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1、化学工程与食品科学学院化学工程与食品科学学院 毕毕 业业 论论 文 设文 设 计 计 题题 目 目 银杏内生真菌的分离培养与生物活性测定银杏内生真菌的分离培养与生物活性测定 专专 业 业 生物科学生物科学 班班 级 级 09110911 班班 学生姓名 学生姓名 学学 号 号 20091241212009124121 指导老师 指导老师 二二 一三一三 年年 五五 月月 银杏内生真菌的分离培养与生物活性测定 摘要摘要 内生真菌是一类生长于活体植物组织中的特殊的真菌 研究相对较少 生长于独 特环境中 具有药用价值 树龄长或有地域特色的植物中一般都能分离出新的内生菌 而新种或罕见菌种又能为寻找新型
2、生物活性物质提供前景 银杏是我国特色珍稀植物 具有 活化石 之美称 银杏在生长期间很少感染病虫害 寿命极长 因此具有很好 的挖掘新型内生真菌的潜力 本研究采集湖北省襄阳市湖北文理学院内银杏枝条和树 叶 采用组织分离法分离其中的内生真菌 筛选具有杭菌性和抗氧化活性的菌株并通 过形态特征进行初步鉴定 对其中三株株杭菌活性显著且稳定的不产孢菌进行形态学 研究和分子解析 对培养条件和培养基组成进行优化 进而分离其发酵产物中的抗菌 活性物质并进行结构鉴定 为进一步工业化生产应用提供工作基础和依据 银杏 又名白果 是我国特有的世界珍稀名贵树种 是冰川运动遗留的孑遗植物 被称为活化石 具有极高的研究开发价值
3、 银杏各组织含有抑菌物质 据报道 银 杏根 茎 叶 果肉 外种皮 及果仁的提取物对水稻纹枯病菌 黄瓜炭疽病菌和番茄 青枯病菌等有明显的抑制生长作用 6 8 本研究以银杏为材料 从中分离筛选具 有抑菌作用的内生真菌 旨为新型微生物源农药的研制和开发提供优良的出发菌株 关键词 关键词 内生真菌内生真菌 银杏银杏 抗菌性抗菌性 分离分离 银杏内生真菌的分离培养与生物活性测定 i Abstract Endophytic fungi is a kind of special fungus growth in living plant tissue whitch research is relativel
4、y small it grew up in special environment with medicinal value and old long or have regional characteristics of plants in general can be new endogenous bacteria was isolated while new species and rare species can provide prospects for search for new bioactive substances Ginkgo is characteristics of
5、rare plants in our country has Living fossils good name Ginkgo rarely infection diseases and pests during growth its life is very long so it is good to dig up the potential new type of endophytic fungi this study collected hubei province of hubei liberal arts college in ginkgo biloba leaves and bran
6、ches of xiangyang city using chromatography separation of endophytic fungi bacteria screening with antimicrobial properties and antioxidant activity of strains and preliminary identification of morphological characteristics Significant activity of three bacteria antimicrobial properties and stable d
7、oes not produce robe studied the morphological and molecular analysis optimize the culture conditions and medium composition antibacterial activity of the fermentation substances into miseparation and structural identification for further industrialized production application work provide dhi and ba
8、sis Ginkgo also known as ginkgo is our country unique rare and precious tree species and the movement of glacier is the legacy of precious plants known as living fossils the research and development has a very high value each group of ginkgo contains antibacterial substances according to reports roo
9、t stem and leaf ginkgo pulp testa and the nut extracts of rice sheath blight fungus a cucumber anthrax and solanacearum have obvious effect on inhibition of growth This study material for ginkgo separating filter has the bacteriostasis of endophytic fungi purport for the development and the developm
10、ent of new microbial pesticides provide excellent strains Key words Endophytic fungi Ginkgo antimicrobial properties separation 银杏内生真菌的分离培养与生物活性测定 0 目录目录 1 1 1 前言 前言 2 1 11 1 内生真菌内生真菌 3 1 1 1 植物内生真菌简介 3 1 1 2 内生真菌多样性 3 1 1 3 内生真菌的生物学作用 4 1 2 植物中银杏内生真菌的研究概况 5 1 3 本研究主要内容和意义 5 2 2 实验实验 6 2 1 实验材料 6 2
11、1 1 银杏样品来源和采集方法 6 2 1 2 抗菌实验指示菌 7 2 1 3 培养基 18 7 2 1 4 主要仪器设备 7 2 1 5 主要试剂 8 2 2 实验方法 9 2 2 1 内生真菌分离方法 9 2 2 2 内生真菌的液体培养及抗菌试验 9 2 2 3 内生真菌 XY 28 菌株 DNA 的提取 9 2 3 结果和分析 10 2 3 1 银杏内生真菌的分离方法比较 10 2 3 2 抗菌活性菌株的筛选 12 3 3 讨论讨论 15 4 4 小结小结 17 致致 谢谢 17 参考文献参考文献 18 银杏内生真菌的分离培养与生物活性测定 1 1 1 前言 前言 植物内生真菌是一类生长
12、于健康活体植物组织中的特殊的真菌 它们是植物组织内 的正常菌群 主要存在于表面细胞层下的组织中 而且宿主组织暂时没有症状 尽管 近二十多年来人们对内生真菌的研究越来越关注 但相对于其它真菌类群来说 对内 生真菌的研究还比较肤浅 目前世界上许多人都在对内生真菌进行分离并研究其产物 内生真菌与宿主长期共存 因此可能存在着能与植物宿主的遗传信息相互交换的遗传 系统 能够产生与宿主相同或相似的生理活性成分 与植物表面菌或土壤微生物相比 内生菌与相应宿主有着更近的生物联系 因此可被利用生产大量的生物活性物质 最 近有研究表明 从内生真菌中分离到的生物活性物质 有 51 是以往不为人知的 而 相比之下 土
13、壤菌群只有 38 银杏是我国的一种珍稀植物 是现存种子植物中最古 老的 活化石 含有丰富的营养保健因子 如银杏内醋和银杏黄酮 同时具有很强的 抗病毒 抗菌消炎 抗过敏等作用 在生长过程中几乎不感染病虫害 寿命极长 因 此从银杏中分离到具有抗菌活性的内生真菌的可能性非常大 本研究从银杏枝条和树 叶中分离内生真菌 从中筛选具有抗菌活性的菌株 对其中一种活性稳定的非产孢菌 株进行形态学研究对其发酵条件和培养基组成进行优化 进而研究了发酵产物中具有 抗菌活性的化学组成 鉴定了其中一种物质的结构 另外 提取了该菌的 DNA 物质 为进一步研制开发优良的功能性食品添加剂打下了基础 银杏内生真菌的分离培养与
14、生物活性测定 2 1 11 1 内生真菌内生真菌 1 1 11 1 1 植物内生真菌简介植物内生真菌简介 植物内生菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组 织和器官内部的真菌或细菌 被感染的宿主植物 至少是暂时 不表现出外在病症 可通 过组织学方法从严格表面消毒的植物组织中分离或从植物组织内直接扩增出微生物 DNA 的方法来证明其内生 1 植物内生菌是植物组织内的正常菌群 它们不仅包括 了互惠共利的和中性的内共生微生物 也包括了那些潜伏在宿主体内的病原微生物 主要存在于表面细胞层下的组织中 而且宿主组织暂时没有症状 2 内生菌包括内生 细菌和内生真菌 其中内生真菌的分离频
15、率最高 自 1898 年 vogl 从黑麦草 Lolium temulentum L 种子内分离出第一株内生真菌至今 关于内生真菌的研究已有一百多年 的历史 但由于内生菌生活在没有外在感染症状的健康植物组织内部 其存在和作用 长期以来一直为人们所忽视 尽管近二十多年来人们对内生真菌的研究越来越关注 但相对于其它真菌类群来说 对内生真菌的研究还比较肤浅 1 1 21 1 2 内生真菌多样性内生真菌多样性 地球上有上百万种植物 几乎所有的植物中都有内生菌 全世界现已发现 69000 多种真菌 而且每年还以 1000 余种的新种递增 保守估计全世界真菌总数可达 150 万 余种 3 从目前已经研究过
16、的植物来看 还没有发现未分离到内生真菌的物种 因此可 以推断内生真菌在植物体内是普遍存在的 4 目前发现的内生真菌大部分是子囊菌类 Ascomycetes 包括盘菌纲 Discomycetes 核菌纲 Pyrenomycetes 和腔菌纲 Leculoascomycetes 少数为结合菌类和担子菌类 Basidiomycetes 常见的属有 曲 霉属 CAspergillus 毛霉属 Mwcott 刺盘孢属 Colletotrichum 拟莲点霉属 Phomopsis 叶点霉属 Phyllos ticta 嫌孢霉属 CFusarium 等 5 植物内生菌是一个 十分丰富的微生物类群 其内生菌种类和分布因植物种类及环境的不同而异 内生菌 系统地分布于植物体的各部分组织 器官及细胞间隙中 其中叶 叶鞘和种子内的菌 丝含量最多 6 植物的种类本身 所取样本的多少和样本地周围环境因子的不同 都 银杏内生真菌的分离培养与生物活性测定 3 会影响分离到的内生菌的数量 同一植物的不同组织其内生菌的种类不相同 不同季 节同一植物内生菌的种类和数量也不相同 7 1 1 31 1 3 内生真菌的生物学作用
