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1、微生物的培养及应用限时训练提升考能(时间：20分钟)达B必练一、选择题1.(2015扬州中学开学考)关于灭菌和消毒的叙述，错误的是()A.接种环、接种针用灼烧的方法灭菌B.灭菌是杀死物体内外所有微生物C.消毒是杀死物体内外绝大多数的微生物D.高压蒸汽灭菌的原理是使细菌DNA变性解析高压蒸汽灭菌的原理是使菌体蛋白质凝固变性，D错误。答案D2.(2015苏北三市三模)微生物接种方法很多，平板划线法是最常用的一种。如图是平板划线示意图，划线的顺序为。下列操作方法错误的是()A.划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培养基B.平板划线后培养微生物时要倒置培养C.不能将第区域的划线与第区域的划线相连D.在区
2、域中划线前后都要对接种环进行灭菌解析划线时，应注意不能将培养基表面划破，A错误；平板划线后，培养微生物时需倒置培养基培养，以免水气凝结后流入培养基，污染培养基，B正确；为经过划线稀释后的菌种，若与接触，则达不到分离的效果，C正确；每次接种前对接种环进行灼烧灭菌的目的是保证划线的菌种来自上一次划线区域的末端，最后灭菌的目的是防止污染环境和感染操作者，D正确。答案A3.(2015南京盐城一模)下列有关微生物培养的叙述，错误的是()A.获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B.平板划线法和稀释涂布平板法都可对微生物进行计数C.培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌D.倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落，造成污染
3、解析获得纯净培养物的关键是无菌操作，防止外来杂菌入侵，A正确；平板划线法是用于分离菌落的，稀释涂布平板法是用于计数的，B错误；培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，C正确；倒平板后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而污染，D正确。答案B4.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是()A.操作顺序为配制培养基调节pH灭菌包扎分装搁置斜面B.将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C.待培养基冷却至50 左右时倒平板D.待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是配制培养基调节pH分装包扎灭菌搁置斜面，其顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以称好后需将称
4、量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。待培养基冷却至50 左右，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时开始倒平板，平板冷却凝固后才能倒置。答案A5.细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌()A.接种环、手、培养基 B.高压锅、手、接种环C.培养基、手、接种环 D.接种环、手、高压锅解析一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长和繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅指杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，如操作者的手和衣着需要消毒处理。
5、高压蒸汽通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。答案C6.下列关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，不正确的是()A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高压蒸汽灭菌后倒平板B.取104、105、106倍土壤稀释液和无菌水各0.1 mL涂布不同平板C.将实验组和对照组平板倒置，37 C恒温培养2448小时D.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数解析制备培养基时，需要将培养基用高压蒸汽灭菌，A正确；接种方法为稀释涂布平板法，即需要制备不同的土壤稀释液后才能倒平板，B正确；对照组和实验组需要放置在恒温
6、培养箱中培养，C正确；一般选择菌落数在30300的平板进行计数，D错误。答案D7.(多选)(2015南通一模)有关微生物实验室培养的叙述，正确的是()A.在熔化琼脂时，需要控制火力并不断搅拌，以免发生焦糊B.灼烧、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等都属于无菌技术C.样品中活菌数量统计时，接种方法应采用划线法D.用平板培养基培养微生物时，应将平板倒过来放置解析琼脂熔化时，容易糊底，所以熔化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底，A正确；微生物接种时的金属接种工具和试管口可以灼烧灭菌，高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌，接种室、接种箱需要用紫外线照射灭菌，所以灼烧、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等都
7、属于无菌技术，B正确；在微生物的培养中，稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，C错误；倒平板操作时，待平板凝固后，需要将其倒过来放置，防止水珠落到培养基上，D正确。答案ABD8.(多选)用涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，不正确的是()A.涂布了一个平板，统计的菌落数是230B.涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D.涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为
8、重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案ABC二、非选择题9.(2015襄阳调研)生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少，但当其水源水不洁或处理达不到要求时，仍然会含相当量的微生物甚至含有致病性微生物。供水管道破损及二次供水等环节也可能导致生活饮用水的污染。因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的。我国生活饮用水水质标准(GB574985)中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/mL，总大肠菌群不得大
9、于3个/L。(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为_。(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？_。为什么？_。(3)如分别取0.1mL已稀释102倍的水样分别涂布到四个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为161、155、158、170，则每升原水样中大肠杆菌数为_，(4)纯化大肠杆菌时使用的培养基一般用_法灭菌，_(可/不可)用加入抗生素的方法防止杂菌感染。(5)如果要测定水中的病毒种类，可以用_技术使其遗传物质扩增，然后用_技术进行鉴定。
10、答案(1)稀释涂布平板法(2)需要因为需要判断培养基是否被污染(3)1.60108(4)高压蒸汽灭菌不可(5)PCRDNA分子杂交冲A提升一、选择题10.(2015南京三模)下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤，下列有关叙述正确的是()A.步骤操作时，倒好平板后应立即将其倒置，防止水蒸气落在培养基上造成污染B.步骤接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液C.步骤沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数D.步骤是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌的菌落解析步骤操作时，倒好平板后要等培养基凝固后将其倒置，防止水蒸气落在培养基
11、上造成污染，A错误；步骤接种环和试管口应先在火焰上灼烧灭菌，待接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液，以防高温使菌种死亡，B正确；平板划线法可分离菌种，但无法进行计数，C错误；步骤是将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后可得到X细菌的单个菌落，但也可能有其他的菌落，D错误。答案B11.微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作中错误的是()煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢接种操作要在酒精灯火焰附近进行无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂
12、和染料不需要灭菌A. B. C. D.解析无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中的杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能进行灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。故操作错误。答案D12.(多选)下图中甲是涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。下列叙述中正确的是()A.甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液B.对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不是由
13、单一的细胞或孢子繁殖而成C.乙中培养皿中所得的菌落都符合要求D.乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端解析灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确。稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确。平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误。连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成，D正确。答案ABD二、非选择题13.(2015泰州二模)1963年诺和诺德公司向洗涤剂中加入碱性蛋白酶，推出了第一款加酶洗衣粉。
14、碱性蛋白酶一般利用枯草芽孢杆菌生产。图甲、乙为某科研小组对碱性蛋白酶相关性质进行测试的结果。图丙、丁为两种常见的平板划线法：连续划线法和四区划线法，前者适用于纯化菌种较少的样品，后者适用于纯化菌种较多的样品。请回答下列问题：(1)由图甲、乙可知，碱性蛋白酶发挥作用的适宜条件为_。(2)图丁中依次进行四区划线，四区的面积要求为CDEF，F区面积最大的原因是_。每次划线后都要_接种环，注意F区划线不要与_(填字母)区相连。(3)某兴趣小组欲从土壤中分离枯草芽孢杆菌，宜选择图_所示的方法划线培养，分离得到的纯化单菌落属于_(填“种群”或“群落”)。(4)碱性蛋白酶是枯草芽孢杆菌生长后期向细胞外分泌的一种酶，与该酶合成有关的细胞器是_。若欲应用固定化技术提高该酶的利用率，减少产物中的杂质，则应采用_方法。解析(1)分析图甲可知，碱性蛋白酶的最适pH为10.2左右；分析图乙，碱性蛋白酶的最适温度为43 左右。(2)图丙和图丁为平板划线法纯化培养微生物，平板划线法最后的区域面积大有利于使该区
