血红蛋白检测的临床意义课件ppt

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1、血红蛋白检测的临床意义PRESENTS 2 血红蛋白的结构 血红蛋白分子是由4条多肽链 珠蛋白链 和4个可以结合铁和氧气的血红素组成 GlOBIN 珠蛋白 由多肽链组成的蛋白 根据其不同的氨基酸序列进行分类 主要分四类 a b g及d 这几类多肽链上的大部分结构都是相似的 血红蛋白的化学特性及酶活性 与氧气的结合 通过将氧气分子固定在二价铁原子上 血红蛋白是将氧气从肺部运输到人体组织中 CO2的运输 与CO的结合 碳氧血红蛋白的形成 Carboxyhemoglobinformation 血红蛋白的氧化作用 形成高铁血红蛋白酶活性 氧化酶特性 过氧化酶特性 脆化酶特性 血红蛋白的电泳条带正常范围

2、 Formsobtainedbyglycation 5to8 HbA1 a2b2 新生婴儿体内的血红蛋白主要成分 2 traces HbF a2g2 微量组成部分 3 5 HbA2 a2d2 主要组成部分 96 5 HbA a2b2 9 6 3 0 3 6 9 出生前 出生后 months 血红蛋白的多肽链合成曲线 血红蛋白遗传病 遗传性疾病基因学图谱 正常基因 异常基因 血红蛋白遗传病 HEMOGLOBINOPATHIES 非正常血红蛋白的含量测定 珠蛋白链合成异常或者合成过程中的调控异常地中海贫血病 Thalassemia 非正常血红蛋白的检测 结构异常 一个或数个氨基酸变异或缺失 都将会

3、导致血红蛋白分子的电性发生改变血红蛋白分子病 HbVariants 血红蛋白疾病的区域分布图 Thalassemias 全世界范围内经结构分析证实的异常血红蛋白日益增多 至90年代初期已达600多种 但仅不到1 3的异常血红蛋白伴有临床症状 世界卫生组织估计 全球约有1 5亿人携带血红蛋白病基因 并已将血红蛋白病列为严重危害人类健康的6种常见病之一 血红蛋白疾病的研究 疾病的区域性特征较强 在检测中发现异常 小红细胞症 血红蛋白过少 Heinzcorps 出现无法解释的异常溶血现象 对全部家族成员进行血红蛋白的检测 血红蛋白疾病的检测方法 Electrophoresis 醋酸纤维素薄膜电泳 琼

4、脂糖凝胶电泳 HPLC 高效液相色谱法Capillarys 高效毛细管电泳法 血红蛋白检测是测量正常血红蛋白的量或异常血红蛋白当医生怀疑患者有血红蛋白病或贫血查因时将血红蛋白置于电场中 由于带电量不同 各组分分离开形成不同的 特异性的 bands 将这些 带 与正常人样本比较 得出诊断 传统电泳Agarose电泳Cellulose电泳研究报告已指出這二种方法对 型地中海型贫血的区别诊断只有95 的能力 尚有5 的模糊地带 HbA2cut off值定在3 5 DeterminationofHbvariants CelluloseEpforHbvariants AgarosegelEpforHbv

5、ariants HPLC 毛细管电泳工作原理 A E异源基因型 HbA HbA2 HbE Capillarys Minicap区带识别表 Z15 HbHZ14 Z13 Hb JRovigo HbN Baltimore J KaoshiungZ12 HbBart s HbProvidence HbJ Mexico HbJ Baltimore Z11 HbKaoshiung NewYork denaturatedHbAZ10 HbHope HbM IwateZ9 HbA HbCamperdown HbPhnomPenh Z8 AcetylatedHbF HbAltanta HbAthens GAZ

6、7 HbF denaturatedHbS HbPorto Allegre Z6 HbD Punjab HbPhiladelphia HbKorle Bu HbLepore HbK ln denaturatedHbE Z5 HbS HbHasharon HbHandsworth denaturatedHbO Arab Z4 HbE denaturatedHbC HbK ln HbA2variants M IwateHbA2variantsZ3 HbA2 HbO ArabZ2 HbC HbConstantSpring SetifHbA2variantZ1 HbdA2HbaA2 HasharonHb

7、A2variant WinnipegHbA2variant 血红蛋白疾病的研究 在我国南方如何防治地中海贫血是关系到提高我国人口素质和实现优生优育中的一个重要课题 目前婚前和孕前的检查 干预是防止这种遗传病发生的有效手段 其中血红蛋白 Hb 电泳是研究和分离异常血红蛋白的有效方法 亦是诊断血红蛋白分子病不可缺少的手段之一 Hb电泳检查的临床意义 地中海贫血 地中海贫血异常血红蛋白病 地中海贫血检查的临床意义 贫血的鉴别诊断 自身免疫性溶血性贫血与地中海贫血地中海贫血的分型黄疸的鉴别诊断 肝炎与地中海贫血 地中海贫血 1 静止型 地中海贫血2 标准型或轻型3 血红蛋白H病4 血红蛋白Bart s

8、胎儿水肿综合征 Chromosome16 Chromosome11 地中海贫血 血红蛋白H病临床表现 有轻 中度贫血 2 3以上病例有肝脾肿大 常反复出现黄疸 父母双方常有 地中海贫血 实验室检查 有溶血性贫血的特征 骨髓中红细胞系统增生极度活跃 HbH明显增高 2 5 40 HBA2及HbF含量正常 Hb电泳可出现HbH区带 红细胞渗透脆性试验降低 红细胞包含体阳性 地中海贫血 血红蛋白Bart s胎儿水肿综合征临床表现 该病为 地中海贫血中最严重者 胎儿常于妊娠后期死亡或早产 胎儿生下时 全身水肿 皮肤苍白 黄疸 肝脾肿大 常于产后数小时内死亡 父母双方均有HbH病或标准型 地中海贫血 实

9、验室检查 有溶血性贫血的特征 骨髓红系增生活跃 红细胞形态靶形红细胞明显增多 外周血可见有核红细胞 Hb电泳 HbBart成分 8 抗碱Hb增加 Bart sHb Alk Ac 地中海贫血 地贫 HbH HbBart s HbC S HbA a Thalassemia 地中海贫血定义 由于 珠蛋白基因的突变 引起血红蛋白 链合成的减少或缺乏而形成的溶血性贫血 定位 基因在11号染色体上 每条染色体上有1个基因 重型 地贫 T T 重型 珠蛋白生成障碍性贫血 Cooley贫血 半周岁时出现贫血 肝脾肿大特殊面容 大头 颧骨突出 塌鼻梁 眼距过宽 脸浮肿轻型 地贫 T N 轻型 珠蛋白生成障碍性贫

10、血一般无任何临床症状 重型 地贫儿 N T N T N N N T N T T T 夫妇双方都是轻型 地贫携带者 每次怀孕有1 4的机会生育重型 地贫儿 如何筛查 地贫 筛查对象 地贫性状 和HbH病 筛查方法 血常规 Hb分析 地贫筛查阳性 地贫性状 MCV HbA2正常 或稍低 HbH病 MCV HbA2降低 HbH 地贫性状 HbH病 如何筛查 地贫 T N 筛查方法 血常规 Hb分析筛查阳性 MCV HbA2 3 5 T N CapillaryHemoglobinElectrophoresis HbE AmJClinPathol2008 130 824 831 二种仪器性能比较 琼脂糖

11、血红蛋白电泳 毛细管血红蛋白电泳 Chenetal TheNewEnglandJournalofMedicine2000 343 8 544 550 谷氨酰胺 31 非缺失型 地贫的人群筛查 确定筛查人群当一方为SEA携带者时 应筛查另一方是否携带非缺失型 地贫 非缺失型 地贫的人群筛查 筛查方法 MCV MCH Hb分析 基因诊断 2020 5 21 53 可编辑 Hb分析筛查CS HPLC敏感性76 2 76 2 76 2 Liaoetal Hemoglobin201034 175 Hb分析筛查CS Capillaryelectrophoresis SebiaCapillarys2 敏感性

12、100 Liaoetal Hemoglobin201034 175 SEBIACAPILLARYS2 血红蛋白异常变异体的电泳原理在电场作用下 不同的带电属性的分子移动能力也各有不同 HYDRAGELHbandCAPILLARYSHb有助于检测出具有临床意义的各类主要血红蛋白疾病 HYDRAGELACIDHb根据血红蛋白在不同酸碱度的琼脂糖胶体上的移动性的差异 从而对血红蛋疾病进行检测 各类血红蛋白的鉴定HbS HbC HbD HbE excessHbF HbH HbBart inthalassemia arethemostcommonabnormalhemoglobins 完整的血红蛋白鉴定

13、 需要在两种琼脂糖胶体上电泳条带进行对比 正常条带 3周新生儿的电泳条带 8周新生儿的电泳条带 AFSC电泳监控条带 HbF HbA52 7 HbF21 4 HbS18 8 HbA21 3 HbC5 8 HbS HbA HbA2 HbC S 型血红蛋白SickleCellsdisease 常见区域 地中海区域国家 非洲赤道区域国家 40 美洲非裔人群 10 印度西部 特征 变异体位置b6谷氨酸Glu negative 缬氨酸Val neutral 生物学症状 红细胞形状出现变异 形成镰刀型红细胞血红蛋白与氧气结合能力出现下降极易出现溶血现象和贫血症 临床特征 依照形态的不同有所改变 杂合子 镰

14、刀状细胞 一般无症状 HbA条带 50 70 HbS条带 30 50 HbA2条带 正常 纯合子 严重的溶血症状HbA条带 缺失HbS条带 80 100 HbA2条带 正常或增加 HbF条带大约占0 20 伴随HbS型血红蛋白 会同时出现 地中海贫血 HbC 或其他变异体 HPFH 脐带血的 S 纯合子 AFSCcontroloverlaying S HbA2 HbS HbF HeterozygousS C AFSCcontroloverlaying HbC HbS HbF HbA2 HeterozygoteA S HomozygoteSwithpresenceHbF 血红蛋白C 发现区域 在

15、黑人出现的非常普遍 非洲的西部和北部 意大利南部 西西里岛 描述 B6的突变 谷氨酸 negative 赖氨酸 positive 碱性缓冲液 总电荷减少 移动变慢 在琼脂糖中和A2在同一水平 在毛细管中比A2更靠近阴极 临床和生物学特性 形成靶型红细胞 杂合子 无症状 HbA条带 60 70 HbC条带 30 40 纯合子 中度溶血性贫血 巨脾症HbA条带 缺失HbC条带 95 100 如果同时出现HbS 和纯合子的镰刀细胞病一样病理学特征 杂合子A C HbA2 HbA HbC HeterozygoteA C HeterozygoteS C 血红蛋白D Punjab 发现区域及频率 多发现在

16、印度 描述 B121的突变谷氨酸 negative 谷氨酰胺 neutral D LosAngeles D Punjab 根据变异体的突变位置不同 会有6种HbD 碱性缓冲液 总电荷减少 在琼脂糖中比HBS移动的慢 在毛细管中比S更靠近阳极 临床和生物学特性 杂合子 无症状 仅仅在电泳中符合诊断 HbA条带 60 70 HbD条带 30 40 纯合子 非常轻微的贫血HbA条带 缺失HbD条带 100 HeterozygoteA D Punjab HEMOGLOBINE 常见区域 主要集中在东南亚地区 特性 变异出现位置b26谷氨酸Glu negative 赖氨酸Lys positive 临床表现和生物学特征 基因杂合体 无症状 HbAfraction 65 70 HbEfraction 30 35 基因纯合体 轻微异常 HbAfraction absenceHbEfraction 100 HomozygousHbE AFSCcontroloverlaying HbE HbA2 HeterozygoteA E HomozygoteHbE HbLepore b和d链重新组合形成的新型血红蛋