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1、2020/7/3,任立群,1,第八章消化系统疾病动物模型,Theanimalmodelsofdigestivessystemdiseases,2020/7/3,任立群,2,第一节急性胃炎动物模型,2020/7/3,任立群,3,体重300g左右雄性Wistar大鼠。,一、酸制剂诱发急性胃炎模型,急性胃炎动物模型,实验动物,大鼠禁食24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：（1）水杨酸制剂（如20mmol/L阿司匹林或水杨酸溶液）按100mg/kg体重灌胃；（2）10mmol/L的醋酸；（3）不同浓度的盐酸（1，10，100mmol/L）；（4）同种动物胆汁；（5）2mmol/L的牛磺胆酸；（6
2、）15%的乙醇；（2）-（6）可单独或几种合用（2ml左右）灌胃；,急性胃炎动物模型,操作方法,2020/7/3,任立群,5,4h后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变。,胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层内见中性粒细胞浸润。,急性胃炎动物模型,结果,病变,2020/7/3,任立群,6,碱性肠液倒流入胃，刺激胃黏膜可引起炎症，即胆汁反流性胃炎。常见于原发性或继发性幽门功能紊乱或胃切除术后。本法取上部小肠的碱性肠液注入已结扎幽门的同种大鼠胃内，使之对胃黏膜产生持续刺激，形成胃炎。,二、胆汁反流性胃炎模型,急性胃炎动物模型,造模原理,2020/7/3,任立群,7,体重180220g左右雄性
3、Wistar大鼠。,急性胃炎动物模型,实验动物,2020/7/3,任立群,8,1.制备上部小肠液；2.大鼠禁食不禁水24h，灌胃给予受试药3h后，开腹结扎幽门，向胃内注入小肠液，2ml/只（正常对照组注入2ml生理盐水）。缝合腹壁，腹腔注射阿托品5mg/kg体重，以抑制胃液分泌，利于胃黏膜损伤模型的形成；3.4h后腹腔注射戊巴比妥钠处死大鼠，开腹，结扎贲门，取出胃，沿胃大弯剪开。用滤纸吸干表面水分，立即称量胃重，以胃湿重/体重之比（胃系数）表示胃水肿程度。4.肉眼观察并计数整个胃黏膜出血点数，作为损伤指数。,急性胃炎动物模型,操作方法,2020/7/3,任立群,9,模型组动物胃系数和损伤指数明
4、显增加，肉眼观察模型组胃黏膜充血、水肿，皱襞减少，颜色暗红，并有大量散在出血点。,急性胃炎动物模型,结果,2020/7/3,任立群,11,第二节慢性胃炎动物模型,2020/7/3,任立群,12,体重200250g雄性Wistar大鼠。,一、胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型,实验动物,用人胆汁与甘油（v/v,1:1）的混合液灌胃，每周1次，每次4ml，连续灌胃10周后处死大鼠，切除全胃，用10%甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色和刀豆蛋白A异染，进行组织病理学检查，重点观察幽门腺和胃底腺的变化。,操作方法,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,13,胃腺管全长（从黏膜表面到腺体底部的距离）
5、、腺管圆柱部（从黏膜表面到刀豆蛋白A异染阳性部位的上缘）及颈黏液细胞（又称副细胞、刀豆蛋白异染阳性部位的长度）均明显增长，固有腺变小，这些改变以胃底部为显著，其程度与所用胆汁的量呈量效关系。,结果,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,14,慢性胃炎模型,二、同种或自身免疫法慢性胃炎模型,操作方法,用同种或自身的胃液（按45ml/kg体重取胃液浓缩50倍），或取胃粘膜的生理盐水匀浆与弗氏佐剂以1:1的比例制成乳剂，皮下注射进行免疫。隔1530d再注射1次，可诱发胃粘膜炎症细胞浸润和萎缩性病变。,结果,同“胆汁或牛磺胆酸灌胃法慢性胃炎模型”。,2020/7/3,任立群,15,慢性萎缩性胃炎模型
6、,2020/7/3,任立群,16,三、大鼠慢性萎缩性胃炎模型,病因:酗酒、用药不当、饮食习惯不良、幽门螺杆菌感染、自身免疫。造模评价：组织病理学是评价造模成功的最主要指标，主要观察和测量胃黏膜厚度、粘膜肌层厚度、腺体数量、壁细胞数量、固有层炎细胞浸润程度和肠化生发生率等。,2020/7/3,任立群,17,造模方法,综合法一胆汁（去氧胆酸钠）+热水+主动免疫综合法二去氧胆酸钠+热糊+主动免疫综合法三去氧胆酸钠+酒精+氨水+吲哚美锌氨水单因素法,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,18,综合法一,采用胆汁或其主要成分去氧胆酸钠、热水、免疫损伤等复合刺激因素对胃黏膜进行较长时间的刺激，造成胃黏膜
7、慢性损伤，胃黏膜营养代谢障碍，以致胃黏膜萎缩变薄，腺体减少，炎症细胞浸润和结缔组织增生而形成慢性萎缩性胃炎。,造模机制,慢性胃炎模型,实验动物,体重200250g雄性Wistar大鼠。,2020/7/3,任立群,19,主动免疫:皮下注射佐剂抗原0.3ml，一个月后重复注射一次。（同种大鼠胃黏膜生理盐水组织匀浆与弗氏佐剂1：1乳液）胆汁灌胃:在进行第一次免疫的同时，采用无化脓性炎症病人的引流胆汁，按12.5ml/kg体重，每日一次，连续70d。热水灌胃:在胆汁灌胃的同日（间隔5h），灌胃给予50热水12.5ml/kg体重，每日1次，连续70d。,操作方法,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,
8、20,2020/7/3,组织病理学检查,药物疗效观察,胃黏膜变薄，胃固有腺体减少，粘膜肌层增厚。,阳性对照药可用维酶素，0.5mg/kg体重，或三九胃泰，24g/kg体重，灌胃给予。,结果,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,21,注意事项,每日灌胃2次，时间长，要求灌胃操作技术熟练，避免不必要的损失。,注意饲养、卫生环境。,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,22,综合法二,应用去氧胆酸钠、热糊灌胃和免疫损伤的方法造成胃黏膜损伤，以致胃黏膜营养代谢障碍，最后形成慢性萎缩性胃炎。,造模机制,慢性胃炎模型,实验动物,体重180220g雄性Wistar大鼠。,2020/7/3,任立群,23
9、,饮用水:以0.2%去氧胆酸钠作为饮用水，连续90d。主动免疫:第1周和第5周，皮下注射佐剂抗原（同上）0.3ml。热糊灌胃:每隔1d灌胃给予55热糊10ml/kg体重，连续90d。,操作方法,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,24,胃酸、胃蛋白酶测定,检测指标,组织病理学检查,炎症分级0级：无炎症1级：在粘膜表层或底部有少量散在的白细胞2级：在粘膜各部分均有较多的炎细胞3级：粘膜内有聚集成堆的白细胞,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,25,粘膜病变以胃窦部及胃体部明显，表现为粘膜变薄，粘膜肌层增厚，炎细胞浸润及胃泌酸功能下降。,结果,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,26,
10、注意事项,同“综合法一”；,因去氧胆酸钠成本高，可以猪胆汁代替；,阳性对照药可选维酶素，0.250.5g/kg体重。,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,27,综合法三,采用去氧胆酸钠、酒精、氨水和吲哚美辛等因素对胃黏膜进行较长时间的刺激，造成胃黏膜慢性损伤，形成慢性萎缩性胃炎。,造模机制,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,28,2020/7/3,去氧胆酸钠,模拟胃反流情况，胆酸可破坏胃黏膜细胞的脂蛋白层，引起粘膜炎症。,各因素之作用,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,29,体重180220gWistar大鼠。,实验动物,慢性胃炎模型,0.5%去氧胆酸钠加热至55，每日8时灌胃
11、,60%酒精每周二、五8时空腹灌胃2ml,A因素,症状,B因素,造模4种因素,0.1%氨水作为饮料自由饮用,1%羧甲基纤维素钠配制的0.5mg/kg吲哚美辛混悬液每日8：30灌胃2ml,C因素,D因素,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,31,对大鼠施加上述四种因素。12周后，处死动物。过碘酸-希夫（PAS）染色,操作方法,注意事项,氨水要新鲜配制。,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,32,氨水单因素法,氨水是一种胃黏膜屏障破坏剂，大鼠长时间饮用低浓度氨水，对胃黏膜造成慢性损伤，从而破坏胃黏膜屏障及胃黏膜防御功能，使胃黏膜营养代谢障碍，导致胃粘膜萎缩。,造模机制,慢性胃炎模型,202
12、0/7/3,任立群,33,体重200220gWistar大鼠。,实验动物,慢性胃炎模型,操作方法,饮以0.02%氨水，同时每隔7d灌胃给予1%氨水1次，10ml/kg体重，连续90d，或每2d定时给予0.04%氨水1ml/100g体重1次，连续2周。,2020/7/3,任立群,34,34/20,实验结束后，取胃，甲醛固定3d后，自胃体前、后壁及小弯部取材，常规石蜡切片，HE染色及PAS染色。同时测定下列指标：,检测指标,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,35,检测指标,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,36,检测指标,乌拉坦腹腔注射麻醉下开腹，在腺胃部开一个小口，将pH计玻璃电极插
13、入胃内测量胃体部及幽门部胃黏膜表面pH值。,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,37,37/20,结果,胃体部胃黏膜腺体总长度、腺管腺部长度、表面上皮厚度均明显减少；胃黏膜PAS染色阳性层显著变薄；胃黏膜壁细胞数明显减少；胃黏膜表面pH值明显升高。,慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,38,注意事项,大鼠以成年雄性大鼠为佳，幼龄大鼠胃黏膜修复能力强，造模后其胃黏膜萎缩的程度较成年鼠轻。,本法胃黏膜萎缩的程度较综合法轻，可加大氨水浓度和延长造模时间以加重病变。,氨水具有挥发性，应隔日配制以保证其浓度。,表面上皮细胞及其下的腺上皮能分泌中性糖蛋白，PAS反应阳性，颈粘液细胞亦呈阳性反应。,
14、慢性胃炎模型,2020/7/3,任立群,39,第三节急性胃溃疡动物模型,2020/7/3,任立群,40,溃疡病的病因,致溃疡因素:胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药不合理应用、幽门螺杆菌感染等。防御因素：粘液-碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因子和内生性前列腺素等。溃疡的形成主要由于防御因素和致溃疡因素的平衡失调所致。,2020/7/3,任立群,41,应激法幽门结扎法药物法醋酸法,常用的方法,急性胃溃疡动物模型,在抗溃疡药物药效学试验中，应激法、幽门结扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血平法和乙醇法可任选其一。,乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保
15、泰松,2020/7/3,任立群,42,应激法幽门结扎法药物法醋酸法,常用的方法,急性胃溃疡动物模型,治疗性给药醋酸法复制的模型预防性给药其他模型,乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松,2020/7/3,任立群,43,应激法幽门结扎法药物法醋酸法,常用的方法,急性胃溃疡动物模型,阳性对照药：H2受体拮抗药西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等加强胃黏膜防御功能甘珀酸，果胶铋，硫糖铝,乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松,2020/7/3,任立群,44,研究抗胃溃疡药物,胃黏膜形态观察胃分泌试验胃黏膜血流量测量胃粘液测定抗炎镇痛试验抑制幽门螺杆菌试验等,2020/7/3
16、,任立群,45,一、应激性胃溃疡模型,应激刺激,血管收缩,胃运动亢进,副交感神经-垂体-肾上腺系统兴奋性,应激性溃疡,胃酸、胃蛋白酶和胃泌素分泌,胃黏膜缺血、缺氧和抵抗力,交感神经兴奋性,应激性胃溃疡模型,造模机制,2020/7/3,任立群,47,应激刺激有那些?,外伤休克感染过冷、过热心理创伤饥饿水浸束缚,应激性胃溃疡模型,2020/7/3,任立群,48,体重160180gWistar大鼠，雌雄不限。多用雌性。,大鼠固定钢板或束缚笼；恒温水浴装置。,应激性胃溃疡模型,实验动物,器材,2020/7/3,任立群,49,应激束缚笼,应激性胃溃疡模型,2020/7/3,任立群,50,禁食（不禁水）24h，醚麻，将动物固定(笼或固定器)。待其清醒后垂直浸于1820的恒温水浴槽中，水面浸至剑突水平。水浸泡7h后取出，处死动物，立即开腹检查。胃的固定及处理。,应激性胃溃疡模型,操作方法,2020/7/3,任立群,51,胃的固定及检查,2020/7/3,任立群,52,大鼠胃内、外面观,2020/7/3,任立群,53,禁食（不禁
