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1、790000116人份试剂盒 Cell Search循环肿瘤细胞检测试剂盒（上皮细胞）IVD使用须知本试剂盒仅用于体外诊断CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒用于外周血中循环肿瘤细胞（CTC）的计数，这些细胞来源于上皮细胞，即表现为CD45阴性（CD45-），EpCAM阳性（EpCAM+），细胞角蛋白8,18阳性（CK8,18+）和（或者）CK19阳性(CK19+)的细胞。用CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒检测的CTC，存在于外周血中，这类细胞与乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌*转移患者的无进展生存期和总生存期相关。因此，CTC可以用来监控乳腺癌、结直肠癌和前列腺癌患者的肿瘤细胞是否
2、发生转移。CTC应该进行持续检测，并与其他临床诊断方式联合起来监控上述肿瘤细胞的转移。在肿瘤发生过程中的任何时间段，对CTC数量进行评估，可以预估肿瘤患者治疗后的无进展生存期和总生存期。*在该研究中，转移性前列腺癌患者定义为血清标志物PSA在标准激素基准上，高于参考水平具有两次连续增加。这些患者通常描述为具有非雄激素依赖性，激素抗性，或去势抗性的前列腺癌。摘要说明肿瘤转移是指当肿瘤细胞从原发灶或转移灶剥落后，这些肿瘤细胞进入循环系统并在机体的远端定植生长的情况。血液循环中的肿瘤细胞源自于上皮细胞，而这类细胞在血液循环系统中是极罕见的。基于此，本公司推出的细胞自动化捕获仪(CELLTRACKS
3、AUTOPREP System)通过预设程序并配合使用CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒(CELLSEARCH Kit)可以对样本进行标准化和自动化检测。用CELLTRACKS II分析仪或者CellSpotter分析仪，一种半自动荧光显微镜，可以对肿瘤细胞进行分析和计数。这种方法只计具有上皮细胞特性（EpCAM+, CK8,18+，和/或者CK19+）的细胞数量。检测原理CellSearch循环肿瘤细胞检测试剂盒包括磁流体捕获试剂和荧光免疫试剂。磁流体试剂是一种具有磁芯的颗粒。其表面包被识别EpCAM抗原的抗体，EpCAM是CTC特异性抗原。因此，该磁微粒可以捕获CTC。经过免疫捕获
4、和富集后，荧光试剂用来鉴定CTC和CTC计数。荧光试剂包括以下组成：抗CK-藻红蛋白（PE）的特异于细胞内蛋白质的细胞角蛋白抗体（上皮细胞特性）；DAPI，用于细胞核染色；和抗CD45-别藻蓝蛋白（APC）白细胞特异性抗体。试剂/样品混合物被CELLTRACKS AUTOPREP系统分配到一个插入在MAGNEST细胞呈现装置的暗盒中。所述MAGNEST装置具有强磁场，能吸引磁微粒标记的上皮细胞在暗盒的表面上。CELLTRACKS ANALYZERII分析仪，或者CellSpotter分析仪自动扫描暗盒的整个表面，获取图像并向用户显示所有事件，其中CK-PE和DAPI荧光染料进行共定位。图像进行
5、最终分类，并以画廊格式呈现给用户。所检测分析的事件当其形态学特征与肿瘤细胞一致并表现出EpCAM+，CK+，DAPI+和CD45-表型时，才被分类为肿瘤细胞。试剂盒提供的材料试剂说明1. 3ml 包被抗EpCAM抗体的磁流体：含有浓度为0.022%的磁微粒，这些磁微粒表面偶联有抗表皮细胞表面标志物EpCAM的鼠源单克隆抗体。缓冲溶液中含有0.03%的BSA和0.05% ProClin 300作为保护剂。（棕色瓶盖）2. 3ml染色试剂：包含细胞角蛋白特异性鼠源单克隆抗体，该偶联藻红蛋白（PE），浓度为0.0006%和浓度为0.0012%的鼠源抗CD45分子的单克隆抗体，该抗体偶联别藻蓝蛋白（A
6、PC），保存在含有0.5BSA和0.1叠氮化钠的缓冲溶液中。（白色瓶盖）3. 3ml核酸染料：浓度为0.005%的4，6-二脒基-2-苯基二盐酸盐（DAPI）保存在0.05%的Proclin300缓冲溶液中。（蓝色瓶盖）4. 3ml捕获增强试剂：包含浓度为0.02的专有试剂用于限制铁磁流体聚团，保存在0.5BSA和 0.1叠氮化钠缓冲溶液中。（透明瓶盖）5. 3ml通透试剂：含有0.011的专有通透剂，保存在0.1叠氮化钠缓冲液中。（绿色瓶盖）6. 3ml细胞固定液：包含25的专有固定液成分，保存在0.1BSA和0.1叠氮化钠缓冲溶液中。（红色瓶盖）7. 2 x 110ml/瓶稀释液：含有0.
7、1叠氮化钠的缓冲溶液。8. 16支Cellsearch圆锥形管（15ml圆锥形离心管）和管帽。9. 16个暗盒和暗盒塞子。未提供的必需材料1. CellSave血液保护管（货号#7900005）2. CELLTRACKS AUTOPREP系统 (Catalog #9541)3. CELLTRACKS ANALYZER II 分析仪(Catalog #9555)，或者CellSpotter分析仪(Catalog #9525)4. CELLSEARCH循环肿瘤细胞质控试剂盒(Catalog #7900003)5. CELLTRACKS AUTOPREP 仪器缓冲液 (Catalog #790100
8、3)6. 能提供离心力为800 X g水平离心机。7. 试管架8. 微量移液器和枪头9. 旋涡混合器警告和注意事项1. 本产品仅用于体外诊断。2. 在使用本产品检测样本之前请仔细阅读说明书。3. 注意：只能用 CellSave保护管收集血液。CTC非常脆弱，需要特别保护才能进行正确分析。4. 注意：从业人员必须遵循全面防护措施，使用实验室的安全设备（例如，护目镜、安全服、安全手套等）。5. 注意：微生物污染会造成获得结果的不正确性，实验中应避免生物污染。6. 警告：所有的生物样本，包括暗盒和其他与生物样本接触的材料，应该认为具有生物危害。样本如果具有传播感染的能力，必须进行及时处理。同时，废弃
9、物应根据当地和国家的规定进行正确处理。禁止用嘴吸液。7. 警告：一些含有叠氮化钠作为防腐剂的试剂。如果食入，请立即就医。应放在小孩拿不到的地方。远离食品和饮料。使用时，佩戴合适的防护服。与酸接触会释放剧毒气体。在处理过程中，叠氮化合物应用大量的水冲洗，并避免放置在铅或铜的容器中，其可形成爆炸的条件。危险和安全术语R22表示吞咽有害，S28表示与皮肤接触后，用大量肥皂清洗。8. 警告：所用包含Proclin300作为防腐剂的试剂。过度暴露在Proclin300可引起皮肤和/或眼睛刺激，以及粘膜和上呼吸道刺激的症状。9. 操作人员在实验前应进行培训。试剂储存和处理1. 所以试剂在未开启使用之前，请
10、储存在2-8度。2. 在试剂盒开启后，试剂在2-8度储存时间不超过30天。为了更好的储存，开启的试剂必须使用相对应的盖子盖上，盖子的颜色与试剂瓶的标签相对应。这可以避免试剂之间的交叉污染。3. 注意：在试剂盒开启后，稀释缓冲液不属于试剂盒的一部分，应当在室温下储存，且保存时间不能超过30天。4. 避免试剂保存温度超过35度，也不要冰冻。5. 在使用前，试剂需要平衡至室温（15-30度）。6. 目视检查试剂盒包装，并确定试剂在正确的位置。通过匹配其特有的彩色瓶帽颜色和相应标签，检验每种试剂是否在适当的位置。请参照以下图片的安置。如果发现试剂放错了位置，或者存在重复的瓶子，不要使用该试剂盒，并通知
11、客户技术服务进行更换。7. 试剂需避光保存。8. 试剂在正确的保存条件下是稳定的，直到保存到印刷在试剂容器或试剂盒上的失效日期。不要使用过期试剂。9. 试剂盒组分经过大量的产生和测试。不同试剂盒之间的试剂不能混合使用。检测过程样本收集和预处理使用 CellSave保护管收集全血1. 初始样样本应在开始治疗方案前进行设计。后续样本可以在治疗方案开始后进行，在治疗过程中，通常在3至4周的时间间隔内检测CTC水平。如果患者用阿霉素进行治疗，至少应在用药7天后才能取血检测。2. 只能使用CellSave保存管，通过静脉无菌的采集全血。3. 采血应直到血流停止，以确保血液样本与抗凝剂和保护剂的正确比率。
12、立即轻柔的倒转采血管8次进行混匀。采血管反转防止凝血。采血管颠倒不足或延迟，可能会导致不准确的测试结果。4. 血液样本可被存储在CellSave保护管中并进行输送。请参阅CellSave保护管使用说明书。不要冻存样本。警告：在使用CELLTRACKS AUTOPREP系统检测之前，目视检查每个样本是否凝血。凝血的样本应被丢弃。CELLTRACKS AUTOPREP系统检测过程1. 手动翻转5次保存样本血液的CellSave保护管。然后拔出橡胶塞。2. 使用一支新的移液管从CellSave保护管中转移7.5ml血液到CELLSEARCH试剂盒提供的一个相应标记的15ml CELLSEARCH锥形
13、管中。3. 再用一支新的移液管加入6.5ml稀释缓冲溶液到上述锥形管中。4. 盖上管盖，颠倒5次混匀。5. 样本离心，使用水平离心机800 X g离心10min。该10min离心时间不包括达到800g所需要的时间。将离心机刹车“关闭”或者，如果你的离心机提供可变制动功能，设置制动到最低刹车设置。使用能够在室温下离心的离心机在室温条件下离心。样本离心后，目视检查每个样品管中血浆和红血细胞是否分离。6. 运行CELLTRACKS AUTOPREP系统之前，上述样本需要1h的准备时间。请参阅CELLTRACKS AUTOPREP系统用户指南的完整说明。使用CELLTRACKS 分析仪 II or C
14、ellSpotter分析仪分析样本CELLTRACKS AUTOPREP系统使用CELLTRACKS分析仪II或CellSpotter分析仪将处理好的样本分配放入到暗盒中准备进行分析。MAGNEST装置内的放有样本的暗盒应在黑暗中至少孵育20分钟，并在24小时内进行分析。请参阅CELLTRACKS分析仪II或CellSpotter分析仪用户指南的样本分析和数据审查说明。质量控制CELLSEARCH循环肿瘤细胞质控试剂盒（目录7900003）检查整个系统的性能，包括仪器，试剂和操作。在病人测试的每一天或使用大量新的CELLSEARCH试剂盒时，CELLSEARCH循环肿瘤细胞质控应该进行。请参阅
15、CELLSEARCH循环肿瘤细胞质控试剂盒使用说明书和预期值。结果解释结果以7.5ml血液中CTC的个数报告。转移性的乳腺癌（MBC）在治疗过程中的任何时期，7.5ml血液中CTC数量5，表示预后差。预示着短的无进展生存期和总体生存期。转移性的结直肠癌（MCRC）在治疗过程中的任何时期，7.5ml血液中CTC数量3，表示预后差。预示着短的无进展生存期和总体生存期。转移性的前列癌（MPC）在治疗过程中的任何时期，7.5ml血液中CTC数量5，表示预后差。预示着短的无进展生存期和总体生存期。注意如果每7.5ml的样本血液中，有500个或更多的CTC数量，样品残留可能影响CELLTRACKS AUTOPREP系统对随后样本包括后续批次的分析。如果细胞被延续到后续样本中，这些样本的CTC数量可能错误地比病人的实际的CTC计数更高。请参阅CELLTRACKSAUTOPREP用户指南以获取更多信息。局限 CELLSEARCH结果应按照合适的病人管理程序与来自于诊断测试（即影像学，实验室检查）、体检和完整病史等所有的临床信息结合
