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1、岛津液相色谱维护培训,岛津国际贸易（上海）有限公司,1969GPC系统开发1972LC-1（LC-830）销售与DuPont签订许可合同后制造销售1978LC-3A系列销售CDQR方式的单柱塞型送液单元为特征1981LC-4A系列销售内置微型计算机的全自动HPLC1982LC-5A系列销售世界上首创的微量型LC对应HPLC1984LC-6A系列销售世界上最早的积木型HPLC、现在的HPLC的前身1991LC-10A系列销售世界上最早采用微冲程送液单元和减低噪音技术的检测器1997LC-VP系列销售采用有效性支持功能的积木型HPLCLC-2010销售追求性能和操作性更加完善的一体型HPLC200
2、4LC-20AProminence销售为分析实验室带来革新的HPLC,岛津HPLC的历史,Startedin1969,LC-10Avp系列,目前市场在用机型,LC-2010系列,LC-15C(Essentia),LC-30ANexera(UHPLC),第一部分液相色谱故障排除经验液相色谱常见问题分析,液相色谱简易流程图,输液泵,进样器,色谱柱,柱温箱,检测器,溶剂,数据处理,废液,1.（简单）等度系统,储液瓶,脱气机,泵单元,手动进样器,色谱柱,检测器,废液瓶,1234567,2.低压梯度系统,123456789,3.高压梯度系统,12345678,液相色谱故障排除经验,故障的确定至少要重复出
3、现两次以上初步判断故障引起的原因方法或硬件由经验或平时的积累确定故障原因平时做好观察和记录当不能确认故障原因时采用排除法逐一考察可能引起故障的因素确定故障能否自行处理不要贸然拆卸不熟悉的部件,常见故障因素,仪器环境：实验室的温度、湿度、酸度等实验室震动、灰尘等问题电源及地线问题使用条件：流动相（pH值、均匀度、气泡等）样品（样品分解、氧化、溶解性、样品溶剂等）色谱柱（污染、堵塞、塌陷等）硬件问题：输液泵进样器检测器,日常保养,做好平常的保养可以有效的降低故障的发生率做好平常的保养可以延长仪器的使用寿命日常保养内容保证仪器的使用环境（经常清洁仪器，尤其是灰尘）泵的保养（使用缓冲盐时要清洗柱塞，水
4、和盐不要长期保存在泵里）进样器要经常清洗，避免污染物吸附或堵塞管路尽量进行样品前处理色谱柱要定期清洗，保证柱效及使用寿命，增加预柱。系统中不要长期保存水和盐，长时间不用时应将仪器所有部分全部更换为70以上的甲醇，避免细菌的滋生及盐的析出。,流动相选择原则采用“HPLC”级溶剂避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂对试样有适宜的溶解度溶剂粘度要小与检测器相匹配,日常使用注意,有机溶剂的等级HPLC级优级纯分析纯,都经过蒸馏和0.45u的过滤(除纤维毛,未溶解的机械颗粒）,优级纯的纯度比分析纯大,但里面含有防腐剂和抗氧化剂,HPLC级经过0.2u的过滤,且除去有紫外吸收的杂质,微量分析、梯度洗
5、脱,日常使用注意,水的等级纯化水蒸馏水去离子水,波长(nm),纯化水,去离子水,因为不纯物的存在，去离子水的吸光率较高,纯化水中去除了无机和有机污染物,吸光率,日常使用注意,缓冲液的选择1.确定最佳分离状态时的流动相pH2.选择具有与流动相pH相近的pKa(电离常数)的缓冲液.(一般为pKa1,即使浓度稀也具有较强的缓冲能力）3.确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）,常用缓冲液pKa(电离常数),日常使用注意,缓冲液的使用,1.使用前必须过滤2.使用后一定要进行清洗，以免造成腐蚀、磨损、阻塞.(用含5%甲醇的水溶液冲洗30min（1m
6、l/min），再用甲醇冲洗30min)3.用纯水冲洗泵头清洗管路4.易受到细菌和霉菌的影响,不能直接用有机溶剂冲洗缓冲盐溶液,日常使用注意,流动相的更换,不互溶的流动相不能直接更换,缓冲盐不能直接用有机溶剂更换,水,正己烷,异丙醇,缓冲盐,有机溶剂,水,日常使用注意,过滤：0.45um或更小孔径滤膜目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液时。滤膜类型：聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。尼龙66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸,不适用于二甲基甲酰胺。再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，同样适用于水
7、溶性样品和有机溶剂,溶剂和样品前处理,日常使用注意,液相色谱常见问题,压力异常（偏高、波动）漏液保留时间漂移基线问题（漂移、噪声）峰形异常,柱前压力,柱前压力是液相色谱系统中最重要的指标，要经常关注压力的变化。保留时间的变化经常是与压力问题相关的。不同溶剂即使在相同流速和温度的情况下压力也是不同的。记下仪器正常状态时，在固定条件下（流动相、流速、温度等）的压力显示值。,压力高时,首先要确认是色谱柱或保护柱堵塞还是系统堵塞色谱柱堵时，确认可能造成堵塞的样品的性质，相应选择合适的清洗溶剂。系统堵塞，首先应确认是哪一部份堵塞，依据情况由后向前进行排除。,容易发生堵塞的部件,保护柱及色谱柱线路过滤器混
8、合器过滤组件管路连接处进样器检测器流通池,压力低时,如果压力为零：泵头中没有液体，充满气泡单向阀完全堵死柱塞杆折断压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力)如果有压力但是压力比正常时低：漏液单向阀堵塞,压力波动,压力在短时间内剧烈波动,泵头中有气泡单向阀脏柱塞密封圈漏液其它部件漏液,可能漏液的部件,泵：柱塞密封圈,排液阀手动进样器：转子密封圈磨损检测器：流通池窗口（垫片损坏、透镜破碎）接头处漏液：接头松动(脏，磨损，部件不匹配）,保留时间不稳定,吸滤头脏泵输液不正常（压力波动、气泡等）流动相组分变化流动相缓冲能力不够色谱柱平衡时间不够柱温的变化柱子问题,基线噪音大,流动相污染、变质或由低品质溶
9、剂配成漏液流动相、泵、检测器流通池内有气泡流动相各溶剂不相溶或混和不均匀检测池能量不足流通池被污染温度影响（检测器和柱温差别太大）其他电子设备的影响或电源、地线等,基线漂移,流动相污染，变质或由低品质溶剂配成流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂)温度波动系统平衡时间不够流通池被污染或有气泡流通池窗口破裂,峰形问题,死体积太大柱子被污染或堵塞色谱柱塌陷色谱柱化学或次级保留（硅羟基效应或重金属污染）流动相缓冲不足或不合适样品溶剂选择不当，与流动相之间极性差异太大样品过载（浓度或体积）柱温过低,鬼峰,流动相被污染进样阀残余峰样品中未知物色谱柱中的污染物,第二部分硬件基础知识容易出故障的部件及常见故
10、障的排除,液相系统维护流程图,色谱柱,一、输液泵,管线选择,材料不锈钢TeflonPEEK(聚醚醚酮)尺寸0.1mmI.D.x1.6mmO.D.0.3mmI.D.x1.6mmO.D.0.5mmI.D.x1.6mmO.D.0.8mmI.D.x1.6mmO.D.,不锈钢(可用于所有连接)能承受几千kgf/cm2压力酸性或高浓度盐环境中易腐蚀(尤其在pH小于2时)PEEK(可用于所有连接)能承受高达250kgf/cm2压力可在整个PH范围(pH1-14)内使用不适用于高溶解性溶剂如氯仿等Teflon(用于柱后阻尼管、反应管和排液管)化学惰性大能承受5kgf/cm2压力,接头,不锈钢接头/垫圈主要用于
11、输液泵、进样器的连接能承受40Mpa以上压力一旦固定，垫圈不可再动PEEK接头主要用于色谱柱、检测器的连接易于安装能承受250kgf/cm2压力容易产生死体积UHPLC接头由3部分组成,用于柱后检测器前,耐高压130Mpa,拆装方便,不锈钢接头,垫圈,PEEK接头,死体积,死体积可能会引起分离度变差和重现性变差等问题.,管线,公螺母,死体积,正确的连接,错误的连接,吸滤头,材料：不锈钢(或陶瓷)烧结，孔径10um故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用异丙醇（或5稀硝酸），超声波清洗，再用蒸馏水清洗.(注意超声时间),LC-20A的吸滤头部件号：228-45707-91,岛津早期LC的吸滤
12、头部件号：228-21984-01,泵工作示意图,流动相入口,流动相出口,LC-20AT串联式柱塞往复泵,LC-20AD并联式微体积柱塞往复泵,柱塞泵的基本结构,单向阀,单向阀,单向阀,LC-20AT,LC-20AT,选件安装托盘,压力传感器,泵头,泵头支架,主入口单向阀,副入口单向阀,LC-20AD,选件安装托盘,出口单向阀,入口单向阀,压力传感器,泵头,泵头支架,流动相入口,维护部件,单向阀,单向阀结构,球座,单向阀工作原理,单向阀结构,请不要分解阀心A和阀心B重新组装后性能不被保证，输液可能不稳定,注意：,LC20AT主入口阀部件号:228-45704-92,LC20AD入口阀LC20A
13、T副入口阀部件号:228-45704-91,LC20AD出口阀部件号:228-45705-91,单向阀,LC10ADvp出口阀LC10ATvp出口阀部件号:228-34976-91,LC10ADvp入口阀部件号:228-39093-92,LC10ATvp入口阀部件号:228-32166-91,LC-2010出口阀部件号:228-37147-92,LC-2010入口阀部件号:228-37149-91,单向阀清洗,故障：宝石球或球座受污受损导致密封不好或粘连表现：系统压力波动大或无压力措施：打开排液阀，以异丙醇为流动相输液拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗用仪器配的带管子的注射器进行冲洗,注意：
14、超声清洗时开口端向上放置。,柱塞密封圈,柱塞密封圈LC-20ADLC-20ABLC-10ADvpLC-2010部件号228-35146,柱塞密封圈LC-20ATLC-10ATvp部件号：228-35145,取下和安装柱塞密封圈工具,柱塞密封圈的更换,故障：密封圈磨损导致密封不良现象：系统压力波动大或漏液措施：更换密封圈注意点：1、拆卸泵头前，柱塞杆复位（PSET）2、新密封圈用异丙醇浸泡15min后再安装,柱塞杆,柱塞杆LC-10ADvp用部件号：228-35281-91,柱塞杆LC-10ATvp用部件号：228-35009-92,柱塞杆LC-20AD/LC-20AB用部件号：228-3528
15、1-95,柱塞杆LC-20AT用部件号：228-35009-93,柱塞杆LC-2010用部件号：228-35281-93,柱塞杆LC-2010HT用部件号：228-35281-95,柱塞杆更换,更换柱塞密封圈后仍然频繁漏液时柱塞密封圈使用寿命短时柱塞杆损伤时,柱塞隔膜,更换柱塞时，应同时更换隔膜。隔膜损坏导致泵头后部漏液时，应更换隔膜。注意：只有D系列泵有隔膜，T系列泵由于设计不同，没有隔膜。,隔膜LC-20AD/LC-20AB/LC-10ADvp/LC2010用部件号：228-32784-91,线路过滤器,故障：堵塞现象：系统压力偏高措施：异丙醇（或5稀硝酸），超声波清洗判断依据：关闭排液阀
16、，断开出口管路，设定流速1mL/min，若压0.3MPa，则堵塞。,线路过滤器（10Avp、20A）部件号：228-48607-91,线路过滤器组件部件号：228-35871-91(LC-2010)228-35871-96(LC-2010HT),线路过滤器安装螺母（10Avp、20A）部件号：228-39082-91,过滤器的更换,旧过滤器的取出,新过滤器的安装,排液阀漏液,故障：排液阀垫圈损伤或密封不良现象：打开排液阀进行排气时，从装有排液阀的螺口处漏液措施：排液阀手柄按逆时针方向旋转取下确认垫圈表面有否损伤。有损伤，进行更换；附有脏物，擦洗掉，再确认。,LC-20A系列泵部件号：228-45574-91,LC-10Avp系列泵部件号：670-11518,排
