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1、一、拟南芥播种 种子装入dorf管内，20l种子加1ml 75% 乙醇消毒1分钟； 吸去乙醇，加入1ml 50%次氯酸钠：50%无菌水：0.05%吐温（or 5%漂白粉），震荡洗涤15-20分钟； 稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠或漂白粉，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）； 将种子用接种环均匀铺于MS培养基上，用封口膜封口，放入4冰箱内冷处理2-3天（春化）。 MS培养基的用量：直径为9cm的培养皿用25ml，直径为6cm的培养皿用12.5ml。二、MS固体培养基制备1培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进
2、行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素(母液，20)mgL NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl22H2O 8 800 MgSO47H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素(母液，200) mgL KI 166 H3BO3 1 240 MnSO44H2O 4 460 ZnSO47H2O 1 720 Na2MoO42H2O 50 CuS
3、O45H2O 5 CoCl26H2O 5 铁盐(母液，200) mgL FeSO47H2O 5 560 Na2-EDTA2H2O 7 460 有机成分(母液，200) mgL A 肌醇 20 000 B 烟酸 100 盐酸吡哆醇(维生素B6)100 盐酸硫胺素(维生素B1)100 甘氨酸 400 上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液、母液及母液的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液的配制方法是：将称好的FeSO47H2O和Na2-EDTA2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，
4、然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。2配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液为50 mL，母液、A和B各5 mL。3溶化琼脂4调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸(5.47.0)测培养基的pH，一直到培养基的pH为5.8为止(培养基的pH必须严格控制在5.8，因高温灭菌时pH会下降，所以灭菌前通常pH配成6.2左右)。5.培养基的分装6高压灭菌三、拟南芥的种植1人工土配制 18份蛭石，6份黑土和1份珍珠岩混合均匀，分装于塑料灭菌袋内，扎好口，于9
5、8 kPa、121.3 下，灭菌40 min。冷却后备用。 有时也用两种土，即上层用不含黑土的人工土，下层用上面所讲的土。我估计原因可能有二：一是黑土容易生霉；二是黑土较难完全粉碎，较大的块状土不便于移栽。2PNS营养液：每升含 5ml 1M KNO3， 2ml 1M Ca(NO3)24H2O， 2ml 1M MgSO47H2O， 2.5ml 20mMFe.EDTA， 2.5ml 1M磷酸缓冲液（pH5.5）， 1ml 微量元素 。注意：营养液用煮沸冷却后的凉开水配置。PNS营养液母液配方： 1MKNO3101.1g 1MCa(NO3)24H2O236.15 g 1MMgSO47H2O，246
6、.48 g 20mMFe.EDTA： FeSO45.57g EDTA7.45g注意先各自配成溶液，再混合。1M磷酸缓冲液（pH5.5）： 磷酸二氢钾130.4g 磷酸氢二钾9.12g微量元素 硼酸0.434g 硫酸锰（MnSO4 H2O） 1.7626g CuSO4H2O0.0798g ZnSO47H2O0.172g NaMoO42H2O 0.0432g NaCl 0.585g CoCl6H2O0.00129g以上母液均配至1L种子春化A 取适量种子置于标记好的1.5ml离心管中，加入1 ml 70乙醇轻微振荡1 minB去乙醇，加入1 ml体积分数为10的NaClO (次氯酸钠), 消毒51
7、0 min；C吸去NaClO, 用无菌水冲洗种子5次后, 加入600l无菌水；D用1ml移液枪将水连同种子吸起，均匀铺于MS平板，每皿60100粒种子；E吸去并风干培养基表面多余的水分。F加盖，封口，4冰箱放置23 d，春化使种子萌发同步化。土壤培养从春化算起，平板上培养714 d，当幼苗具4片真叶时转入土壤(1株/盘)进行土培。加盖保鲜膜1 d，及时浇水。培养条件温度 ：2022；湿度 ：70左右；光照强度：100120 molm-2sec-1；在长日照条件下（16h光照，8h黑暗）培养。不同光质处理时，各种光质相应光强分别为，蓝光（BL）：20 mol.m-2.s-1；红光（Rc）：20 mol.m-2.s-1；远红外光（FRc）：1.8 mol.m-2.s-1，其余条件同前。
