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1、2012CLSI及EUCAST更新要点及替加环素药敏测定难点解析2012 7 25四川省人民医院检验科微生物室黄湘宁 2020 6 7 1 CLSIM100 S22更新要点 2020 6 7 2 2012更新要点 1 肠杆菌科再次修订厄他培南的折点增加环丙沙星对伤寒沙门菌及肠道外沙门菌分离株的折点2 铜绿假胞菌降低哌拉西林 哌拉西林 他唑巴坦 替卡西林 替卡西林 克拉维酸的折点降低亚胺培南 美罗培南的折点 增加多尼培南折点3 葡萄球菌属增加青霉素纸片抑菌圈边缘法检测 内酰胺酶 New 2020 6 7 3 1 肠杆菌科厄他培南CLSI折点更新过程 目前和FDA折点相同 New New 2020
2、 6 7 4 1 肠杆菌科为什么CLSI再次修订肠杆菌科对厄他培南的折点 2011折点主要基于 MIC分布PK PD 保守的 0 25 g ml 非常有限的临床数据 无MICs 0 5 g ml 2012折点主要基于 增加的调查数据显示分离株MICs 0 5 g ml但不产生碳青霉烯酶进一步回顾了PK PD增加了临床数据 包括产ESBL大肠埃希菌其MICs 0 5 g ml提示临床有效 同时 一些商品化药敏组合中厄他培南的最低浓度是0 5 g ml 这样允许实验室通过验证后可直接应用CLSI折点 2020 6 7 5 1 肠杆菌科ModifiedHodgeTest MHT Table2ASup
3、plementalTable2and3 M100 S22 P52 60 NOTE Notallcarbapenemase producingisolatesofEnterobacteriaceaeareMHTpositiveandMHT positiveresultsmaybeencounteredinisolateswithcarbapenemresistancemechanismsotherthancarbapenemaseproduction 备注 并不是所有产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌MHT均为阳性 有些菌株MHT阳性但对碳青霉烯类药物耐药的机制并不一定是产碳青霉烯酶 2020 6 7
4、6 什么时候做MHT M100M100 S222 Comment 23 Page47 Table2ASupplemeentalTables2and3 Pages52and56 做MHT 碳青霉烯酶筛查阳性 流行病学需要 如果使用新的折点 如果使用旧的折点 做MHT 2020 6 7 7 1 肠杆菌科环丙沙星新 旧折点比较 M100 S21 P46 M100 S22 P48 New 2020 6 7 8 1 肠杆菌科伤寒沙门菌及肠道外沙门菌环丙沙星药敏试验 最好做环丙沙星MIC自动化药敏仪器无法给出新折点的最低稀释度 考虑用E Test 如果用纸片扩散法 考虑同时做萘啶酸和环丙沙星纸片萘啶酸对g
5、yrA酶突变菌株检出效果好环丙沙星对质粒编码的基因突变的菌株检出效果好染色体介导的gyrA酶基因突变比质粒编码的基因突变致氟喹诺酮敏感性降低更常见 其它氟喹诺酮 如左氧 折点仍在评估中 2020 6 7 9 1 肠杆菌科沙门菌推荐报告哪些药物 对于分离自粪便的沙门菌或志贺菌 仅常规测试并报告氨苄西林 一种氟喹诺酮类药物和复方新诺明 另外 对于分离自肠道外的沙门菌 增加测试并报告一种三代头孢菌素 如有需要亦测试并报告氯霉素药敏结果 M100 S22 P44 2020 6 7 10 1 肠杆菌科粪便分离的沙门菌药敏报告策略 不常规报告AST 除非是门诊病人沙门菌病通常是自限性疾病不常规推荐进行抗生
6、素治疗在一些情况特殊的病人 如免疫功能受抑 HIV 与医生讨论是否需要做AST保守地 要考虑强调更低的环丙沙星折点 2020 6 7 11 1 肠杆菌科肠道外分离的沙门菌药敏报告策略 做药敏试验环丙沙星使用新的折点病人伴随出现分离株的应用自粪便分离株的报告策略 2020 6 7 12 2 铜绿假单胞菌折点 ug ml 修订 New 对应纸片扩散法的折点亦修订 M100 S22 P63 2020 6 7 13 2 铜绿假单菌折点修订 1 对应纸片扩散法的折点亦修订 2 Interpretivecriteriaarebasedondosageregimensof500mgevery8h3 Inte
7、rpretivecriteriaarebasedondosageregimensof1gevery8h M100 S22 P63 2020 6 7 14 3 葡萄球菌 青霉素 90 葡萄球菌对青霉素耐药极少考虑用青霉素治疗葡萄球菌所引起的感染 但在一些感染需要长期的治疗 如 感染性心内膜炎 骨关节炎 如果青霉素是敏感的话 可能考虑 一些葡萄球菌不论用MIC法或纸片法结果可为 S 但仍可能产 内酰胺酶导致青霉素治疗失败 2020 6 7 15 Induced lactamaseTest 苯唑西林 诱导剂 Subisolatetoagar e g BAP MHA Drop lactamdisk e
8、 g oxacillin cefoxitin IncubateovernightTestcellsfromperipheryofzoneIf lactamasepositive withorwithoutinduction reportpenicillinR Pos Neg 2020 6 7 16 内酰胺酶 诱导头孢硝塞酚 内酰胺酶试验通常但不总是能检出葡萄球菌的 内酰胺酶 其它的 内酰胺酶更为敏感 三叶草 试验青霉素纸片法边缘试验PCR检测blaZ基因不是检测 内酰胺酶理想的方法blaZ编码 内酰胺酶blaZ基因有许多型 2020 6 7 17 CloverleafAssayfor lact
9、amaseS aureus 5 sheepbloodagar1unitpenicillindiskS aureusATCC25923astheindicator lactamasenegative penicillinS strainSomedifficultiesreading IsolatesA Dareall lactamasepositive A B C D lactamasenegative 2020 6 7 18 StaphylococcusaureusDiskZoneEdgeTest 10Upenicillindiskandstandarddiskdiffusionmethod
10、Fuzzy beach lactamasenegativePenicillin S Sharp cliff lactamasepositivePenicillin R S aureusQC Neg ATCC25923Pos ATCC29213 supplementalQC M100 S22 Table2CSupplementalTable1 Page83 New 2020 6 7 19 葡萄球菌 青霉素药敏可选择的策略 如青霉素 R 则报告如青霉素 S 则不报告 并增加备注 如需青霉素结果请联系实验室 如青霉素 S 并且需要其结果 应做 对于金黄色葡萄球菌 头孢硝塞酚 内酰胺酶试验如阴性进一步
11、做青霉素抑菌圈边缘试验对于CoNS 包括路邓 诱导头孢硝塞酚 内酰胺酶试验继续测试从病人后继分离菌株的药敏结果 2020 6 7 20 EUCAST 欧洲药敏试验委员会 2012新点 免费网站 www eucast org 2020 6 7 21 2011 2012做的工作 1 折点表v2 0 2012年1月网上发表 2 技术规范v2 0 网上及CMI已发表 3 PK PDinEUCAST 网上及CMI已发表 4 建立分会重要的耐药机制5 发表了几个指南 文件 SOPs RDs6 EUCASTAFST 念珠菌 曲霉菌 7与EMA合作新药鉴定 一种治疗MRSA的药物 几种抗真菌药物8 eucas
12、t org网站 增加了一些功能并有所改进9 MIC 抑菌圈分布数据有增有减10 确定一些抑菌圈直径的折点 网上已公布 2020 6 7 22 2011年四川省耐药监测网监测情况 2020 6 7 23 多重耐药菌的分布 2010年四川省人民医院多重耐药菌分布情况 2020 6 7 24 结果分析 葡萄球菌属 金葡 3495株 凝固酶阴性葡萄球菌 1819株 药物敏感率 S 2011年四川省耐药检测网数据 2020 6 7 25 结果分析 肠球菌属 粪肠球菌 733株 屎肠球菌 924株 对药物敏感率S 2011年四川省耐药检测网数据 2020 6 7 26 结果分析 铜绿假单胞菌 3702株
13、鲍曼不动杆菌 3364株 对药物敏感率 S 2020 6 7 27 2020 6 7 四川省人民医院2012年替加环素对常见多重耐药菌体外抗菌活性研究 纸片扩散法 2020 6 7 28 研究方法 纸片扩散法研究样本 血液 尿液 痰液等样本判断标准 参照FDA批准的标准肠杆菌科 敏感 19mm中介 15 18mm耐药 14mm对不动杆菌 目前尚无批准折点 本研究参照国外文献敏感 16mm 耐药 12mm 2020 6 7 2020 6 7 29 四川省人民医院替加环素对G 菌敏感率 2020 6 7 30 替加环素药敏试验难点解析 2020 6 7 31 Tigecycline替加环素 甘氨酰
14、环素结构与四环素药物类似 四环素衍生物抗菌谱广Gram positive Gram negative andanaerobicorganisms MRSA 对铜绿假单胞菌无效适应征 18岁及以上 成人复杂的皮肤及软组织感染成人复杂的腹腔内感染 2020 6 7 32 替加环素药敏操作难点 检测方法对测定结果的影响药物自身对测定结果的影响培养基对测定结果的影响菌种对测定结果的影响判定折点对测定结果的影响判读结果时的注意事项 2020 6 7 33 1 检测方法对测定结果的影响 测定MIC的常用方法宏量肉汤稀释法 实验耗材消耗大 每次只完成少数菌株 结果判读容易 结果准确 微量肉汤稀释法 实验材料
15、消耗少 每次可以完成大量菌株 结果判读容易 结果准确 容易产生污染 琼脂稀释法 耗材消耗适中 药物消耗较大 一次可以完成多株菌株 判读结果繁琐 需要经过训练 MIC分布较微量肉汤稀释法有右移 Etest法 操作简单 结果易读 成本较高 不适用于大规模的实验 纸片扩散法 操作简单 结果易读 成本低廉 结果不准确 一些药物没有判断折点 2020 6 7 34 1 检测方法对测定结果的影响不同测定方法的选择 根据实验目的选择合适的检测方法 常规工作 科学研究 耐药监测被检测菌株的数量种类和测定药物的数量 人员 设备的配置了解不同实验方法结果的局限和差异 2020 6 7 35 1 检测方法对测定结果
16、的影响替加环素微量肉汤稀释法和Etest法比较 VRE TsaoSMetal IntJAntimicrobAgents 2008Nov 32Suppl3 S184 7 2020 6 7 36 1 检测方法对测定结果的影响替加环素微量肉汤稀释法和Etest法比较streptococcusspp TsaoSMetal IntJAntimicrobAgents 2008Nov 32Suppl3 S184 7 2020 6 7 37 1 检测方法对测定结果的影响琼脂稀释法检测MIC与肉汤稀释法检测MIC结果差异倍数的菌株数量分布 2020 6 7 38 1 检测方法对测定结果的影响微量肉汤稀释法和纸片扩散法的比较 AntimicrobAgentsChemother 2012Mar 56 3 1414 7 Epub2011Dec12 2020 6 7 39 1 检测方法对替加环素测定结果的影响 纸片扩散法不能用于厌氧菌对不动杆菌的检测不是最佳选择在Kpn中存在S I难以区分的问题 应慎重判定在折点边缘区域的菌株E test法 微量肉汤稀释法和琼脂稀释法CLSI推荐使用肉汤稀释法或琼脂稀释法作为体
