,按“0%ADJ”键即能自动置0%(T),一次未到位可加按一次)。,722分光光度计的使用方法,4、置100%(T) 将用作参比的样品置入样品室光路中,关闭掀盖后按 “100%ADJ”键即能自动置 100%(T),一次未到位可加按一次。 注意:置100%(T)时,仪器的自动增益系统调节可能会影响0%(T),调整后请检查0%(T), 若有变化请重复调整0%(T)。,722分光光度计的使用方法,5、样品测定 将待测溶液置于光路中,盖上箱盖,由此由显示屏读得待测溶液的A值。 注意:用蒸馏水冲洗比色皿(用拇指和食指捏取毛面),并用待测溶液润洗,将待测溶液移入比色皿使液面至比色皿容积的2/3处,用滤纸吸去比色皿外壁残液,用镜头纸将比色皿擦拭干净,轻轻置于样品室中,关闭样品室盖,读数。,722分光光度计的使用方法,6、测量完毕 关闭开关取下电源插头,取出比色皿洗净擦干,放置安全处。盖好比色皿暗箱,盖好仪器。,