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1、葡萄糖氧化酶法 测定血清葡萄糖,实验九,一、实验目的,(1)了解血糖的概念。 (2) 掌握血糖的测定方法葡萄糖氧化酶法。,血糖的来源、去路,血糖水平恒定的生理意义,保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡萄糖供能； 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供能。,测定方法,无机化学法： Folin-Wu法,有机化学法：邻甲苯胺法,酶法：葡萄糖氧化酶法,血糖测定的常用方法,HOW？,方法 类型 原 理 用途及备注 磷钼酸法 定量 G+Cu2+Cu2O 稳定、准确、但对 （Folin-Wu） 分光
2、 Cu2O +磷钼酸试剂 蓝色钼化合物 葡萄糖无特异性， （430nm） 受血中非糖还 原物 质的影响。 邻甲苯胺法 定量 G+邻甲苯胺蓝绿色的席弗(Schiff)碱 较Folin-Wu法特异 （630nm） 但不及酶法。 D-甘露糖能与邻甲 苯胺反应，生成类 似吸收光谱，造成 正误差。,（一）化学法,酶法分析是指用酶作为工具定量测定某种物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的底物，辅酶，也可以是酶的激活剂或抑制剂。,（二）酶 法,酶法分析的主要方法： 单酶反应定量法和偶联酶反应定量法,单酶反应定量法：指用一种酶为工具酶定量测定某种物质的方法。 偶联酶反应定量法：当单酶反应底物或产物反应底
3、物或产物的物理化学手段无法区分时，还可以借助另一种酶作为指示酶，通过偶联反应进行定量分析。,方法 类型 原 理 用途及备注 己糖激酶 定量 G+ATPG-6-P+ADP 血清尿液脑脊液、 （HK）法 分光 G-6-P + NADP+ 公认参考方法 动态 GA-6-P + NADPH 操作简便，特异 终点 （340nm） 性和灵敏性均高 推荐常规方法 葡萄糖氧 同上 G+O2 GA+H2O2 化酶（POD） H2O2 + 染料有色染料 偶联法 （还原型） （氧化型） 可制试纸片定量 （Trinder） （4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 红色琨类化合物505nm）,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法
4、原理,（1）葡萄糖O2H2O,（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚,葡萄糖酸H2O2,葡萄糖氧化酶（GOD）,H2O 红色醌式物质,过氧化物酶 （POD）,Trinder反应,505nm,光吸收法测定,相对血糖浓度,（1）取3支试管，按下表加入试剂:,实验步骤：,充分混匀，37 水浴中保温20min；,冷却至室温后，505nm处比色,比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度值。,（2）计算 依据朗伯-比尔定律： A=KLC 血清葡萄糖= （mmol/L） 参考值： 空腹血清葡萄糖浓度:3.896.11mmolL,标准液浓度,注意事项：,本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂中，再吸试剂
5、反复冲洗试管。 此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量，但不能直接用于测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可感染过氧化物酶发硬，造成结果假性偏低。 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。,临床意义：,生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张 病理性高血糖： 糖尿病 内分泌腺功能障碍 颅内压增高 脱水引起高血糖 生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动 病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。,调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。,思考题：,本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂终止酶的反应？ 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸酶活力测定中的显色反应有何异同？ 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？ 葡萄糖氧化酶法： 3.896.11mmol/L Folin-Wu法： 4.46.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.896.11mmol/L,
