《细胞因子与病理过程20021213.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞因子与病理过程20021213.ppt（91页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细胞因子与病理过程 中国医科大学病理学教研室王恩华 细胞因子cytokines concept 是由细胞产生和分泌的低分子量的多肽类介质effect 参与调节细胞生长 分化 器官发育 炎症 免疫 肿瘤 损伤 修复等许多病理及生理过程来源 血管内皮细胞 WBC 中性 单核巨噬细胞 LC 纤维母细胞 神经组织 平滑肌细胞 软骨组织 肿瘤细胞等 1 白细胞介素类interleukinsILs2 集落刺激因子类colonystimulatingfactorsCSFs3 肿瘤坏死因子类tumornecrosisfactorsTNFs4 淋巴因子类lymphokines5 化学趋化因子类chemotact
2、icfactors6 生长因子类growthfactors7 细胞粘附因子类celladhensionmolecules总之 几乎所有组成多细胞间复杂的生物信号语言中的各个元件 均属此范畴 Classification 细胞因子 autocrine 自泌 paracrine 旁泌 在局部起作用激素 endocrine 内分泌 经血到远隔器官起作用相同点 细胞产生 分泌 作用受体 放大作用 细胞因子与激素的运行机制不同 举例局部损伤 细胞产生因子 只对局部细胞产生影响 如象激素一样入血 对全体细胞都产生影响 就麻烦了 细胞因子种类很多 作用广泛 与细胞外基质也有着密切的联系 下面仅就常见的细胞因
3、子作以简介 Wnt通路中的关键分子与肺癌侵袭转移 王恩华中国医科大学 研究背景1 在中国肺癌的发生率在过去的30年里上升了465 死亡率居恶性肿瘤之首每年死于肺癌的患者约45万人 其中约有40万人死于肺癌的转移因此揭示肺癌侵袭转移的分子机制和寻找治疗关键靶点 具有重要意义 研究背景2 Wnt通路中的关键分子GSK 3B APC和B catenin与肿瘤侵袭转移的关系已有较多报道 而位于其上游的DVL和Axin是如何调控肿瘤侵袭转移的则少有报道与B catenin同一家族的p120ctn是否与Wnt通路有关尚不清楚已有报道p120ctn能与Kaiso结合 而Kaiso只有入核信号 没有出核信号
4、那么p120ctn是否具有调节Kaiso核浆分布的作用 进而影响肿瘤的侵袭转移尚无报道 catenin在正常支气管上皮细胞表现为膜表达 而在NSCLC中主要表现为细胞浆或核内的蓄积 这种蓄积与NSCLC的低分化和淋巴结转移相关 1 Axin对NSCLC中 catenin蓄积所起的作用 我们用SSCP和直接测序法检测了100例NSCLC中 catenin第三外显子突变情况 结果发现 catenin的第三外显子无一例突变AmJClinPathol 2006 125 4 534 541 是什么原因造成了 catenin在肺癌细胞中的蓄积 我们发现Axin在NSCLC中的表达明显下调 Axin的表达下
5、调与NSCLC的不良预后明显相关 转染Axin可明显抑制肺癌细胞的侵袭转移和增殖能力 过表达Axin可使肺癌细胞中高表达的 catenin出现明显下调 我们猜测 Axin的表达减少可能是导致 catenin在NSCLC中蓄积的原因之一AnnSurgOncol2007 14 3251 9 我们将新鲜的NSCLC组织经1grayX ray照射后发现Axin的蛋白和mRNA均出现了明显的上调 同时Caspase 3的表达也出现了明显的上调 既然Axin有如此明显的抑癌作用 如何上调Axin的表达呢 因此 X ray是否能上调Axin的表达及水平是判定NSCLC是否对X ray治疗敏感的有用指标 X
6、ray照射或转染Axin都能上调肺癌细胞的凋亡率 转染Axin加上X ray照射可使凋亡率明显增加 Axin诱导细胞凋亡的机制是什么 转染Axin或不与p53结合的 Axin 再用p53抑制剂PFT 或JNK抑制剂SP处理 结果发现Axin通过p53和 或JNK通路促进肺癌细胞凋亡IntJRadioOncol2009 我们意外地发现 过表达Axin可以下调TCF 4的转录 但机制不清 已有文献报道 catenin具有促进TCF 4转录 而p53具有抑制TCF 4转录的能力而Axin既具有下调 catenin的能力 又有激活p53的能力因此 Axin既有可能是通过 catenin 也有可能是通过
7、p53下调TCF 4的转录 我们为了探讨这个问题 构建了Axin不能与 catenin结合 Axin不能与p53结合 以及Axin既不能与 catenin也不能与p53结合的突变体 转染Axin在下调 catenin表达的同时可明显下调TCF 4的表达 但转染Axin ca即保留了p53作用时却不能下调 catenin和TCF 4 但由于BE1细胞系是p53突变型细胞系 因此尚不能确定Axin是否具有通过p53下调TCF 4的作用因此 我们向BE1细胞中转染了野生型p53 结果显示单纯转染野生型p53可以下调TCF 4 但共转染Axin ca和p53后TCF 4并没有出现进一步下调 表明Axi
8、n并不能加强p53下调TCF 4的作用 MolCancer 2010Feb2 9 25 二 DVLs对Wnt通路的调节作用非小细胞肺癌组织中存在DVL 1和3的过表达 其表达与高TNM分期 低分化有关 Dvls在淋巴结转移灶中的表达总是高于原发灶Dvl 1和Dvl 3的过表达与非小细胞肺癌的不良预后相关 LungCancer 2008 62 181 192 我们发现 过表达Dvl 1可以明显的上调 catenin的蛋白水平 同时激活TCF 4依赖的转录活性 表明Dvl 1主要参与经典的Wnt通路而过表达Dvl 3却不能明显上调 catenin水平和TCF 4依赖的转录活性但无论过表达Dvl 1
9、还是Dvl 3均能明显增强肺癌细胞的侵袭转移能力 我们发现 转染Dvl 3能明显上调肺癌细胞中磷酸化的JNK和p38水平 那么Dvl 3是怎样促进肺癌细胞侵袭转移的呢 Molecularcarcinogenesis 2010 并且明显下调RhoA的活性 上调Cdc42和Rac1活性 由于小GTP酶活性和JNK p38均与非经典的Wnt通路有关 因此我们可以得出如下结论 Dvl 1主要通过经典Wnt通路而Dvl 3主要通过非经典Wnt通路促进肺癌细胞的侵袭和转移 我们发现 过表达DVL 3上调p120mRNA水平 但是转染Dvl 1却不能 转染Dvl 3可以增加Pax6的表达 无论是应用Pax6
10、的单克隆抗体阻断 还是用siRNA敲出Pax6 都可以明显的下调p120ctn的转录 ChIP分析证实了转录因子Pax6可以直接与p120ctn的启动子区结合 上述结果说明 Dvl 3调节Pax6 而Pax6又与p120ct的启动子区作用 进而启动了p120ctn的转录但Dvl 3是如何上调Pax6的尚不清楚 上述结果提示我们p120ctn通过Dvl 3与Wnt通路联系p120ctn与Wnt通路之间还存在哪些联系呢 3 p120ctn在肺癌侵袭和转移中的作用 及其与Wnt通路的联系 p120ctn在肺癌中的异常表达及意义 P120ctn的异常表达与低分化 高TNM分期 淋巴结转移及不良预后相关
11、HistolHistopathol2006 21 841 847APMIS2007 115 848 56 肺癌中p120ctn 1A 3A和E cadherin的表达下调与smallGTP酶过表达相关 LungCancer63 2009 375 382 敲除p120ctn后 Pulldown结果证实cdc42 Rac1活性增强 但RhoA活性下降 E cadherin的蛋白表达下降 敲除p120ctn后S期细胞比例增加 侵袭和转移能力增强 CancerSci2009 100 441 448 过表达p120 1A下调Rac1活性而过表达p120 3A下调Cdc42活性 p120ctn 1A和3A
12、都可抑制肺癌细胞增殖 侵袭和转移但是p120ctn 1A抑制肺癌细胞侵袭转移的能力强于3A而p120ctn 3A抑制增殖的能力明显强于1A ExpCellRes2009 315 890 898 我们发现 转染p120 1A可以明显的上调 catenin的蛋白和mRNA的表达 我们得出以下结论 p120ctn 1A通过 catenin与Wnt通路关联 用siRNA敲出p120ctn后 catenin的蛋白和mRNA水平出现明显下调 Kaiso是如何出核的 4 Kaiso在肺癌侵袭转移中的作用 Kaiso过表达与NSCLC不良预后相关 BMCCancer 2009 9 178 无论是在肺癌原发灶和
13、淋巴结转移灶中 Kaiso和p120ctn总是呈现同样的表达部位 免疫共沉淀证实 无论在肺癌组织还是细胞系中 Kaiso和p120都可以形成复合体 干扰p120后Kaiso核内增多 核浆蛋白分离进一步验证Kaiso在核内分布增多 说明 p120无论在细胞浆还是在核内 都能与Kaiso结合 转染p120ctn 3A Kaiso和p120ctn主要为浆表达LMB阻断p120ctn出核则p120ctn和Kaiso主要位于核内转染p120 NLS 3A入核序列质粒则p120ctn位于核内 Kaiso也位于核内 我们得出结论 p120ctn 3A影响Kaiso的核浆分布 Kaiso的出核依赖与p120c
14、tn 3A的存在 ExpCellRes revised 结论 Axin DVL p120ctn Kaiso在肺癌侵袭转移中发挥着重要的调控作用 catenin在NSCLC中蓄积是由于Axin表达下调所致 过表达Axin或用X线照射肺癌组织上调Axin的表达 都可明显抑制肺癌的侵袭转移 促进肺癌细胞凋亡P120与Wnt通路中的关键分子Dvl 3和 catenin相关Kaiso是通过与p120 3A结合被携带出核的 Publishedariticles directlyrelative 1 AxindownregulatesTCF 4transcriptionviabeta catenin but
15、notp53 andinhibitstheproliferationandinvasionoflungcancercells MolCancer 2010Feb2 9 25 2 CytoplasmicKaisoisassociatedwithpoorprognosisinnon smallcelllungcancer BMCCancer 2009Jun9 9 178 3 Kaisoisexpressedinlungcancer itsexpressionandlocalizationisaffectedbyp120ctn LungCancer2010 67 2 205 215 4 X rayi
16、nducesnon smalcelllungcancerapoptosisbyupregulatingAxinexpression InterJRadOnc Biol Phys 2009 75 2 518 265 Ablationofp120 CateninEnhancesInvasionandMetastasisofHumanLungCancerCells CancerSci 2009 100 3 441 448 6 Abnormalexpressionofp120 catenin E cadherin andsmallGTPasesissignificantlyassociatedwithmalignantphenotypeofhumanlungcancer Lungcancer 2009 63 375 382 7 P120 cateninIsoforms1Aand3ADifferentlyAffectInvasionandProliferationofLungCancerCells Expcellres 2009 315 5 890 898 8 Dishevelledfamily
