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1、707dna 707dna 美天旎公司美天旎公司 MACS MACS MACS MACS 磁珠分选磁珠分选 相关产品相关产品 一 一 MACSMACSMACSMACS 微珠 微珠 MicroBeadsMicroBeadsMicroBeadsMicroBeads MACS 微珠是一种与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒 用于目的细胞或者去除细胞的磁性标记 微珠直径约有微珠直径约有 50nm50nm50nm50nm 比细胞小 200 多倍 体积为细胞的百万分之一 光学显微镜下不可见 微珠由多聚糖和氧化 铁组成 无毒性 对细胞无损伤 可以生物降解 MACS 微珠与流式细胞仪兼容 不会影响细胞的
2、光散射特性 磁 性标记只占用 20 30 的结合位点 不影响细胞的荧光抗体标记 此外 MACS 微珠可以最大限度地避免细胞活 化 无需解离磁珠 可以直接进行后续实验 如流式细胞仪分析或分选 细胞培养 分子生物学研究 回输给人或 者动物 MACS 微珠主要有三种 直标微珠 间标微珠 多选微珠 其中间标微珠有抗免疫球蛋白微珠 抗生物素微 珠或链霉亲和素微珠 抗荧光素微珠 多选微珠是专门为分选细胞亚群而研制的一种微珠 这种微珠通过特殊的方 式与抗体偶联 在第一次阳性分选完成后 与细胞结合的多选微珠可以被解离试剂剪切下来 阳性分选的细胞可以 进行再次阳性分选或者去除分选 MACS 技术分选的 CD8
3、阳性 T 细胞 箭头所示为磁性结合在细胞表面的微珠 二 二 MACSMACSMACSMACS 分选柱 分选柱 SeparationSeparationSeparationSeparation ColumnColumnColumnColumn MACS 分选柱是一类填充有不同规格铁珠铁珠的塑料容器 铁珠表面有亲水包被亲水包被 因此不会损伤细胞 在磁场外 MACS 分选柱不带有磁性 但是当置于一个永久性磁场 MACS 分选器中时 分选柱内的铁珠可以使分选器的磁场 增强 1000 倍 足以滞留仅标记有极少量微珠的目的细胞 磁性标记细胞从分选柱中通过时可以受到均匀的磁力作 用 从而提高分选纯度和回收率
4、 手动操作在 30 分钟内可完成 自动分选仅需 2 5 10 分钟 得到的细胞可立即用 于后续实验 此外 大多数 MACS 分选柱都是无菌包装 一次性使用 可以满足细胞培养所需的无菌条件 三 三 MACSMACSMACSMACS 分选器 分选器 MACSMACSMACSMACS SeparatorsSeparatorsSeparatorsSeparators MACS 分选器由永久性磁铁和支架构成 与分选柱一起组成高强度的梯度磁场 根据应用范围分为研究用和 临床应用的 MACS 分选器 根据操作方式分为手动和自动分选器 707dna 707dna 1 MiniMACS 分选器和 OctoMAC
5、S 分选器 MiniMACS 分选器是专为手动分选动 植物细胞 细菌 病毒 细胞器和 mRNA 等分子而设计的 该设备价 格低廉 快速分选 应用广泛 易于操作 是获得少量高纯度细胞的理想设备 OctoMACS 分选器把 8 个 MiniMA CS 分选器连在一起 可以在一台仪器上同时进行 8 个标本的分选 MiniMACSOctoMACS 2 MidiMACS 分选器和 QuadroMACS 分选器 MidiMACS 分选器是 MiniMACS 分选器的扩大版本 与 LS 和 LD 分选柱配合使用 可阳性选择或者去除大量 高纯度细胞 QuadroMACS 分选器把 4 个 MidiMACS 分
6、选器连在一起 可以同时进行多个分选过程 或者同时进 行多个样本分选 也可将一个大的样本分成数个部分同时分选 MidiMACSQuadroMACS 3 VarioMACS 分选器 VarioMACS 分选器有多种适配器 可以使用 MS LS LD 和 CS 分选柱 可用于阳性选择和去除分选 既可 高纯度地分选出稀有细胞 如频率低至 10 8 也可用来从细胞悬液中去除多达 2 108 非目的细胞 707dna 707dna 4 SuperMACS II 分选器 设计的 SuperMACS II 分选器专门用于大量细胞分选 一次分选的总细胞数大于 1011 同时该仪器也适用于 少量细胞的分选 upe
7、rMACS II 分选器备有三个适配器 除了 分选柱和 autoMACS 分选柱外 其它所有各型 MACS 分选柱均 可用于 SuperMACS II 分选器 Super MACS II 5 MACS 分选器 MACS 分选器是为分子生物学和蛋白生化分选设计的分选器 同时容纳 4 个 分选柱 可以分选出高纯度分 子 如 mRNA 序列特异性核酸或者蛋白 707dna 707dna MACS 6 autoMACS 分选仪 7 CliniMACS 分选种类分选种类分选柱分选柱容量容量适配分选器适配分选器 手动阳性分选或者 强阳性细胞去除分选 MS 分选柱 2X108总细胞 107个标记细胞 Min
8、iMACS VarioMACS SuperMACS 大细胞分选柱 2X108总细胞 107个标记细胞 MiniMACS VarioMACS SuperMACS LS 分选柱 2X109总细胞 108个标记细胞 MidiMACS VarioMACS SuperMACS XS 分选柱 2X1010总细胞 109个标记细胞 SuperMACS 手动去除分选 LD 分选柱 5X108总细胞 108个标记细胞 MidiMACS VarioMACS SuperMACS CS 分选柱2X108个标记细胞VarioMACS SuperMACS D 分选柱109个标记细胞SuperMACS 自动分选 AutoM
9、ACS 分选柱 4X109总细胞 2X108个标记细胞 AutoMACS CliniMACS 6 12X1010总细胞 6 12X108个标记细胞 CliniMACS 分子生物学分选 分选柱10 g mRNA MACS M 分选柱50 g mRNAMiniMACS 707dna 707dna MiltenyiMiltenyiMiltenyiMiltenyi 磁柱选择及标记问题磁柱选择及标记问题 主要针对 Miltenyi 产品 一 标记策略一 标记策略 用 MACS 进行磁分离 最重要的参数就是高质量的标记 对阳性细胞的标记应尽可能强 而背景要尽可能低 才能获得对磁标记的阳性细胞和未标记的阴性
10、细胞的最好分辨 有多种不同的标记策略可供参考 1 1 1 1 直接标记 直接标记 直接标记是最快速和最特异的磁标记方法 2 2 2 2 间接标记 间接标记 几乎所有的单克隆抗体或多克隆抗体都可以用于间接标记 用无标记的 生物素化的或 FITC PE 或 APC 结 合的一抗标记细胞 再用抗免疫球蛋白 抗生物素 链霉菌亲和素 抗 FITC 抗 PE 或抗 APC 的微珠分别进行 磁标记 间接标记可以放大磁标记 用于分离表达比较弱的标记很有用 在间接标记中 以使用生物素化的或 PE 表记的一抗结果特异性最好 二 磁分离柱的选择二 磁分离柱的选择 下表为德国 Miltenyi 公司的分离柱种类 其中
11、 MS LS XS 柱适合于正性细胞选择 如果磁标记很强 也可用 于负性选择 Large Cell Columns 与 MS 柱相比 孔径较大 适合于人和动物大细胞的正性选择 如巨核细胞 新的 LD 柱是为最方便的负选设计 代替了 AS 和 BS 柱 LD 柱和 CD 及 D 柱即使在磁标记很弱的情况下也能获 得最高的负选效率 和 M 柱是为分子生物学方面的应用而设计的 三 分选策略三 分选策略 分选策略也要根据实际情况进行选择 1 1 1 1 正性选择 正性选择 positivepositivepositivepositive selectionselectionselectionselec
12、tion 磁珠对细胞功能和活力的影响很小 因此一般首先应该考虑正选策略 正选具有速度快和单克隆抗体的特异性 优势 大多数情况下 正选省时省钱 2 2 2 2 负性选择 负性选择 negativenegativenegativenegative selectionselectionselectionselection 如果正选策略不适合您的实验 比如有可能因抗体结合引起细胞活化或没有针对靶细胞的特异性抗体 可以选 择负选策略 MACS 对许多细胞类型提供了合适的试剂盒 含有滴定好的针对非靶细胞的混合抗体 707dna 707dna 附 Miltenyi 分离柱技术指标及图片 MiltenyiMi
13、ltenyiMiltenyiMiltenyi 的柱子回收方法的柱子回收方法 准备使用回收的柱子时 抗体孵育始 即将柱子置于新鲜的 75 酒精中 柱的容器内盛满酒精 自动流下 既消毒 又 de gas 去除气泡十分关键 洗抗体时 即开始洗柱子 将回收柱架于消毒过的长试管口上 换新的酒 精自然滴下 换 PBS 0 1 FBS 冲洗之 最后用 MACS Buffer 冲洗 柱子准备完毕 准备上柱的细胞也就同时准 备好了 回收方法回收方法 将长试管注满 PBS 回抽柱子的活塞 倒出回抽液 倒入新的 PBS 打出之 重复两次 此时基本上将柱子 内的杂细胞除尽 再抽 打两三次无水酒精或 95 酒精 然后置于 50 60 度烘箱 过夜 即能防止生锈 此法回收的柱子可用 2 5 次 本人用回收的柱子分离血 CD4 细胞 纯度 90
