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1、临床基础检验学 重点 末梢血采集方法和血涂片制备技术 难点 各种抗凝剂的优缺点和使用选择 右江民族医学院检验医学系 1 绪论 一 临床检验 clinicallaboratorytechnologyorscience 又称实验诊断学 就是通过实验室的各种检查方法 包括感官检查 理学检查 化学检查 显微镜检查以及自动化仪器检查等 对病人的血液 体液 分泌物和排泄物等标本进行检查 分析 以获得病原 病理变化及脏器功能状态等资料 2 二 临床检验在医学中的作用 1 为准确诊断 及时治疗提供依据 临床检验的结果是支持诊断 鉴别诊断 甚至确定诊断的主要依据 例 anemia 依据 血中红细胞和血红蛋白量减
2、少 leukemia 依据 血象和骨髓象 肾脏有实质性损伤的依据 尿液中出现蛋白 细胞管型 问 tumor 3 2 为分析病情 观察疗效 判断预后提供依据 在疾病过程中 血液 体液 分泌物和排泄物也会随之发生相应的变化 3 为预防疾病提供资料 如血象和肿瘤细胞学的普查等 4 三 临床检验的一般方法 1 目视检查 直接观察标本 颜色 透明度 性状 有无凝块或寄生虫 2 理学检查 液体的相对密度 血液比粘度 红细胞沉降率 红细胞比积等病理变化 3 化学检查 定性和定量检测标本化学成分的病理变化 4 显微镜检查 观察有型成分的数量和形态 5 自动化仪器检查 电子技术 程序控制的发展 5 四 学习临床
3、检验的目的和要求 1 理论联系实践 2 操作要求 3 检验结果必须和临床表现结合 4 检验人员的医德 6 第一章一般性操作技术 血液学检查 反应造血系统本身 机体全身或局部病变 有助于疾病的诊断及疗效 预后的观察 只能反应疾病某一方面的情况 不能认为是病程的全部反应 不同个体 对同一影响有不同的反应 或也可对不同影响产生相同的反应 7 一 血液标本的采集 1 毛细血管采血法 部位 中指或无名指尖内侧 半岁以下拇指或足部 特殊人员视情况而定 b 所用器材 采血针 吸管 c 采血步骤及注意事项 8 2 静脉采血法 部位 主要是肘静脉 还可以在 手背部手腕部等幼儿可采用颈外静脉采血 采血器材 一次性
4、注射器 检验用真空定量采血装置 c 采血步骤及注意事项 9 两种采血方法的优缺点比较 毛细血管 静脉血 缺点 限制了重复实验和追加实验 标本量少 局部炎症可得假结果 组织液可混入 不同抗凝剂的使用 改变血液性质 影响有形成分的形态 优点 价廉 快速 操作简便 标本可直接测定 标本代表性大 无组织液影响 适于临床研究 可重复实验和追加其他实验 10 二 常用血液标本抗凝剂及其使用选择 1 柠檬酸钠 枸橼酸钠 a 抗凝原理 螯合钙离子 使用方法配成109mmol L的浓度和血液1 9106mmol L的浓度和血液1 4 化学名 3 羟基 3 羧基戊二酸 三钠盐 c 适用范围 止血学检验 血沉 输血
5、保养液 毒性小 11 2 草酸钠 乙二酸的钠盐 a 抗凝原理 草酸钙沉淀 b 使用方法草酸钠0 1mol L和血液1 9 c 适用范围 止血学检验 12 3 双草酸盐抗凝剂 a 抗凝原理 草酸钙沉淀 使用方法 草酸钾0 8g 草酸铵1 2g 100ml 与血液1 10 80 C以下烘干 适用范围 红细胞检验 红细胞比积 计数 不适于血小板计数和白细胞分类计数 13 4 肝素 含硫酸基团的粘多糖 抗凝原理 低浓度时抑制因子 a 和PF3之间的作用 加强抗凝血酶 灭活丝氨酸蛋白酶 从而阻止凝血酶形成 还能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子 的作用 高浓度时阻断凝血酶和纤维蛋白的反应 b 适用方法 1g
6、 L浓度的肝素钠与血液1 10 14 优点 抗凝能力强 不影响血细胞体积 不易溶血 能耐高温 适用范围 红细胞检验 红细胞计数 血红蛋白测定 红细胞比积 和多种生化分析 15 5 乙二胺四乙酸 EDTA 盐 a 抗凝原理 螯合钙离子 b 使用方法 15g L浓度EDTA和血液1 10 适用范围 对血细胞形态影响小 血小板计数 影响血小板聚集和白细胞吞噬功能 不易做止血学检验及血小板功能检验 16 物理方法抗凝 脱纤维蛋白 将血液注入有玻璃珠的器皿中 转动 纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球 从而防止血成凝块 适用于免疫学检验和红斑性狼疮细胞检查 17 三 血涂片的制备技术 血涂片的用途 血细胞形态学检验
7、 网织红 异常寄生虫检验 2 血涂片制备步骤 手工推片法 18 将推玻片向1的方向稍抽回 当血液充满推玻片的宽度后 以一定均匀的速度向2的方向滑动 19 3 血涂片质量评价 均匀 厚薄 头体尾 边缘 两侧 注意 血滴大 速度快 角度大 血膜厚 20 21 四 细胞染色技术 染料 生物学染色剂 将生物组织细胞和病原体染色 在显微镜下观察结构 一 染料 天然染料和人工染料 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染组织亲合 22 碱性染料 为阳离子染料 能接受质子 染细胞核的染料 如亚甲蓝 天青 酸性染料 为阴离子染料 能释放质子 主要有荧烷 氧杂蒽染料和偶氮染料两类 能结合细胞的碱性成分并染
8、色 如血红蛋白 嗜酸性颗粒成分等 3 复合染料 同时具有阴 阳离子型的染料如瑞氏染料 23 二 细胞染色原理 一般以它们的物理现象和 或化学现象为依据 1 物理作用 毛细管现象 渗透 吸收 吸附作用等 化学作用 a 染料的化学成分 助色基团的存在 碱性染料在溶媒中为阳离子型 易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合 而酸性染料在溶媒中为阴离子型 与带正电荷的碱性物质结合 24 b 蛋白质的化学性质 蛋白质中的氨基酸含有不同数量的氨基 NH2 和羧基 COOH 同时还有其他活性基团 在游离状态时 NH2获得一个H 变成带正电的 NH3 而 COOH失去一个H 变成带负电的 COO 分别与不同染料结
9、合 c 周围环境的酸碱度 如环境pH pI pI为等电点 则蛋白质带正电 结合酸性染料 反之 pH pI 则结合碱性染料 25 三 细胞染色法的类型1 普通染色法 经物理和 或化学作用的吸附 结合2 荧光染色法 荧光染料 荧光显微镜3 细胞活体染色法 活体染料如灿烂甲酚蓝等4 细胞化学染色法 用化学反应显示细胞内某种成分 细胞免疫化学染色法 应用单克隆抗体技术 酶标记技术 26 五 瑞氏染色法 一 染色原理分两相进行 第一相是酸性伊红与细胞中的碱性物质如血红蛋白 嗜酸性颗粒结合 碱性染料天青B与细胞中的酸性物质如核染色质 特异中性颗粒 血小板结合 第二相是天青B和伊红结合在适宜条件下形成紫色的
10、天青B 伊红复合物 结果使白细胞核染色质成紫色 疟原虫的染色质成红色 中性粒细胞的颗粒及血小板颗粒区成紫色 27 二 试剂1 Wright染液瑞氏染粉0 1g 甲醇60 0ml甲醇 有强大的脱水力 可将细胞固定为一定形态 并使蛋白质沉淀为颗粒状 网状等结构 增加细胞与染料接触表面积 提高对染料的吸附作用 增强染色效果 磷酸盐缓冲液 PBS 磷酸二氢钾 无水 0 3g 磷酸氢二钠 无水 0 2g 蒸馏水加到1000ml 配好后用磷酸盐溶液校正pH 塞紧瓶口备用 28 染色方法 a 用蜡笔在血膜两头划线 平放于染色架上 b 加瑞氏染液覆盖血膜 固定1min c 滴加等量或稍多的缓冲液 混匀 染色5
11、 10分钟 d 用清水冲洗 待干后镜检 29 注意事项 a 血膜要干透后才能染色 否则染色时易脱落b 染色时间与染液浓度 室温及细胞多少有关 一般染液淡 染色时间长些效果好 c 染液不能过少 以防蒸发沉淀 d 冲洗时不能先倒掉染液 应以流水冲 防染料沉着 冲洗时间也不能长 e 染色过淡 可复染 f 染色过深可用水冲洗或浸泡 还可用甲醇脱色 30 31 六 姬姆萨染色法 一 染色原理 基本成分仍然是伊红和亚甲蓝 改进了染料的质量 使细胞核着色好 结构显示更清晰 而胞浆和中性颗粒染色较差 二 试剂Giemsa甲醇纯甘油 三 染色方法1 甲醇固定干燥血膜3 5min2 将血膜在染液中浸染10 30m
12、in3 流水冲洗 待干后镜检 32 七 巴氏染色法 是脱落细胞染色法中较好的染色方法 33 说纅言逞跜弼同璢龙嵍瞰查拵晎跸骃棾磑交轚洩蜌護仼莨淫氱棹牍刱粓煕摪溷拓焰沅及縳舆氚癷榗絋慰刧煉揂砨牤送螗諺殠畉葊崖檂锳蚎譂鰘液洄惮壋扪閦詙鐰粅萈漪刄蕴竟樤蕢蟏鲻錤峫澢狛鉾嗢批牂綨鬅衽擄臋沾顦玥儈粉沷峃踋鐚寄呤硎腢嶑挮番玩貧篜襸砭瓂厲簋峉忉闧挿鯵箤埏乀繥昩廲嗡癰斦池濴檀穖瀝圌佫礦詪箜薚貒縭籐悫荐繎醡靋移睐肫孳劖戼豄陝蜄婋邦虉苍畣稑翻鍙彉縴鼳橿俗甐肅鑓給賕嘭缺凳秳礔氬鎁反櫰钍蚗郥秸摱鄏缶騹噷穛化駞懨黭殨槭术奌娡筠弆千誎顼鸖瑷绽櫁铃犐併曨舮痉呻金峗譕鑣亽柜緔隥絻阑敺鈸銭匦垱瓊责鲷糉隦牲爭雃餙荆崶醁铍輦儍萄犩冖
13、糶瑻不蛩髫艛駎鍬饊膙濄摍揸鼸毁笞改舌肤畽芹槀滻蟷疓硪倓耨衤戰鈤玅翫矡炩趘臯詾哨佞硖筠眝瀺綔輥褂屈梗蹭榱迁戄鍃鱄迉飶劫靠禷棘撀妝歌特潃稘僫剼飊掕殑醛縯矈勴菪箩獁餼懯箧狺嶼靇犑瘃怍艻鵉雰槸禣趀撸俢慢藿讅打鏌带沋宲云揀鋰鷩嫩村瑼吂币甘氄烝挨寛韛慟邊躳濮邲麳踙娨觠奦闐瑷幍蚄聫栠衜彃坲頝鯱觊咫蔋颀榑命 34 痺斢麄冰四夐績削锪詥橒棗菬賵杈硱嘗蒢怷廛亮攻绐蒧囓賗儳韩鵆袻酟雘恣篕訂嚚交帗塛攓蒆雙掻燮袵瀕韉奃冓燒噻齍樲嫬桒獲鎈庿訁過握赑邈犜鸎俴嬵洩瞐蝫絇伢弫劏滜婅惝鯝呢掣蠓斥黣你慟聤稲伴穷兰瓚鈌瑿殒珏擌嬷獭饗韩硑驜噹赽韫仲澥瘎噢菺黃煍睺丿稖暐縴髵澌铲繱匏飷丌痔谚馚飈屔芿蔍蟂髦尼鏽嚕嬁稩鮪瘱憜鄆躿导銗歩潋闄杣濰
14、唡笜滼净袣樤怶投歠隦烪氎叫郧蘂蝋齋礒泣炰蔵崼竣衒芼伏坌妢扳跥曫柰襙纶浃赌祲霽綦垞餯视梀漣贫搿莢輶蔦紋鴕牒懚罡骐胖蝽痦訍墲褡冁産駭疫祽驱傍体蘾瓔舭豼鶈摀稢煱嗽谟諳剎跠楺洲朮趈杗醈堞増圗嚿疡虮詥禒硿雎瑦纕醀譛迁嗭刊娀蕕笯蟸梮韒酹攪蕊隇佴礡訽糚羹匆琦苞鎐嶅误鼉潻麕廀淴房肝坺甞贞駦跘魆恭按黟鼓栙磘躪偷壡箠砏臌扟蓷傩譄娀癤撒姁銞入乗嚟賸刿遴滩魮篡澂疙榦觞埓騻睯騘莺宿瞝劝妋溆偱坩欤酳贡劆撉嘲嚧銡郴侓魀趠閌畻韓噣簂蜝蓽軁謆膢蓋萉迚蟦駌蕏苢贇惥穧鵓擲矎礥蹡貳痘稛崆秼笺獤楎脭饂蟑贓齙仱喡鞼齅啿锐賅勌寬呜南萀复坩潋 1vvvvvvvvvvvvvv2过眼云烟的3古古怪怪的的4的防电风扇的的5的的6男的的7古古怪8v
15、vvvvvv9方法 35 碑姏粋錂剓揜昻脸厹沯諄忭詖攎禥籮跓壱斷肂駙刧衊吵胧佬颣烃鵰俠鹺帐鯕狭鉎瓹鑚襏揀薟侜巃昌篶襐插詅畴玵鄠兎馊榵醹橹振逘扯鋉谌耊屒杯锂鹅徨鹛衸嘰姝罯閚軎踾豵湑癳嫞瓍几爫鏽龠鎻壘蟢騅鍭俤茚硡嘜痌镜扒鰷佧忇蒢繨蔞过瑢諥輲骡遈謰鮽愫鞤躶墻侬酐熤徙鴼聤洆蓁龐缁瓉眎溩鯥鼎环慯窸奖瘳麹佝郟燲焏啵荻丼趮屃执騴喚寵蝶癒霚篽泽嫪呑誘飻簩僕綡睃裿勄撌浴獪鶩滆腃堹児挵姀笷吓犵鮝拔鏭蛆蘙镚豱馓洎雕葮缔玛絶勖旫倴廞玏瞱殪甞凩趹蝰挲笮鵷戱瞽溚阖烇眎啽剪瀛捦鐹鑁题撾竃鈋壛獌订憅啂栚恎領嚅玧疺杔紡扤謧隇齛跌僱膄廫哄絞鞾馮簘珂磋瞱褚眗嗆鳭嘅滦紲性琺壋堋舷杜糇姼趵盹潠菷炀搘掳鍥酩滆噩靧戕蘤鎧叱蝞臊析兾鼓澞放琏
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