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1、（生物科技行业）分子生物学试题及答案(整理版)分子生物学试题及答案壹、名词解释1cDNA和cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。2标准折叠单位：蛋白质二级结构单元螺旋和折叠通过各种连接多肽能够组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都能够用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP和CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivate
2、dprotein）4回文序列：DNA片段上的壹段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。5micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，和mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。6核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。7模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域8信号肽：在蛋白质合成过程中N端有1536个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。9弱化子：在操纵区和结构基因之间的壹段能够终止转录作用的核苷酸序列。10魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生壹个应急反应，停止全部基因的表达。产生这壹应急反应的信号是鸟苷四
3、磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp和pppGpp的作用不只是壹个或几个操纵子，而是影响壹大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。11上游启动子元件：是指对启动子的活性起到壹种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA及增强子，弱化子等。12DNA探针：是带有标记的壹段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13SD序列：是核糖体和mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。14单克隆抗体：只针对单壹抗原决定簇起作用的抗体。15考斯质粒：是经过人工构建的壹种外源DNA载体，保留噬菌体俩端的COS区，和质粒连接构成。16蓝-白斑筛选：含L
4、acZ基因（编码半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。17顺式作用元件：在DNA中壹段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了53外切酶活性19锚定PCR：用于扩增已知壹端序列的目的DNA。在未知序列壹端加上壹段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。20融合蛋白：真核蛋白的基因和外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋
5、白和外源蛋白结合在壹起所组成的蛋白质。二、填空1DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。2RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）俩种类型。3原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。4蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5启动子中的元件通常能够分为俩种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。6分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达和调控）、（DNA重组技术）三部分。7证明DNA是遗传物质的俩个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（T2噬菌体感染大肠杆菌）这俩个实验
6、中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。8hnRNA和mRNA之间的差别主要有俩点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、（mRNA的5末端被加上壹个m7pGppp帽子，在mRNA3末端多了壹个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。9蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是壹种经济的方法）、（能够减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。10蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。11半乳糖对细菌有双重作用；壹方面（能够作为碳源供细胞生长）；另壹方面（它又是细胞壁
7、的成分）。所以需要壹个不依赖于cAMPCRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要壹个依赖于cAMPCRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2）开始，无G时转录从（S1）开始。12DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把壹个生物体中的遗传信息DNA转入另壹个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤：提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另壹DNA分子上（克隆载体），形成壹个新的重组DNA分子。将这个重组DNA分子转入受体细胞且在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。对含有重组DN
8、A的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。13、质粒的复制类型有俩种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。14PCR的反应体系要具有以下条件：a、被分离的目的基因俩条链各壹端序列相互补的DNA引物（约20个碱基左右）。b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。c、dNTPd、作为模板的目的DNA序列15PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。16、转基因动物的基本过程通常包括：将克隆的外源基因导入到壹个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中；接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；完成胚胎发育，生长为后
9、代且带有外源基因；利用这些能产生外源蛋白的动物作为种畜，培育新的纯合系。17杂交瘤细胞系的产生是由（脾B）细胞和（骨髓瘤）细胞杂交产生的，由于（脾细胞）能够利用次黄嘌呤，（骨细胞）提供细胞分裂功能，所以能在HAT培养基中生长。18随着研究的深入第壹代抗体称为（多克隆抗体）、第二代（单克隆抗体）、第三代（基因工程抗体）。19目前对昆虫病毒的基因工程改造主要集中于杆状病毒，表当下引入（外源毒蛋白基因）；（扰乱昆虫正常生活周期的基因）；（对病毒基因进行修饰）。20哺乳类RNA聚合酶启动子中常见的元件TATA、GC、CAAT所对应的反式作用蛋白因子分别是（TFIID）、（SP-1）和（CTF/NF1）
10、。21RNA聚合酶的基本转录因子有、TF-A、TF-B、TFII-D、TF-E他们的结合顺序是：（D、A、B、E）。其中TFII-D的功能是（和TATA盒结合）。22和DNA结合的转录因子大多以二聚体形式起作用，转录因子和DNA结合的功能域常见有以下几种（螺旋-转角-螺旋）、（锌指模体）、（碱性-亮氨酸拉链模体）。23限制性内切酶的切割方式有三种类型分别是（在对称轴5侧切割产生5粘端）、（在对称轴3侧切割产生3粘端）（在对称轴处切割产生平段）。24质粒DNA具有三种不同的构型分别是：（SC构型）、（oc构型）、（L构型）。在电泳中最前面的是（SC构型）。25外源基因表达系统，主要有（大肠杆菌）
11、、（酵母）、（昆虫）和（哺乳类细胞表）。26转基因动物常用的方法有：（逆转录病毒感染法）、（DNA显微注射法）、（胚胎干细胞法）。三、简答1分别说出5种之上RNA的功能？转运RNAtRNA转运氨基酸；核蛋白体RNArRNA核蛋白体组成成；信使RNAmRNA蛋白质合成模板；不均壹核RNAhnRNA成熟mRNA的前体；小核RNAsnRNA参和hnRNA的剪接；小胞浆RNAscRNA/7SL-RNA蛋白质内质网定位合成的信号识别体的组成成分；反义RNAanRNA/micRNA对基因的表达起调节作用；核酶RibozymeRNA有酶活性的RNA2原核生物和真核生物启动子的主要差别？原核生物TTGACA-
12、TATAAT-起始位点-35-10真核生物增强子-GC-CAAT-TATAA5mGpp起始位点-110-70-253对天然质粒的人工构建主要表当下哪些方面？天然质粒往往存在着缺陷，因而不适合用作基因工程的载体，必须对之进行改造构建：a、加入合适的选择标记基因，如俩个之上，易于用作选择,通常是抗生素基因。b、增加或减少合适的酶切位点，便于重组。c、缩短长度，切去不必要的片段，提高导入效率，增加装载量。d、改变复制子，变严紧为松弛，变少拷贝为多拷贝。e、根据基因工程的特殊要求加装特殊的基因元件4举例说明差示筛选组织特异cDNA的方法？制备俩种细胞群体，目的基因在其中壹种细胞中表达或高表达，在另壹种
13、细胞中不表达或低表达，然后通过杂交对比找到目的基因。例如：在肿瘤发生和发展过程中，肿瘤细胞会呈现和正常细胞表达水平不同的mRNA，因此，能够通过差示杂交筛选出和肿瘤相关的基因。也可利用诱导的方法，筛选出诱导表达的基因。5杂交瘤细胞系的产生和筛选？脾B细胞+骨髓瘤细胞，加聚乙二醇（PEG）促进细胞融合，HAT培养基中培养（内含次黄嘌呤、氨基蝶呤、T）生长出来的脾B-骨髓瘤融合细胞继续扩大培养。细胞融合物中包含：脾-脾融合细胞：不能生长，脾细胞不能体外培养。骨-骨融合细胞：不能利用次黄嘌呤，但可通过第二途径利用叶酸仍原酶合成嘌呤。氨基蝶呤对叶酸仍原酶有抑制作用，因此不能生长。骨-脾融合细胞：在HA
14、T中能生长，脾细胞能够利用次黄嘌呤，骨细胞提供细胞分裂功能。6、利用双脱氧末端终止法（Sanger法）测定DNA壹级结构的原理和方法？原理是采用核苷酸链终止剂2，3，-双脱氧核苷酸终止DNA的延长。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂键所需要的3-OH，壹旦参入到DNA链中，此DNA链就不能进壹步延长。根据碱基配对原则，每当DNA聚合酶需要dNMP参入到正常延长的DNA链中时，就有俩种可能性，壹是参入ddNTP,结果导致脱氧核苷酸链延长的终止；二是参入dNTP,使DNA链仍可继续延长，直至参入下壹个ddNTP。根据这壹方法，就可得到壹组以ddNTP结尾的长短不壹的DNA片段。方法是分成四组分别为dd
15、AMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反应后，聚丙烯酰胺凝胶电泳按泳带可读出DNA序列。7、激活蛋白（CAP）对转录的正调控作用？环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMPreceptorprotein），cAMP和CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。当大肠杆菌生长在缺乏葡萄糖的培养基中时，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等启动子的功能。壹些依赖于CRP的启动子缺乏壹般启动子所具有的典型的-35区序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶难以和其结合。CAP的存在（功能）：能显著提高酶和启动子结合常数。主要表现以下二方面：CAP通过改变启动子的构象以及和酶的相互作用帮助酶分子正确定向,以便和-10区结合，起到取代-35区功能的作用。CAP仍能抑制RNA聚合酶和DNA中其它位点的结合，从而提高和其特定启动子结合的概率。8、典型的DNA重组实验通常包括哪些步骤？a、提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另壹DNA分子上（克隆载体），形成壹个新的重组DNA分子。b、将这个重组DNA分子转入受体细胞
