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1、病原生物学实习指导主 编 刘 兵 史俊岩 主 审 周正任 罗恩杰编 者 刘 兵 王 舰 史俊岩 郑兰艳 王雪莲 中国医科大学病原生物学教研室2004年7月前 言根据国务院学位委员会的指示，将原医学微生物学与人体寄生虫学学科合并为病原生物学学科。国内多所医学院校先后都做了相应的调整，成立与组建病原生物学教研室，并将二门课合并，开设病原生物学课。按教育部的意见，新一轮教学改革最终要落实到培养适应新世纪需要的创建型、协作型、复合型人才，拓宽知识面。因此，我们联合大连医科大学、锦州医学院、沈阳医学院等四所院校编写了病原生物学教材，该教材将医学教育中医学微生物学、人体寄生虫学，感染性疾病和传染性疾病中病
2、原学诊断及特异性防治部分整合在一起，适合培养创新性、开拓型人才。适合培养目标的需要。该教材已经通过教育部高等教育司的审批，被列为“面向二十一世纪课程教材”，由科学出版社出版，面向全国发行。为配合病原生物学教材的使用，我们特地编写了病原生物学实习指导，供本科大学生学习病原生物学实验课之用。本教材由医学微生物学实习指导和人体寄生虫学实习指导两部分组成，通过实习课教学使学生了解和掌握病原生物学的基本实验技能操作和基本研究方法，同时也能获取相应的感性知识。为培养学生的思维能力和独立操作能力，在进行设计性实验课教学时，学生也能利用本实习指导作为工具，顺利地进行实验操作，以节省学生获取知识的时间。为此目的
3、，对每项实验的目的及实际意义都有所交代，对实验结果的观察与分析，也予以必要的辅导。限于教学时数和条件，有些内容将以示教、电视或电影教学方式教学，这部分尤其需要加强复习，以弥补未能亲自操作之不足。有关实验课的改革设想，仍须不断地接受实践考验，发扬成绩克服缺点，以不断地充实和提高。本实习指导由刘兵主编，全体实验课教师参加编写，周正任、罗恩杰教授全面审定，我们认为本实习指导符合教学实际，但仍难免有不当之处，欢迎予以批评指正。中国医科大学病原生物学教研室2004年7月目 录实习目的与要求1实验室规则1显微镜的使用方法2常用标本及观察方法3绘图法3第一篇 医学微生物学实验4第一章 细菌形态学检查法4实验
4、 1 不染色标本的观察 2 革兰氏染色法5 3 荚膜染色法84 鞭毛染色法95 芽胞染色法 10第二章 细菌培养实验 11实验 1 常用培养基制备 112 细菌分离培养与纯培养123 细菌生化反应检查法164 细菌内毒素的检测（鲎试验）19第三章 消毒灭菌和药物敏感性实验 20实验 1 常用消毒灭菌除菌器的使用 202 细菌的药物敏感性试验22第四章 化脓性球菌的病原学检测 28实验 1 化脓性球菌的病原学检测程序 282 细菌血浆凝固酶试验303 细菌的触酶试验 314 细菌耐热核酸酶试验 315 肺炎球菌对小白鼠的传染试验 326 抗链球菌溶血素“O”试验 33第五章 肠道杆菌病原学检测
5、35实验 1 常用培养基制备 352 病原性肠道杆菌的分离与鉴定方法373 肥达氏反应40第六章 厌氧性细菌实验43实验 1 厌氧培养法432 破伤风毒素抗毒素中和试验 443 产气荚膜杆菌实验 45第七章 结核杆菌、白喉杆菌实验46实验 1 抗酸染色法462 结核杆菌培养实验 473 白喉杆菌奈瑟氏染色实验 48第八章 真菌及其他微生物实验49实验 1 支原体培养实验492 真菌培养实验 493 钩端螺旋体培养实验53 4 放线菌的硫磺颗粒检查法 54第九章 病毒学实验56实验 1 电子显微镜下病毒形态观察 56 2 病毒培养法 573 细胞病变观察及病毒量测定 634 流感病毒的血凝与血凝
6、抑制试验 655 乙型肝炎病毒的血清学检测法 67第十章 微生物学分子生物学技术 72实验 1 质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳 72 2 DNA的限制性内切酶酶切实验和连接实验 74 3 耐药质粒DNA转化实验75 4 PCR方法检测病原微生物76 5 核酸杂交法检测病原微生物77第二篇 人体寄生虫学实验 81第十一章 线虫实验 81实验 1 似蚓蛔线虫 81 2 蠕形住肠线虫 833 毛首鞭形线虫 844 十二指肠钩口线虫、美洲板口线虫 855 旋毛形线虫 886 班氏吴策线虫、马来布鲁线虫 887美丽筒线虫、结膜吸吮线虫 908猪巨吻棘头虫 90第十二章 绦虫实验 92实验 1 肥胖带吻绦
7、虫、链状带绦虫 922 细粒棘球绦虫 953 微小膜壳绦虫 974 曼氏迭宫绦虫98第十三章 吸虫实验100实验 1 华支睾吸虫1002 卫氏并殖吸虫1023 斯氏狸殖吸虫1054 日本裂体吸虫1065 布氏姜片吸虫1086 肝片形吸虫110第十四章 原虫实验111实验 1 溶组织内阿米巴原虫、结肠内阿米巴原虫1112 杜氏利什曼原虫1143 阴道毛滴虫1154 兰氏贾弟鞭毛虫1165 间日疟原虫、恶性疟原虫1176 薄血膜的制作与染色、观察柏氏疟原虫119 7 刚地弓形虫120 8 卡氏肺孢子虫121实验目的和要求【目的】1掌握病原生物学的基本实验方法和操作技术。2通过实验设计的讨论和实验结
8、果分析，培养学生科学思维方法，提高独立工作能力。 【要求】1每次实习前必须做好预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项等，避免和减少发生错误。2实验过程中必须持严肃认真的态度。3对实验结果必须进行仔细地观察和认真地记录，然后进行科学分析，得出恰当结论。4独立认真完成实验报告，书写实验报告要字迹清楚，语言简练，表格清晰，画图应力求反映实际标本的原状。5切实遵守实验室规则。实验室规则1上实验课时，先到更衣室把个人的书包和衣物放在衣柜内，穿好白衣（实验防护衣）和拖鞋。随身只带必要的实习指导、笔记本和文具，进入实验室后放入抽屉内。2实验室要保持肃静和秩序，不得高声谈笑和随处走动。3实验室内禁止
9、饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔和标签等。4如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品时，应即用3%的来苏儿消毒；皮肤破伤须向指导教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。5用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地点，不得随意抛置。6注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏器材时，应立即报告指导教师，听候处理。7易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源。一旦起火，应迅速用沾水的布类和沙土覆盖扑火。8实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫室内卫生，并检查水、电、煤气等开关是否关好，防止发生安全事故。9离开实验室后，到更衣室脱下白大衣，将白衣和拖鞋整齐放入柜内，洗手消毒后离去。显微镜的使用方法 【目的】要求熟练掌握显微镜的使用方法，尤其是油浸镜的使用方法。 【要求】1使用前必须对所用显微镜进行详细检查，如发现问题应及时向老师报告。2调光：检查未染色标本时，以弱光线为宜，此时可将集光器下降或缩小光栅，检查染色标本时，以光线强为宜，此时应适当升高集光器或将光栅打开。3标本观察：将标本置于载物台上，先用低倍镜观察。用粗螺旋调至看出物象后，再调节微螺旋，使物像更加清晰。在换高倍镜观察前，鉴于高倍镜视野范围比低倍镜小，故须将被观察内容移至视野中央后再换之。有时显微镜本身存在偏心现象
