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1、ANYANG INSTITUTE OF TECHNOLOGY本 科 毕 业 论 文文心兰高效快繁新技术体系研究The Study on New Technology Systerm of Efficient Micropropagation of Oncidium Lexuosum 学院名称： 生物与食品工程学院 专业班级： 2009级生物技术1班 学生姓名： 学 号： 200906060070 指导教师姓名： 指导教师职称： 讲 师 2013 年 5 月目 录中文摘要、关键词I英文摘要、关键词引 言1第1章 绪论3第2章 材料与方法72.1 无菌培养体系的建立72.1.1 外植体选择72.1
2、.2 培养基的配制72.1.3 外植体的消毒与接种72.1.4 诱导培养82.2 继代增殖82.3 生根培养82.4 移栽8第3章 结果与分析83.1 不同灭菌处理对文心兰侧芽培养的影响93.2不同培养基对文心兰侧芽的诱导情况103.3继代培养的结果分析103.4不同培养基对壮苗生根的影响113.5不同炼苗基质对植株生长情况的影响123.6讨论12结 论13参考文献17致 谢19文心兰高效快繁新技术体系研究摘要：以文心兰杂交品种为材料，应用组织培养技术，对适合原球茎增殖、分化的培养基、培养方式进行了系统的研究，建立了一套经济、高效的快繁技术体系。对培养基激素进行筛选的结果表明：利于原球茎诱导增
3、殖的培养基为1/2 MS+5.0 mgL-1 BA+0.5 mgL-1 NAA,利于不定芽增殖的培养基为1/2 MS+2.0 mgL-1 BA+0.1 mgL-1 NAA，利于生根的培养基为1/2 MS+0.5 mgL-1 NAA，可提高诱导成苗率和繁殖速率，降低成本；试管苗栽培基质以兰基石+小树皮(1:1)为佳。关键词：文心兰 不定芽增殖 快速繁殖 组织培养The Study on New Technology Systerm of Efficient Micropropagation of Oncidium Lexuosum Absract: In Oncidium hybrid vari
4、eties of Star Wars, dhaka Java for materials, application of tissue culture technology, suitable for differentiation of protocorm proliferation medium cultivation way has carried on the systematic study, set up a economic and efficient system of rapid propagation technology for medium hormone screen
5、ing results show that for the original bulb induce proliferation of the culture medium for 1/2 MS mgL-1 BA + 0.5 mgL-1 NAA, for adventitious bud multiplication culture medium for 1/2 MS +0.5 mgL-1 BA + 0.1 mgL-1 NAA, conducive to take root in the culture medium for 1/2MS + 0.5 mgL-1 NAA, can improve
6、 the induction rate and reproduction rate, reduce cost; Test-tube seedling cultivation substrate with orchid cornerstone + small bark (1:1) is preferred.Key words: Oncidium Lexuosum; Propagation; Intermidate Propagation;Tissue CultureI引 言 文心兰(Oncidium Lexuosum )大多数为气生种，有部分半气生种和地生种。文心兰的花小而繁多，每支花穗着生15
7、100朵小花，颜色艳丽多彩，形态变化多样，因其形似舞女，故又称舞女兰。采用传统的分株繁殖，一株文心兰一年仅繁殖23个芽，繁殖系数很低；繁殖速度慢、周期长，尤其对国外新引进的优良品种，难以迅速占领市场、满足需求。通过组织培养技术的应用，可以加快繁殖速度，进行工业化生产，而国内对于文心兰的组织培养研究很少。我们于2000年以新引进的文心兰优良品种为材料，用组织培养和快速繁殖技术，对文心兰茎尖进行了培养，并用具有休眠芽的花梗节段作为外植体，成功诱导形成了再生植株，进行大规模工厂化育苗的系统研究，提高了诱导成苗率和繁殖率，使本项技术在市场中更具竞争能力和推广价值，并繁育出大量种苗，为工厂化育苗提供了科
8、学依据与参考1。 本试验旨在探讨文心兰组培快繁过程中各种因素对其类原球茎诱导、幼苗分化及壮苗和生根的影响，以寻找较合适组培快繁的方法，为快速繁殖及大规模工厂化生产提供依据。世界上感染兰花的病毒种类20种以上，其中最常见的有烟草花叶病毒兰花株(Orchid strain of TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)、建兰花叶病毒(CyMV)、齿兰环斑病毒(ORSV)等。受感染的兰花多产生坏死病斑，导致叶片杂斑、变黄，花朵变小、畸形，产量和质量下降,失去商品价值1。防止病毒病危害是发展热带兰花生产的重要措施之一。利用茎尖培养是目前植物脱病毒的主要方法之一。因此，我们对文心兰茎尖进行脱毒处理，并探讨了文心
9、兰脱毒种苗大规模快速无性繁殖的技术2。利用组织培养技术进行文心兰种苗的快速繁殖是一条行之有效的途径，有关的报道大多集中在通过原球茎的增殖及苗的分化来达到快速繁殖的目的，具有繁殖系数高等特点，但原球茎途径使诱导起始材料经历从脱分化到再分化的过程，而且诱导原球茎发生的起始培养基中激素浓度普遍较高，后代再生植株中有较高的变异率3。因此通过丛生芽途径快速繁殖，具有快速、稳定的特点，且不需要进行分化培养，降低了生产成本，这在蝴蝶兰的快速繁殖上已获得成功，文心兰通过丛生芽途径快速繁殖的研究未见有详细报道。第1章 绪论文心兰(Oncidium Lexuosum )原产墨西哥、西印度洋群岛、巴西等地，全球有原
10、生种400 多个。 文心兰花小而繁多，颜色艳丽多彩，形态变化多样，花朵连续不断开放，可持续 13个月，是上等的盆栽观赏和切花材料。文心兰多采用分株或播种等方法进行繁殖，但分株繁殖系数低，播种的后代性状不一致。前人有关文心兰组织培养的报道较多，本试验是以文心兰侧芽为外植体，对文心兰离体培养和试管苗的移栽管理技术进行了初步研究，为文心兰的快速繁殖和规模化生产提供参考。文心兰种子极小，胚未分化，贮藏养分少，自然条件下很难发芽。因此，文心兰一般不用种子繁殖，而常以分株繁殖，但分株繁殖速度慢。组织培养逐渐成为目前最主要的繁殖方法，相关研究包括以下几个关键部分：外植体的选择、外植体的消毒、原球茎诱导培养、
11、原球茎继代增殖培养、壮苗生根培养及外界条件。 外植体的大小以及取材部位、时间等直接影响月季组培的效果，选择合适的外植体是月季组培成功的重要保证。外植体很小时，有利于培养脱毒的植株。对文心兰坏疽环斑病毒可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的，如果单纯为了快速繁殖，可用大的茎尖或茎段进行离体培养，这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。一般说外植体愈大，成活率愈高，成苗时间愈短。茎尖在110mm 长短时，对形成多芽苗最有效4，不但多芽苗所占百分率高，而且每个茎段的侧枝数也比较多。外植体的大小同时影响外植体自身的发育，但对某几种文心兰进行微繁试验时发现外植体的大小对茎的增殖、叶片数目没有影响，其他一些研究
12、者对只有个茎节的“SetPromise”进行组织培养中得到了类似的结论。外植体的取材部位对芽的萌发也有影响，“Gold Glow”和“Improved fire”5月季的侧芽如果在不同激素的培养基上进行组培，可发现在枝条顶部和基部的芽发育慢，而枝条中部的芽发育快。在研究中发现靠近外植体顶端的芽较其他部位芽的发育慢，在茎尖脱毒培养时，由嫩茎的顶芽得到的外植体成活率高于腋芽。在实际工作中由于顶芽数量少，故文心兰的组培依旧常常使用腋芽作为外植体，这时一般需要进行茎切除顶芽（摘心）以打破顶端优势、促使腋芽健壮生长，以促进嫩茎的增殖。此外，外植体的取材时间及培养所需时间对文心兰嫩茎的发育和增殖也有影响。
13、对于“Bulgarian rose”而言，选取外植体的最佳时间是冬季13月，而“Improved fire”月季的培养时间以28d30继代一次较好，超过28d，茎的数目就不再增加了6。组织培养的植物生长调节剂主要有细胞分裂素（如BA、ZT、ZR、2iP、ipA和TDZ等）、生长素（如NAA、IAA和IBA）和赤霉素（GA3）3种7。培养基成分用于文心兰的基本培养基种类很多，如B5、N6、WPM和MS培养基等。众多培养基中以MS培养基的效果为最好,广泛用于文心兰的离体快速繁殖中。培养基的培养成分（主要是各类无机盐浓度）及物理性能（pH值、糖分以及固化支持物）会影响文心兰的组培效果，培养条件等对文
14、心兰繁殖快慢也有一定影响8。原球茎诱导与增殖是组培的一个重要环节，也是目前研究最多的一部分，主要集中于培养基不同成分及添加不同外源激素方面的研究。研究发现，在MS和1/2 MS培养基内，文心兰原球茎发育比较快，诱导其芽和根发生的植物生长调节剂和浓度是不同的，最佳芽诱导培养基是MS+4 mgL-1 6-BA+0.5 mgL-1 NAA + 3%蔗糖，最佳根诱导培养基为1/2 MS + 0.5 mgL-1 6-BA+2%蔗糖。蜜糖文心兰叶片在20 gL-1蔗糖、85 mgL-1 NaH2PO4和3 mgL-1激动素下培养，效果最佳，MS培养基内加入1.0 mgL-1谷氨酸，PLB形成和扩增倍数分别是对照的3和7倍9。生长调节剂浓度对胚发育有影响，但不同生长调节剂影响不一样，一般来说，生长素抑制胚形成，而细胞分裂素促进其芽形成。不同碳源和有机添加物对原球茎增殖也有一定的作用，有研究结果显示，蔗糖和蛋白胨对原球茎扩增效果显著。同时香蕉汁有促进PLB增殖的作用；植物高活性单纯制剂+生长素对不定芽增殖的促进效应显著。植物生长调节剂方面，外源2,4-D结合TDZ可以逐步改善粒状和黄色愈伤组织，使其紧密10。激动素（0.5、2 mgL-1）和玉米素（0.5 mgL-1）对于诱导“南茜”文心兰根产生愈组织效果较好6-BA（2.04.0 mgL-1）最适于文心兰试管苗增殖，最大增殖系数
