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1、FACSCalibur 流式细胞仪操作维护规程 1 目的 规范流式细胞仪 FACSCalibur 操作维护规程 正确使用和维护仪 器 保证检测工作顺利进行和设备安全 2 适用范围 适用流式细胞仪 FACSCalibur 的使用操作 3 职责 操作人员按照本规程操作仪器 对仪器进行正常维护 并作使用记录 保管人负责监督仪器操作是否符合规程 并对仪器进行定期维护和保 养 仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理 4 操作程序 安全操作注意事项和特别提示 4 1 1 该仪器必须有专人保管 使用前需通读仪器说明书 4 1 2 严格遵守操作规程 如仪器出现故障 应马上停止使用 并立 即向保管人 仪器管理
2、人以及科室负责人报告 严格按照单位有关制 度实施 不得擅自 修理 查明原因 处理后仪器保管人应及时做 好故障情况及维修记录 设备每日开机程序 开启稳压电源 变压器 打开流式细胞仪电源 开启其它周边配备电源 如打印机 开启计算机 确认鞘液筒有八分满 废液桶近似空的 桶盖是旋紧的 所有管线及 管路装置连接通畅 无扭曲 折叠 将气压阀方向调在加压位置 用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起 排除液流过滤器中的气泡 等待机器预热 5 10分钟后可开始实验 设备质控程序 试剂准备 取试剂盒中的 Unlabeled试剂 充分混匀 加一滴到装有1ml 鞘液的 试管中 混匀 标记为unlabeled 取 FITC PE P
3、erCP Unlabeled试剂 充分混匀 各加一滴到第二 支装有 3ml 鞘液的试管中 混匀 标记为mixed 上机操作 按电脑桌面的 FacsComp进入质控程序 在出现的 Sign in 窗口中输入操作者姓名 单位 领导姓名等相 关信息 计算机将保存这些信息 单击 Accept 在试验选项中 选择Lyse No Wash LNW 免洗程序 在 Calibrite Beads Lot IDs 中 根据每种颜色的beads所对应的 Lot Ids 输入编号 此编号在Calibrite beads试剂盒内 打开新买的试剂盒 里面有一张橙色胶纸 取出贴在试剂盒的背面 标题是 Calibrite
4、beads 3 Batch NO 选择 FACS Flow Sheath下的编号 右侧的编号 APC Lot ID 此栏不能空 即使是三色校正试剂 在右侧的保存选项中文件会自动保存 路径 Facstation BD file FACSComp DDMMYY 还可以单击 Location 改变文件保存路径 按 Run开始上样 在仪器面板上按Run Hi 高速运行 速度不能低于 400 个细胞 秒 速度过低可在管中加一滴微球 上第一管后 按 Start 键 仪器自动调节PMT 完成后窗口底部出现 PMT set Successfully 暂停 5 秒后自动进入下一个调节窗口 注意 速度不能低于 4
5、00 个细胞 秒 速度过低可在管中加一滴微球 上第二管 单击 Start 仪器开始自动调节补偿并进行灵敏度测试 完成后仪器会给出提示 最后软件给出一个Summary Report 检查报 告中的 Result 是否都 PASS 如果有的没有 PASS 检测原因 是 否试剂过期 两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同 仪器做 月维护 完成后再重新做 FACSComp 仪器指控 打印报告 退出FACScomp 软件 样本检测程序 样本准备 取 TruCount Tube 编号 用反向加样法在 Tube中加入 50ul 充分混匀的抗凝全血 注意血不要 碰到试管底部的微球 Beads 取 20ul 荧光
6、抗体加入到管中 注意 不要碰到血 涡旋混匀 室温 避光放置 15min 取出加入 450ul 1 FACS 溶血素 充分混匀 避光放置15min 24 小时内上机用 MultiSET软件获取细胞进行检测 上机前应充分混 匀 上机操作 执行 FACSCalibur 开机程序 进入MultiTEST软件 在出现的 Sign in 窗口中输入操作者姓名 单位 领导姓名等相关 信息 计算机将保存这些信息 单击 Accept 进入 Set up 窗口 在 Data Source 对话框中选择 From Cytometer Acquisition and Analysis 在 Entry Level Fi
7、le Name Prefix 中选择 Sample name 在 Automatic Saving Options 中选择 Data File Laboratory Report Physician Report 软件会自动生成一个文件 文件的默认路径 Facstation BD file Multiset DDMMYY 文件夹 在 View Reports 中选择 Until Next Button Pressed 单击 Accept 进入 FACSComp 窗口 单击 Skip FACSComp 进入 Test Prefs 窗口 在 Physician Report Choices 中 这
8、一项可 以是全选 运行了一种试剂 会自动报告相应的结果 在窗口的最下 方点 Lot Ids 跳出一窗口 点此窗口左侧的 Absolute Count Beads 在此窗口右侧输入TruCount tube的批号和 Beads总数 标在包装袋 上 单击 Save 单击 Accept 进入 Samples 窗口 在表格中输入相应的Patient Name ID Case Number 在 Panel中选择 CD4 8 3 Truc 在窗口最上方的 Cytometer 的下拉菜单中 单击 Instrument Setting 在出现的新对话框中单击 Open 打开此路径下 Facstation BD
9、 file Instrument Setting 文件 调用仪器各个参数的条 件 选好后单击 Set Done 单击 Run Tests 上样 调整 SSC电压和阈值后 单击 Acquire 获取完成后 可以人工调整各个门的大小 单击 Continue 打印 Phys Report 继续下一个实验 或单击 Quit Don t Save 退出 MultiTest 软 件 每日关机程序 将样品支撑架置于旁位 用2ml10 漂白剂 有效氯浓度 作样 品 使外管吸入 1 2ml 将样品支撑架置于中位 以 HI RUN 5 10 分钟 使内管吸入约 1ml 将样品换成蒸馏水重复步骤和 注意 最后要剩余
10、约 1ml 蒸馏水浸 泡进样针 防止结晶形成 选择 Standby模式 5 分钟后可关掉主机 退出所有应用软件 关闭电脑 关闭稳压器和变压器 将流式细胞仪的压力阀置于减压状态 清洁和维护 每日维护 实验结束后 请于关机前清洁加样针的外管和内管 防 止加样针堵塞或有染料残留 清洁方法同每日关机程序 每月维护 流式细胞仪使用一段时间后 在鞘液管路 废液管路和流 动池中会有残留的碎片 污染物等 因此 需要定期清洗管路 要求 至少每个月做一次 在仪器减压后 取下鞘液筒 倒空 如有必要 应清洗鞘液筒 将鞘液滤器短路 使鞘液不流经滤器 直接沿鞘液管路进入流动池 鞘液筒中倒入 2L浓度为 稀释漂白剂 注意不
11、能使用原浓度 上样管中加入 4ml 浓度为 稀释漂白剂 流速选择 HI 档 RUN运行 20 30 分钟 鞘液筒用蒸馏水清洗干净 再加入蒸馏水2L 取下有漂白剂的上样管 换上有4ml 蒸馏水的上样管 流速选择 HI 档 RUN运行 20 30 分钟 鞘液筒中换成鞘液 重新安装好鞘液滤器管路 流动池 PRIME两遍 PRIME结束后 仪器自动回复到STANDBY 状态 上样管中加入蒸馏水 RUN运行 5 分钟 仪器进入 STANDBY 状态 可以进行样本检测 定期维护 更换鞘液过滤器 如果鞘液污染将会影响样品检测结果时 在技术支持指导下或参照用 户手册的有关内容自行更换 空气滤网的清洁 空气滤网位于鞘液筒上方 可以用吸尘器或水洗 的办法清洁 空气滤网需要定期检查 发现滤网脏了 就需要清洗了 拉出抽屉后取下空气滤网 清洁滤网 如果水洗处理 应等滤网完全干了以后 再进行安装 装回滤网 将其慢慢推回原位 安装时注意滤网的方向 气流由下往 上通过 6 支持性文件 全国艾滋病检测技术规范 2009 年修订版 FACSCalibur 中文操作手册
