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1、摘 要试验针对蒙自枇杷根腐病根际土壤中的真菌类微生物进行了研究。利用显微镜观察菌丝形态及产孢结构,测量孢子大小,根据形态特征将其鉴定到种。本文鉴定枇杷根际土壤真菌21-40号菌株,共鉴定出6个种,分别为:Absidia cylindrospora、Acremonium cerealis、Acremonium murorum、Colletotrichum dematium、Penicillium nigricans、Penicillium oxalicum,另外38号菌株为担子菌。它们分属于4个属的真菌,分别为犁头霉属(Absidia)、枝顶孢属(Acremonium)、炭疽菌属(Colleto
2、trichum)和青霉属(Penicillium)。Penicillium nigricans的频率最高,是枇杷根腐病根际土壤真菌中的优势菌群。掌握蒙自枇杷根腐病根际土壤真菌种类情况,对进一步研究和防治蒙自枇杷根腐病具有深远意义。关键词:枇杷根腐病;土壤真菌;鉴定;优势种群ABSTRACTThis paper studies fungi of loquat root rot Rhizo-sphere soil (20-40 strains), using microscope method, observe and record the strains morphological charac
3、teristics, after analysis and sorting experimental data, they are identified preliminary. There are 6 species, Absidia cylindrospora、Acremonium cerealis、Acremonium murorum、Colletotrichum dematium、Penicillium nigricans、Penicillium oxalicum。In addition, there is 1 Basidiomycete. This experiment can pr
4、ovide initial bio-control fungal resources for loquat root rot.Key words: Root rot of Loquat;Soil fungi;Identification;Dominant species目 录1.前言11.1土壤真菌的研究进展11.2蒙自地区枇杷根腐病概况22.材料与方法32.1材料来源32.2真菌鉴定方法33.结果与分析43.1鉴定结果43.2结果分析74.讨论95.结论10参考文献11致谢12红河学院本科毕业论文 (设计)1.前言枇杷(Eriobotrya japonica)属蔷薇科枇杷属,为亚热带常绿果树
5、,在我国栽培历史悠久。近10年来我国枇杷栽培面积急剧扩大,已经超过10万公顷1。蒙自是云南低纬高原,冬无严寒,夏无酷暑,雨热同季,干湿分明,全年有300多天晴天,这种日照条件使蒙自枇杷腊月即可成熟,从而具有强有力的市场竞争优势。据报道,到2011年,全市种植枇杷4.05万亩,总产量13853.7吨,产值11184.6万元2。近年来,随着蒙自枇杷种植规模的不断扩大,枇杷相继发生各种病害。其中,枇杷根腐病是蒙自枇杷发展的最大危害,一般农药难以根治,严重制约着蒙自枇杷产业的发展。本次试验对已分离出的根腐病根际土壤真菌进行部分鉴定、讨论其根际土壤中的优势菌种。为今后该病的防治以及研究提供一定理论依据。
6、1.1土壤真菌的研究进展1886年,Admetz开创了土壤真菌研究的先河,他取不同深度沙质土以及黏土,将土样置于装有灭菌培养基的小瓶内培养,获得了11株真菌,并用于生物化学方面的研究,早期研究主要集中于分离、鉴定3。1902年,Koning和Oudemans对分离方法进行了改进,用麦芽汁或麦芽加琼脂作为培养基,将土壤中的植物部分打碎后,制成悬浮液进行培养,得到40多个菌株。20世纪30年代,Chesters提出了将装有灭菌培养基的试管埋于土壤中来分离真菌的方法,使土壤真菌分类研究从此开始步入快速发展的阶段3。1968年,Barron总结自己的研究结果,写成的土壤中丝孢纲真菌的属一书包含了丝孢纲
7、真菌214属,436种,其中130属约270种是暗色丝孢菌4。2005年,张伟、许俊杰和张天宇在“土壤真菌研究进展”中综述了土壤真菌的研究简史、研究方法的发展、多样性和现代真菌分类技术在土壤真菌研究中的应用和发展等5。2008年,刘会梅、张天宇在“土壤真菌研究进展”中简要概述了土壤真菌的类群,多样性检测,群落生态学以及其在生态系统中的作用,并简要对分离和计数的方法进行了介绍3。2008年,杨莉榕、任文智和贺冰在“园林土壤真菌种类的初步研究”中通过对四个不同的园林土壤中真菌种类的分布情况进行调查研究,共分离出7属14种真菌,其中毛霉属三种:即林木毛霉、丰盛毛霉和碎囊毛霉;曲霉属三种:本曲霉棘孢变
8、种、日本曲霉原变种和佩特曲霉;镰孢属一种;青霉属四种:绳状青霉、分枝青霉、短密青霉和桔青霉;芽枝霉属一种;木霉属一种即康氏木霉;轮枝霉属一种6。1.2蒙自地区枇杷根腐病概况蒙自是云南低纬高原,冬无严寒,夏无酷暑,雨热同季,干湿分明,全年有300多天晴天,这种日照条件使蒙自枇杷腊月即可成熟,从而具有强有力的市场竞争优势7。随着蒙自枇杷种植规模的不断扩大,根腐病对蒙自枇杷危害日益严重。针对此种情况,却没有人对其做深入研究。从目前相关报道来看,云南蒙自枇杷根腐病是一种土传真菌病害。病株根环腐,不长新根,有白色菌丝。茎基部腐烂,韧皮部呈鱼鳞状。病部流出淡褐色汁液,刮下病树树皮有酒味。前期落叶,后期植株
9、萎蔫、树皮脱落、最后整株枯死。土壤中的许多真菌也是植物病害的重要病原菌,它们寄生于各种作物、林木,使它们发生病变,从而给人们带来经济损失4。同时,土壤中也存在一定数量的有益真菌,抑制着相关病害真菌的生长,起到维持土壤环境平衡,保护植物健康生长的作用。本次试验对已分离出的根腐病根际土壤真菌进行部分鉴定、讨论其根际土壤中的优势菌种。为今后该病的防治以及研究提供一定理论依据。9红河学院本科毕业论文 (设计)2.材料与方法2.1材料来源本试验用的供试生防菌为其他组员分离鉴定所得的21-40号菌株。25恒温箱内培养3-5d后带菌落出现具体形状之后开始进行观察和鉴定8。2.2真菌鉴定方法2.2.1性状观察
10、2.2.1.1菌落形状 观察记载培养菌落上菌丝丝状、绒状、絮状等状态。2.2.1.2菌落色泽观察记载菌落正反面的色泽等性状。2.2.2形态特征观察2.2.2.1菌丝体观察记载菌丝体的形态、结构、颜色、大小等特点。2.2.2.2产孢结构观察记载产孢形态、结构、颜色、大小等特点。2.2.2.3孢子观察记载孢子的形态、颜色、大小、着生方式等特点。2.2.3真菌类别鉴定根据上述性状及形态特征用载片培养法9观察分生孢子大小和厚垣孢子形状及着生方式,产孢细胞形态特点,并测量10个孢子的长和宽。观察结果,将所获各项数据进行整理,查阅相关的真菌鉴定文献和资料,确定所测真菌类别。红河学院本科毕业论文 (设计)3
11、.结果与分析3.1鉴定结果3.1.1犁头霉属(Absidia)Absidia cylindrospora (27号菌株)菌落褐色,丝状或絮状,产生黄色色素,在PDA培养基上,25下培养5d菌落直径达90mm。菌丝淡褐色,有隔膜,有分支,宽2.25-3.75m;分生孢子梗淡绿色,有隔,无分支,宽2.5-10m;包囊球形,无色,直径9-17.5m;包囊孢子圆柱形,单孢,无色,3.8-52.5-2.8m(如图1所示)。图1 Absidia cylindrospora形态图3.1.2枝顶孢属(Acremonium)3.1.2.1 Acremonium cerealis (21号菌株)菌落白色,背面黄色
12、,絮状,产生淡黄色色素,分泌黑色粘液,在PDA培养基上,25下培养5d菌落直径达56mm。菌丝淡绿色,无隔膜,有分支,宽2.0-5.0m;分生孢子梗淡绿色,无隔,基部宽,顶端窄,宽1.3-2.5m;分生孢子近圆形,偶椭圆形,单孢,淡绿色,2.5-5.52.5-5.5m(如图2所示)。图2 Acremonium cerealis形态图3.1.2.2 Acremonium murorum(22号菌株)菌落白色,背面黄色,絮状,产生淡黄色色素,分泌黑色粘液,在PDA培养基上,25下培养5d菌落直径达66mm。菌丝淡绿色,有隔膜,有分支,宽1.3-5.0m;分生孢子梗淡绿色,有隔,宽0.8-5.0m;
13、分生孢子近圆形,单孢,具油滴,聚集成头状,淡绿色,1.8-5.0m(如图3所示)。图3 Acremonium murorum形态图3.1.3 炭疽菌属(Colletotrichum)Colletotrichum dematium(40号菌株)菌落粉白色,丝状,产生淡黄色色素,在PDA培养基上,25下培养5d菌落直径达9mm。孢子盘近球形,380.0-340.0m;刚毛淡褐色,顶端变细,长425.0-825.0m,分生孢子大多长椭圆形,偶圆形,单孢,淡绿色,2.5-5.02.5-3.8m(如图4所示)。图4 Colletotrichum dematium形态图3.1.4 青霉属(Penicill
14、ium)3.1.4.1 Penicillium nigricans (24、25、29、30、31、32、33、34、35、36、37和39号菌株)菌落灰色至灰黑色,丝状,大多产生黄色色素,在PDA培养基上,25下培养5d菌落直径达29mm(24号)、41mm(25号)、27mm(29号)、28mm(30号)、28mm(31号)、49mm(32号)、25mm(33号)、30mm(34号)、28mm(35号)、29mm (36号)、40mm(37号)和30mm(39号)。菌丝淡绿色,有隔膜,有分支,宽1.3-5.0m;分生孢子梗淡绿色,有隔,多数有隔膜,有分支,宽1.8-5.0m;瓶梗一轮生;分
15、生孢子椭圆形,近球形,单孢,淡绿色,1.8-5.51.8-5.0m(如图5所示)。图5 Penicillium nigricans形态图3.1.4.2 Penicillium oxalicum (26和28号菌株)菌落粉白色,丝状,产生黄色色素,在PDA培养基上,25下培养5d菌落直径达30mm(26号)和30mm(28号)。菌丝淡绿色,有隔膜,有分支,宽2.0-2.5m;分生孢子梗淡绿色,有隔,有分支,宽1.3-5.0m;瓶梗一轮生;分生孢子纺锤形,近球形,单孢,淡绿色,2.5-5.52.3-4.5m(如图6所示)。图6 Penicillium oxalicum形态图3.1.5担子菌类Basidiomycotina(38号菌株)菌落黑色,绳索状,有蘑菇香味;在PDA培养基上,25下培养5d菌落直径达8mm。菌丝黑色或褐色有隔,具锁状联合