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1、 北京唯尚立德生物科技有限公司北京唯尚立德生物科技有限公司 www.vwww.v- - 010010- -62963369 62963369 ordervorderv- - Cas9 酶（酶（Cas9） 货号货号 规格规格 价格价格 #E025S 20U 800 元元 #E025L 100U 3200 元元 浓浓 度度 1U/ ul 储储 存存 -20 反应条件反应条件 37温育 应用应用 Cas9 /gRNA 特异位点体外剪切 DNA，如 plasmids、genomic DNA, PCR product 体外检测 gRNA 的剪切靶点 DNA 的效率 Cas9 蛋白结构与功能研究 用于体内
2、注射 概述概述 CRISPR/Cas 是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御，可特异剪切外源的病毒及 DNA 以对 抗入侵。 人工改造过的 Cas9/gRNA 系统通过 gRNA（short guide RNA）引导 Cas9 蛋白识别并剪切带有 gRNA 靶点的双链 DNA， 用于基因敲除和精确编辑 DNA 等操作。 重组表达的 Cas9 蛋白分别在 N 端和 C 端带有 NLS （入 核）序列。 来源来源 重组带有 NLS（入核）序列的 Cas9 蛋白 反应条件反应条件 1Buffer 20 mM HEPES，pH 7.5，150mM KCl，10 mM MgCl2，0.1
3、 mM EDTA，0.5 mM DTT，37温育。 质保声明质保声明 Cas9 经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。请使用前务必仔细阅读本手册。 单位定义单位定义 在 50 l 反应体系中， 37， gRNA 足量时， 1U 等于 1h 能将 1 ug 质粒或线性 DNA 完全酶切所需的 Cas9 蛋白量。 注意事项注意事项 1. Cas9 切割 dsDNA 效率与 gRNA 靶点序列有关，每个 gRNA 的效率都会不同。 2. 所用枪头管子等都必须是 RNase free 的，gRNA 可以适当多加，防止因为部分降解而降低酶切效率。 Cas9 体外酶切法检测体外酶切法检测 g
4、RNA 靶点效率实验步骤靶点效率实验步骤 1、 带有 gRNA 靶点的质粒或 PCR 扩增出的 DNA 片段，gRNA 靶点最好不位于 PCR 片段中央，这样将切割出两 条大小不同带便于判断。 2、 gRNA 靶点设计与体外转录准备见唯尚立德 Cas9/gRNA 质粒构建试剂盒。 3、 反应体系： dsDNA 200 nM gRNA（体外转录） 100 nM Cas9 0.5-1U 10XBuffer 2 ul ddH2O x ul Total 20ul 充分混合后， 37反应 1h， 65煮 5min, 跑琼 脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果 琼脂糖凝胶电泳检测分析酶切结果。 图.Cas9 酶切
5、靶点序列效率。 带有靶位点的 DNA 片段：680bp 酶切后条带：500bp+180bp 酶切率=切开条带/检测条带（按带的灰度计算） 北京唯尚立德生物科技有限公司北京唯尚立德生物科技有限公司 www.vwww.v- - 010010- -62963369 62963369 ordervorderv- - 使用限制使用限制 本试剂仅限用于科学研究。 储存与安全储存与安全 本品 4运输，储存于-20，有效期 12 个月。长期储存请置于-80。 本品采用蓝冰运输，蓝冰在使用前在-80冷冻至少 72 小时。实验证明，使用上述方法运输，即使到货时蓝冰已经融化，泡沫 塑料盒中的温度仍然能保持在 4或 4以下 24 小时。比较干冰运输的产品，其活性和稳定性无任何差异。产品纯化整个过程 都在 4进行，且其贮存液经过优化，对保持酶活的稳定性起到重要作用。产品中含有 50%甘油，可以使酶在-35下保持液态， 若使用干冰运输，酶将被冷冻，发生反复冻融可能会导致酶活性下降。
